小鼠卵子老化过程中皮质颗粒的变化和自发孤雌激活的研究

目的:通过卵子老化过程中皮质颗粒的变化和自发孤雌激活比例,探讨老化卵子受精异常的原因。方法:对8～10周龄雌鼠注射孕马血清促性腺激素和绒毛膜促性腺激素14h后,于不同时间段取出MII期成熟卵子分作体内不同时间老化组(MII+0h、MII+6h、MII+12h、MII+18h);成熟MII+0h卵子取出后体外分别培养6h、12h、18h作为体外老化组。对各组卵子免疫荧光染色,共聚焦显微镜成像显示染色体形态和皮质颗粒分布。体内各组卵子取出后继续体外培养8h统计自发孤雌激活的比例和碎裂卵子数。结果:体内和体外MII+12h、MII+18h组自发皮质颗粒排放比例和皮质颗粒内迁数明显高于MII+0h、MII+6h组。体外MII+18h组自发皮质颗粒排放比例和皮质颗粒内迁数低于体内MII+18h组。体内MII+12h、MII+18h组卵子取出继续体外培养8h后孤雌激活比例和死亡比例明显高于体内MII+0h和MII+6h组。结论:卵子在老化过程中存在皮质颗粒自发排放和皮质颗粒内迁,以及自发孤雌激活和碎裂化,这些因素均可能导致老化卵受精能力的降低。卵子老化过程中皮质颗粒排放和内迁可能受到体内环境的影响。     

彩色多普勒超声检查子宫内膜在评价子宫内膜容受性中的价值

目的以反映子宫内膜容受性的形态学标志——胞饮突为金标准,探讨子宫内膜的彩色多普勒超声指标在评价子宫内膜容受性中的价值。方法试验组为16例体外受精-胚胎移植（IVF-ET）后失败的患者,健康对照组15例,自然月经周期中,LH峰出现日即（LH）d,采用彩色和能量多普勒超声检测子宫内膜血流灌注情况并行血流计数评分和血流面积百分比评分;扫描电镜观察（LH＋3）d～（LH＋9）d子宫内膜胞饮突的发育过程,计数完全发育胞饮突数量。结果完全发育的胞饮突出现在“种植窗”期,高倍扫描电镜下试验组完全发育胞饮突的数量较对照组显著减少（P=0.004）;试验组（LH）d子宫内膜血流计数、血流面积比评分均较对照组显著减少（均P=0.028）;（LH）d子宫内膜血流计数评分与完全发育的胞饮突数量呈正相关（r=0.803）。结论临近“种植窗”期,子宫内膜从超微结构、血流灌注水平呈相关性变化,提示彩色多普勒超声检测的子宫内膜血流计数、血流面积百分比评分可作为胞饮突的替代性指标,反映子宫内膜容受性。     

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COC1侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM，用DCM处理卵巢癌细胞株COC1，利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果 卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1)，而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P＜0．01)；早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1mRNA，且有显著差异（P＜0．00）。结论 DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMP-2／TIMP-2以及u-PA／PAI-1之间的平衡，从而降低卵巢癌细胞株COC1的侵袭能力。     

芳香化酶抑制剂在卵巢低反应者超促排卵中的作用

目的 研究芳香化酶抑制剂来曲唑对卵巢低反应者超促排卵效果的影响,并探讨其作用机制.方法 至少接受过1次超促排卵治疗,卵巢反应低下者45例,分为研究组24例,周期第1~3天口服来曲唑 2.5 mg,1次/d,周期第4天开始应用醋酸曲普瑞林及基因重组促卵泡激素超促排卵,按体外受精程序进行治疗;对照组21例不使用来曲唑,周期第4天开始治疗同研究组.两组均于第4天、注射绒毛膜促性腺激素(hCG)日抽取静脉血,检测促卵泡激素(FSH)、促黄体生成激素、雌二醇、总睾酮、抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素B,收集卵泡液,检测雌二醇、总睾酮、AMH、抑制素B,比较两组FSH使用总剂量、hCG日内膜厚度、获卵数、受精率、可移植胚胎数、胚胎种植率、临床妊娠率.结果 与对照组比较,研究组注射FSH总剂量减少,但差异无统计学意义(P>0.05),hCG日内膜厚度无明显降低,受精率、胚胎种植率、临床妊娠率无显著差异,但获卵数、可移植胚胎数显著增加(P<0.05).研究组第4天血清雌二醇水平显著降低(P<0.05),总睾酮、AMH、抑制素 B水平显著升高(P<0.05),血清FSH、促黄体生成激素无显著差异.hCG日血清总睾酮升高(P<0.05),其余指标均无显著差异.研究组取卵日卵泡液总睾酮、抑制素B水平较对照组显著升高(P<0.05),雌二醇及AMH水平无显著差异.结论 对于卵巢低反应者,超促排卵前短期低剂量应用芳香化酶抑制剂,通过提高血清或卵泡液内雄激素、AMH、抑制素B水平募集更多卵泡,可以使获卵数和可移植胚胎数增多,不改变内膜厚度和形态,对提高妊娠率起到有利作用.     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本巾的HPVL1区基因序列进行PCR扩增，根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78％，其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型，其LI区基因序列与德国标准株58型比对，未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法，并可检测到HPV少见的特殊类型，同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。     

