一氧化氮合酶反义RNA重组腺相关病毒载体体外提高PC12细胞耐缺氧的能力

目的探讨2种分别携带神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）反义RNA重组腺相关病毒载体（rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS）提高PC12细胞耐氧能力和抑制PC12细胞凋亡的作用机制。方法将PC12细胞培养基换成分别含有rAAV—AsnNOS、rAAV-Asi—NOS和rAAV-LacZ（携带β-半乳糖苷酶的结构基因重组腺相关病毒载体）的10％胎牛血清DMEM，设立对照组，测定不同rAAV转染后PCI2细胞在不同缺氧时间下细胞生长趋势和乳酸脱氢酶（LDH）活性改变，流式细胞仪（FCM）测定细胞凋亡率，FCM和半定量RT—PCR分别分析nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA的表达。结果一定感染复数的rAAV对PC12细胞生长趋势无明显影响；转染rAAV-AsnNOS的PC12细胞在缺氧1—6h时LDH活性、细胞凋亡率以及nNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组均降低；转染rAAV—AsiNOS的PC12细胞在缺氧6～24h时LDH活性、细胞凋亡率以及iNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量也均较对照组、rAAV—LacZ组和rAAV-AsnNOS组降低。结论在体外神经细胞缺氧模型中，转染后PC12细胞能够耐受缺氧损伤；转染rAAV-AsnNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧早期抑制nNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达，转染rAAV-AsiNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧晚期抑制iNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达。     

热休克因子1及多种热休克蛋白在人良性脑膜瘤中的表达

目的探讨人良性脑膜瘤细胞中热休克因子1（HSF1）及热休克蛋白（HSP）HSP27、HSP70和HSP90的表达。方法应用免疫组化法和western blot法检测15例人脑膜瘤原代培养细胞中HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白的表达。结果15例人脑膜瘤中，HSF1蛋白以单体形式存在（分子量为80kD左右），阳性率为100％（15／15），HSP27、HSP70和HSP90阳性率分别为40％（6／15）、46．7％（7／15）和53．3％（8／15）。结论人良性脑膜瘤存在HSF1蛋白表达，而HSP27、HSP70和HSP90组成型表达水平低。     

不同程度永久性脊髓缺血动物模型的建立

腹主动脉结扎建立的脊髓缺血动物模型,存在着缺血性和淤血性并发症.我们选择性结扎兔不同水平的腰动脉,建立不同程度的脊髓缺血动物模型.     

姜黄素抑制裸鼠皮下移植胶质瘤生长

目的 探讨姜黄素对体内人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用.方法 建立人脑胶质瘤细胞U251裸鼠皮下移植瘤模型后随机分为对照(C)组、姜黄素100 mg/kg治疗(A)组和姜黄素50 mg/kg治疗(B)组.腹腔注射给药30 d,观察姜黄素治疗对移植瘤的体积抑制率和重量抑制率.治疗结束后收集各组皮下移植瘤组织,Western blot法检测c-los蛋白、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)表达.结果 A、B两组移植瘤体积抑制率分别为62.4%、38.9%,重量抑制率分别为60.6%、36.4%.A、B两组肿瘤c-fos蛋白表达水平均明显低于C组,A组p-ERK蛋白水平明显低于C组.结论 姜黄素对体内人脑胶质瘤细胞U251的生长有显著抑制作用.这可能与阻滞ERK信号通路有关.     

神经节苷酯对大鼠脑缺血神经细胞凋亡的影响

目的研究神经节苷脂(GM)对大鼠脑缺血神经细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,♂SD大鼠,随机分成假手术组、模型对照组、GM低、中、高剂量治疗组,缺血48 h后各组大鼠神经功能缺陷评分,测定脑组织一氧化氮(NO)的含量,检测脑细胞凋亡率,分析脑缺血区诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和Caspase-3 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型对照组、GM低、中、高剂量治疗组神经功能缺陷评分、NO含量、凋亡率、iNOS和Caspase-3表达量均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组和GM低剂量治疗组比较,GM中、高剂量治疗组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);模型对照组和GM低剂量治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05),GM中剂量治疗组和高剂量治疗组之间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论神经节苷酯减少iN-OS生成,抑制细胞凋亡,对缺血神经细胞产生保护作用。     

