Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。     

家兔毒死蜱染毒的毒物代谢动力学研究

目的探讨单次静脉注射和灌胃毒死蜱后,毒死蜱在家兔体内的毒代动力学过程。方法分别以2和10 mg/kg·bw剂量给家兔静脉注射染毒,分别以100和500 mg/kg·bw剂量给家兔灌胃染毒,于给药后不同时间采集血液样本;应用气相色谱法测定各样本中毒死蜱及其特异性代谢产物的含量,用DAS 3.0软件计算毒代动力学参数。结果毒死蜱经静脉染毒2 mg/kg·bw组非房室模型统计矩参数血浆中峰浓度为(1.83±0.43)mg/L;半衰期为(7.03±3.26)h;浓度曲线下面积为(0.53±0.19)mg/L×h。10 mg/kg组非房室模型统计矩参数血浆中峰浓度为(2.95±1.10)mg/L;半衰期为(10.91±2.21)h;浓度曲线下面积为(2.13±0.45)mg/L×h。毒死蜱经口染毒100 mg/kg组非房室模型统计矩参数血浆中峰浓度为(1.21±0.42)mg/L;半衰期为(13.58±11.18)h;浓度曲线下面积为(2.80±0.91)mg/L×h。500 mg/kg·bw组非房室模型统计矩参数血浆中峰浓度为(6.38±1.26)mg/L;半衰期为(22.07±7.73)h;浓度曲线下面积为(154.06±43.69)mg/L×h。结论毒死蜱经静脉染毒在家兔体内的变化过程符合二室模型,经口染毒符合三室模型。获得了不同染毒方式毒死蜱在家兔体内的毒代动力学参数。     

甲醛对雌性大鼠卵巢组织Fas凋亡途径 相关基因表达的影响

目的：观察甲醛对雌性大鼠卵巢组织Fas,caspase-8和caspase-3表达的影响,探讨甲醛对雌性大鼠卵巢毒性的分子机制。方法：将40只雌性SD大鼠随机分为正常对照组和3个不同浓度甲醛处理组, 腹腔注射甲醛, 剂量分别为20.0,2.0和0.2 mg/kg, 每天1次,连续14 d后处死所有大鼠后取卵巢组织,用RT-PCR检测Fas和caspase-8 mRNA表达,Western印迹检测Fas蛋白表达,分光光度法检测caspase-8和caspase-3的活性。结果：甲醛染毒组动物卵巢组织Fas与caspase-8 mRNA表达以及caspase-8和caspase-3活性明显高于对照组,且随剂量的增加而增加（P＜0.05）。结论：Fas基因表达与caspase活性的增强可能是甲醛诱导雌性动物卵巢毒性的重要机制。     

维生素C在拮抗Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞毒性中的时序效应

目的探讨在体外实验系统中维生素C在拮抗六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导L-02肝细胞毒性的时序效应。方法实验设对照组、Cr(Ⅵ)组、维生素C组及二者不同时序联合作用组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,通过回归方程求出各组细胞生长半数抑制浓度(IC50)。结果维生素C组IC50为354.21μmol/L;Cr(Ⅵ)组IC50为35.65μmol/L;维生素C与Cr(Ⅵ)同时加入时,IC50为5 111.79μmol/L;Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理时,IC50为1 392.51μmol/L;维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒时,IC50为3 247.79μmol/L。维生素C与Cr(Ⅵ)联合作用组IC50均明显高于Cr(Ⅵ)单独染毒组,其差异有非常显著性(P<0.01)。维生素C与Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞的IC50值顺序为:两者同时加入试验组>维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒组>Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理组。结论无论哪一种顺序加入维生素C对Cr(Ⅵ)所致的细胞毒性均具有拮抗作用,如果与Cr(Ⅵ)同时加入,维生素C对Cr(Ⅵ)诱导的细胞毒性的拮抗作用更强。