PCOS患者胰岛素抵抗与INSR基因甲基化状态的关系

摘要：目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗与INSR基因甲基化状态之间的关系。方法PCOS患者35例,
根据HOMA指数诊断胰岛素抵抗（IR）分为胰岛素抵抗组（IR组）17例和非IR组18例。对比两组之间的年龄、体质量指数
(BMI)和腰臀比(WHR)、基础性激素睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）及催乳素（PRL）,空腹胰
岛素(FINS)和空腹血糖(FBG)和HOMA指数,利用甲基化特异性PCR技术检测两组患者子宫内膜INSR基因的DNA甲基
化状态,并进行统计分析。结果两组患者之间BMI、WHR、FINS、FBG、HOMA指数的比较差异有统计学意义（P<
0.05）,IR组的空腹胰岛素、BMI和WHR显著高于非IR组;两组患者之间年龄、FSH、LH、E2、T的比较差异无统计学意义
（P>0.05）。两组患者子宫内膜细胞提取的INSR基因经甲基化特异性PCR后,所有病例均未检出完全甲基化状态的特征
条带, 24例显示部分甲基化状态的特征条带,其中PCOS-IR组13例,PCOS-非IR组11例;11例显示非甲基化状态,其中
PCOS-IR组4例,PCOS-非IR组7例。比较了IR组与非IR组基因部分甲基化状态发生率, 未见统计学差异（P>0.05）。结
论PCOS患者存在子宫内膜INSR基因的部分甲基化改变,目前还不能证实IR引起子宫内膜局部INSR基因的甲基化模
式改变。     

反复体外受精-胚胎移植失败的原因分析和对策

辅助生殖的成功主要依靠移植胚胎的质量、移植期的子宫内膜的容受性以及两者间复杂的相互作用。本文从宫腔镜和子宫内膜活检的重要性、子宫内膜的容受性、胚胎质量和免疫因素等几方面进行综述。1 宫腔镜和子宫内膜活检的重要性胚胎成功种植必须排除子宫内影响其着床的各种病理因素。宫腔镜检查是评价不孕症患者子宫情况的有效方法。Giovanni用宫腔镜检查了100例有良好胚胎但2次以上IVF -ET失败的患者,发现18例存在比较严重的子宫病变,包括部分纵隔、中度粘连、黏膜下肌瘤、子宫内膜息肉和内膜钙化等;子宫内膜活检又显示1例慢性子宫内膜炎和1例结核性子宫内膜炎。可见子宫内膜活检是宫腔镜检查的重要补充。有文献报道对IVF-ET失败的患者进行子宫内膜活检后的妊娠率显著增加,原因可能是清除了子宫内膜病变,改善了其容受性。     

印迹抑癌基因ARHI在浆液性卵巢癌中的表达及甲基化研究

目的研究浆液性卵巢癌组织中印迹抑癌基因ARHI mRNA的表达及其3个CpG岛的甲基化状态,以探讨ARHI基因及其甲基化修饰在卵巢上皮癌发生机制中的作用。方法正常卵巢及浆液性卵巢癌标本各20例,采用半定量RT-PCR方法检测ARHI mRNA表达,采用DNA亚硫酸盐修饰、PCR扩增及甲基化敏感性内切酶方法检测ARHI基因3个CpG岛的甲基化状态。结果ARHI/G3PDH在正常卵巢组织中为0.73±0.09,浆液性卵巢癌中为0.43±0.37(P<0.01)。正常卵巢组织的3个CpG岛均同时扩增出ARHI甲基化和非甲基化产物,呈正常半甲基化状态;浆液性卵巢癌的3个CpG岛则存在不同比例的甲基化异常,其中6例(30%)CpGⅠ、8例(40%)CpGⅡ、5例(25%)CpGⅢ处于高度甲基化状态。在浆液性卵巢癌组织中,8例ARHI基因表达缺失者均存在CpG岛的高度甲基化,其余12例中有5例存在CpG岛的高度甲基化,表达缺失者中CpG岛的高度甲基化率显著增高(P<0.01)。结论印迹抑癌基因ARHI启动子及编码区的3个CpG岛在浆液性卵巢癌组织中存在甲基化异常,并抑制了该基因的表达。     

多胎妊娠经阴道行选择性减胎术10例报告

随着促排卵药物和助孕技术的广泛应用,多胎妊娠的发生率逐渐升高。3胎以上的高序列多胎妊娠的母婴发病率、早产率、新生儿死亡率较高,因此应避免高序列多股妊娠。我们报道多胎妊娠经明道行选择性减胎术成功10例。l临床资料1．1患者情况10例患者年龄24～47岁,不孕期3～5年,3例为天排卵患者,用HMG／hCG促排卵,多印泡发育（316mm的卵泡数为4～6个）,于hCG后24h行性生活。7例为体夕十受精一胚胎移植（IVF-ET）患者,每例移植3～6（4．9士1．2）个胚胎。10例患者于妊娠6～7周时B超证实为3～6（4．3士0．82＄妊娠。1．2减胎术的操作1…     

对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生。方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6~10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位杂交技术(FISH)进行胚胎种植前遗传学诊断(PGD),挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫。结果共对8个胚胎进行PGD,7个有诊断结果者中6个为正常胚胎、1个为21三体胚胎。挑选3个胚胎移植,获得妊娠并产下一健康男婴。结论应用FISH对染色体数目异常的遗传疾病,如21三体综合征,进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的。