DAPT抑制人胶质瘤细胞增殖的体内外实验研究

目的研究Notch信号通路抑制剂DAPT对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用不同剂量DAPT处理胶质瘤细胞系U251,噻唑蓝（MTT）比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,建立人胶质瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况。结果DAPT呈剂量依赖性抑制U251细胞增殖,在浓度为0．25μmol／L时即有抑制作用,浓度为5．00μmol／L抑制效果更明显;随DAPT浓度增大G0／G1期细胞比率明显增多（P〈0．01）,而S期细胞比率明显减少（P〈0．01）,使细胞周期阻滞于G0／G1期;用药6周后DAPT处理组裸鼠皮下肿瘤体积明显缩小,平均瘤重对照组为（2．23±0．54）g,DAPT组为（0．97±0．29）g（P〈0．01）,抑瘤率为56．50％。结论DAPT通过阻断Notch信号通路,在体内外有效地抑制人胶质瘤细胞的增殖,提示抑制Notch信号通路的活性可能对胶质瘤的治疗起到一定的作用。     

显微手术治疗血栓性脑动脉瘤(附21例报告)

目的探讨进一步提高血栓性脑动脉瘤的治疗效果。方法本组21例血栓性脑动脉瘤均在气管插管全麻下施行手术,行动脉瘤颈夹闭术7例,瘤颈塑形后夹闭12例,其中夹闭后切除动脉瘤16例。另2例行动脉瘤包裹加固术。结果全部病例手术结束后均即时清醒,术后偏瘫加重2例,24 h后出现不同程度偏瘫4例,CT显示局部血管痉挛以致相应的局限性低密度灶,出院时均有明显的恢复。随访6~39个月,恢复良好17例,轻残3例,重残1例,无死亡。结论瘤颈夹闭术仍是血栓性脑动脉瘤的最佳治疗方法,对有局部占位效应明显的巨大型血栓性动脉瘤,在不造成附加损伤的前提下应切开动脉瘤剥离出血栓或切除动脉瘤,以促进术后神经功能的恢复。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在大鼠局灶性脑缺血中的表达特点

目的建立脑缺血SD大鼠模型,探讨一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血模型中的表达特点。方法应用线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,根据缺血不同时间分为8组,设立假手术组和正常对照组,每组各有6只大鼠。应用硝酸还原酶法测定脑组织NO的含量,流式细胞术(FCM)定量检测硝基酪氨酸(NT)表达,化学比色法测定脑组织NOS的活性,免疫组织化学方法定位检测eNOS、nNOS和iNOS表达位置,逆转录反应系统(RT-PCR)半定量分析eNOS、nNOS和iNOS的 mRNA在脑缺血区域的表达。结果神经功能缺失评分发现缺血时间越长,神经功能缺失越明显;脑组织中NO含量与缺血时间正相关;缺血1h后NT阳性细胞百分比开始明显升高(9.50%);缺血0.5h时NOS的活性开始升高,缺血3d达到高峰[0.94nmol/(g.min)];免疫组织化学提示eNOS在神经细胞和血管内皮细胞胞浆均有表达,nNOS和iNOS抗体主要在神经细胞胞浆中表达;RT-PCR半定量分析在缺血早期(0.5h~6h),随着缺血时间延长,eNOS和nNOS表达增加,iNOS未见表达或低表达;缺血中晚期(6h~5d),iNOS高表达,并与缺血时间呈正相关,eNOS和nNOS表达明显减少。结论脑缺血时间延长,NOS的活性升高,NO在体内特异性代谢产物NT量增加,神经功能缺失越明显;NOS在缺血早期以eNOS和nNOS为主,在缺血晚期以iNOS为主。     

碘水剂椎管造影误入硬膜下腔的影像学分析

目的：观察碘水剂椎管造影误入硬膜下腔的Ｘ线造影表现,并分析了其误入原因和鉴别诊断方法。方法：从２８１例椎管造影中发现７例经脊髓造影ＣＴ（ＣＴＭ）证实有造影剂误入硬膜下腔者,进行Ｘ线征象分析,结果：发现其造影呈多样化影像表现,可产生多种假象,７例椎管造影中,假性硬膜外梗阻征５例,假性血管畸形４例,马尾神经不显影者５例等。结论：碘水剂椎管造影误入硬膜下的Ｘ线造影表现极易误诊硬膜外梗阻和血管畸形,充分认     

榄香烯抑制人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达及其影响细胞凋亡机制的研究

目的:探讨榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达及其影响细胞凋亡的机制.方法:应用榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株,应用MTT法检测细胞增殖抑制试验,并求出半数致死浓度(IC50),倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期的变化,凝胶电泳检测凋亡梯度,免疫荧光技术观察凋亡小体,免疫组织化学检测c-myc蛋白和RT-PCR检测c-myc基因的表达.结果:榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062mg/ml,倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小,电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体,流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞株周期中S期向G2/M期的转变过程,减少有丝分裂,并引起细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳获得清晰的凋亡特征性梯形条带,免疫荧光技术观察凋亡小体,免疫组织化学和RT-PCR分别证实榄香烯抑制c-myc蛋白和c-myc基因的表达.结论:榄香烯可抑制人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达,并通过下调U251细胞株的凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖.