优化利奈唑胺、替考拉宁和达托霉素治疗葡萄球菌属血流感染给药方案的蒙特卡洛模拟研究

目的:通过蒙特卡洛模拟预测和评价利奈唑胺、替考拉宁和达托霉素对葡萄球菌属血流感染的抗菌效果,优化临床给药方案。方法:借助全国血流感染细菌耐药监测联盟(Blood Bacterial Resistant Investigation Collaborative System,BRICS)平台收集2018年1月至2019年1...     

大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。     

血培养标本中病原菌分布及耐药性分析北大核心CSCD

目的分析医院血流感染主要病原菌种类及耐药性情况。方法对医院2014年1月-2016年12月送检标本的培养分离和药敏结果进行回顾性统计分析,统计致病菌的分布和药物敏感性。结果 2014年1月-2016年12月医院共送检21085份标本,阳性标本1661份,阳性率7.88%,共分离病原菌1 448株,其中革兰阳性菌796株占54.97%,革兰阴性菌611株占42.20%,真菌41株占2.83%;儿科病原菌所占比例最高占37.15%,其他依次为ICU占13.12%、感染性疾病科占7.60%、血液病科占4.70%;检出率较高的病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌占35.64%、大肠埃希菌占16.85%、肺炎克雷伯菌占8.77%,未检出耐万古霉素、利奈唑胺、达托霉素的葡萄球菌,但对青霉素和红霉素高度耐药,大肠埃希菌对三代头孢菌素的耐药率高于60.00%,而对碳青霉烯类抗菌药耐药率低于5.00%,肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素的耐药率高于40.00%,有高于10.00%对碳青霉烯类耐药。结论医院血流感染病原菌检出率低,病原菌构成多变,普遍存在耐药情况。因此了解血培养病原菌的分布及药敏情况,对临床合理用药有重要意义。     

酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-PML-V的构建、表达及鉴定

目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytie leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础.方法:PCR扩增PML-V,克隆人诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PML-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用.结果:成功扩增了PML-V基因片断,并克隆人pGBKT7中,测序结果正确.诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性、渗漏和自激活作用,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白.结论:成功构建了PML-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础.     

Survivin基因诱饵表达载体的构建和鉴定

目的 构建Survivin基因诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础.方法 从人K562细胞中提取总RNA作为模板,逆转录得到Survivin cDNA,通过特异引物扩增Survivin基因的ORF区,然后与诱饵表达载体pGBKT7连接,构建诱饵表达载体pGBKT7-Survivin,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-Survivin转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果 成功扩增了Survivin基因的ORF区,并成功将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果 正确.诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白.结论 成功构建了Survivin基因的ORF区的酵母诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础.     

JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。     

大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验

目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。     

核受体介导细胞增殖分化与凋亡的作用机制研究进展

核受体是配体依赖性的转录因子,广泛存在于细胞内,主要分为激素类核受体与孤儿核受体。它们与机体的生长发育,细胞的增殖、分化与凋亡,以及体内众多生理、物质代谢及肿瘤形成过程中基因表达的调控有很大关系。现就核受体介导细胞增殖、分化与凋亡的作用机制研究进展做一综述。     

维甲酸受体变异蛋白酵母双杂交诱饵载体构建

目的 构建维甲酸受体变异蛋白(RARα-V)的诱饵表达载体.为应用酵母双杂交系统筛选与RARα-V相互作用的蛋白建立实验基础.方法 PCR扩增RARα-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,将构建好的诱饵载体pG-BKT7一RARα-v转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用.结果 成功扩增了RARα-V基因片断,并克隆入pGBKT7中,测序结果正确.诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性,无自激活和渗漏,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白.结论 成功构建了RARα-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供基础依据.     

304例耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌医院感染流行病学特征与干预措施及效果

目的 了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)医院感染流行病学特征并对干预措施效果进行评价。方法 采用医院感染监测系统收集2014年1月-2020年12月检出CRE患者信息并进行流行病学特征分析,并建立“感控+临床+医技”多学科协作干预模式,遏制CRE感染的增长。结果 7年共监测住院患者634 228例,CRE医院感染304例,感染发现率为0.048%。不同年份及季度CRE感染呈现波动性;男性CRE感染发现率高于女性(χ²=54.40,P<0.001),≥65岁老年患者CRE感染发现率为<65岁患者的3.10倍(χ²=102.91,P<0.001);感染部位以下呼吸道为主,占59.54%,病原菌以肺炎克雷伯菌为主,占总体79.93%。科室分布以ICU为主,占50.66%。干预后,CRE感染发现率由0.070%降至0.044%(χ²=9.890,P=0.002)。结论 通过开展CRE医院感染流行病学特征研究可找出相应高危人群、高危科室等,建立多学科协作防控,可以实现CRE医院感染有效控制。