甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析

目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。     

电磁辐射对74例雷达操作员白细胞介素-6影响的初步观察

雷达操作人员是暴露在电磁辐射环境中的人群.本研究通过对白细胞介素-6(IL6)进行检测,以评估此类人员的健康情况.现报告如下.     

直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

目的 通过样品试验，得到优化的沙门氏菌检测方法。方法 在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上，将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果 直接ELISA方法结合PCR方法对城区141份水样、2002年春季饮食行业工作人员健康检查的1426份人粪便样品，并与常规国标方法对比，直接ELISA法的敏感性和特异性达100％和97．2％，PCR法的敏感性和特异性均为100％。通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试，最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。结论 PCR法的敏感性优于直接ELISA法。对大量样品采用直接ELISA筛检，除去大量阴性样品，阳性样品用PCR法作进一步鉴定；需要确定血清型时则用国标方法。     

自制康肤膏外治银屑病56例

银屑病为慢性顽固性疾病，临床较难治疗，笔者在1992年9月～1998年5月收治56树银屑病患者，用自制康肤育外敷治疗，疗效满意，现报道如下。1一般出抒本组56例患者，男39例，女17例；年龄最大66岁，最'J＼13岁；病情处于进行期42例，赢止期14例；病程还长的48Q，最短的1个月（其中10。内占79％）；本组病例中寻常型39例，脏疤型12例，关节型2例，红皮病型3例；中医辨证以血任到为最多，占43例，血热证32例，血浓证18例，曲养证12例，冈湿证2例，其中血热、血煤均衡阳，和各证复合发作；患者多经过其它方法多年治疗效果欠佳或愈后复发。2治疗…     

纵隔恶性蝾螈瘤1例

病人 男,26岁.胸痛,胸部CT扫描发现前上纵隔内巨大占位性病变(图1).2005年9月经胸骨正中切口行开胸手术.术中见前上纵隔肿块约10 cm×10 cm×10 cm大小,包膜不完整.右侧第2肋间胸骨旁肿物向外生长至皮下.手术完整切除肿瘤.     

麦门冬汤新用

麦门冬汤新用黄金林，邓宝康麦门冬汤出自《金匮要略》，是为肺痿之属于虚热者而设。具有清养肺胃、止逆下气之功。笔者在临床中运用此方治疗气阴两伤、虚火上炎所引起多种病证，每获良效，兹介绍如下。１咳嗽杨×，女，７１岁。经常咳嗽，反复发作已十余年，近月来咳嗽频...     

电磁辐射对37例雷达兵血清睾酮的影响

目的调查电磁辐射环境对雷达兵血清睾酮的影响。方法对海军某部雷达兵37名,按暴露在电磁辐射环境下2年以上为研究组,与非暴露在电磁辐射环境下人员34名进行对照。对两组人员抽取血液检测血清睾酮,将所检测数据应用第四军医大学统计软件NoSA进行统计学处理。结果研究组与对照组睾酮值间有显著性差异(4．675)。结论电磁辐射对人体有害,长期暴露在电磁辐射下的雷达兵血清睾酮水平降低。     

抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量的监测及流行病学调查等奠定了基础     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。     

抗李斯特菌溶血素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的: 研制抗李斯特菌溶血素(LLO)的单克隆抗体(mAb).方法: 通过诱导重组大肠杆菌BL21(pGEX-6p-1-hly), 以SDS-PAGE分离菌体蛋白, 切割目的蛋白LLO-GST条带, 研磨粉碎后免疫BALB/c小鼠, 取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合.利用亲和层析法纯化目的蛋白, 作为检测抗原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定腹水效价, Dot-ELISA、 Western blot分析mAb的特异性.结果: 获得3株稳定分泌抗LLO mAb的杂交瘤细胞株3B6、 4D1、 5D10, 其Ig亚类均为IgG1.3B6、 4D1、 5D10腹水的ELISA效价分别为1:2×105、 1:2×105、 1∶1×105.Western blot试验中, 3株mAb均能与融合蛋白LLO-GST发生反应出现特异性条带, 而与纯化蛋白GST不反应.在Dot-ELISA试验中, 3株mAb均能与表达LLO的细菌发生特异性反应.结果表明, mAb 3B6、 4D1、 5D10是针对LLO的特异性mAb.结论: 成功地制备了抗LLO的mAb, 为进一步研究LLO的生物学特性、产单核细胞李斯特菌的致病机制, 以及建立产单核细胞李斯特菌(LM)快速检测技术奠定了基础.