血清培养基辅以碱性成纤维细胞生长因子培养扩增小鼠神经干细胞

背景:神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞,是研究神经系统的发生、发育、发展规律及其内在的分子生物学、细胞学调控机制的理想载体,在神经系统疾病及损伤的治疗中具有广阔的应用前景。探讨一套较为简便、有效和实用的神经干细胞体外培养体系是其应用的前提和基础。目的:观察血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子对小鼠神经干细胞体外培养的影响。设计:单一样本观察。单位:右江民族医学院组织学与胚胎学教研室。材料:2个月龄昆明种小白鼠5只,雌雄不拘。方法:实验于2003-06/2005-05在广西医科大学组织学与胚胎学试验室完成。①采用贴壁培养法,从成年小鼠大脑皮层分离并体外培养成年小鼠大脑皮层细胞,制成细胞悬液后将其置入DMEM/F12(1∶1)液(包括体积分数为0.15的胎牛血清,碱性成纤维细胞生长因子20μg/L,青霉素100u/mL和链霉素100u/mL)培养,获得细胞克隆。②应用免疫组织化学技术检测克隆细胞巢蛋白的表达。主要观察指标:①培养细胞形态学观察。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果。③神经干细胞鉴定。结果:①培养细胞形态学观察:细胞接种后,绝大多数细胞在12h内附壁,细胞变扁平,接种后第3天,细胞开始生长,细胞数量增多,接种后第5天时生长成为数10个细胞到数百个细胞克隆,到第七八天,细胞占据瓶底80%～90%。经传代后仍成黏附生长,细胞形态规则,边界清楚。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果:可见细胞圆形或椭圆形,胞质少呈嗜酸性,细胞核大而圆,单个居中,着色深。③神经干细胞鉴定:免疫荧光检测显示,细胞巢蛋白抗原呈阳性。结论:分离的小鼠大脑皮层细胞在血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子的培养条件下,具有很强的增殖能力,传代后表达巢蛋白,依然具有神经干细胞的特征。     

失血性休克-再灌流后期大鼠肝脏细胞色素P450的变化

目的：研究大鼠在失血性休克－再灌流后期大鼠肝脏中细胞色素P450的变化，探讨细胞色素P450与肝脏在再灌注后期损伤的关系。方法：建立失血性休克大鼠模型，随机分为休克再灌流组、对照组和假休克组，检测肝脏的P450和细胞色素b5的含量、氨基比林－N－去甲基酶的活性水平、丙二醛。结果：休克再灌注组中的细胞色素P450的含量和氨基比林－N－去甲基酶的活性水平明显高于对照组和假休克组，丙二醛也高于其他组，而细胞色素b5各组无差异。结论：细胞色素P450也参与了失血性休克－再灌流后期大鼠肝脏的损伤。     

老年慢性阻塞性肺病患者INF-γ与IL-18细胞因子水平表达

目的:观察急性发作期以及缓解期的老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者INF-γ与IL-18细胞因子水平表达变化.方法:选择急性发作期以及缓解期的老年慢性支气管炎患者23例,采用竞争放射免疫法与双抗体夹心酶联免疫吸附法检测INF-γ与IL-18水平,并进行急性发作期INF-γ和IL-18水平与白细胞计数、分类的相关性分析.结果:在老年COPD患者急性加重期的IL-18与IFN-γ水平分别为(24.14±9.81)ng/L和(220.47±70.71)ng/L,均显著高于缓解期和正常对照组水平,但与患者急性发作期白细胞中淋巴细胞、粒细胞计数、分类无明显相关性.结论:IL-18与IFN-γ参与COPD急性加重期的气道炎症,而与白细胞数量变化无显著相关.     

螺旋藻多糖对肝癌细胞BEL741M增殖的影响

目的 研究螺旋藻多糖对对肝癌细胞增殖的影响,以探讨其抗肝癌机制.方法 体外培养肝癌细胞株BELT404,用MTT法检测螺旋藻多糖作用于BEL7404 24 h后的细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响和凋亡率.结果 MTT法测定结果表明,螺旋藻多糖对BELT404增殖有抑制作用;FCM检测表明,螺旋藻多糖引起增殖中的BEL7404细胞发生G1期阻滞.结论螺旋藻多糖能有效地抑制BEL7404细胞增殖,提示阻滞细胞周期、抑制细胞增殖可能是螺旋藻多糖治疗肝癌的一个机制.     

N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺的合成及其抗肿瘤作用的研究

目的 首次合成未见报道的N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺,探讨其体内外抗肿瘤活性.方法 ①以芥酸和双(2-氯乙基)胺盐酸盐为原料、吡啶为催化剂合成N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺,分离纯化后核磁共振谱确证结构;②用N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺作用于Tca8113,用倒置显微镜镜下观察其对Tca8113细胞的生长状况的影响,PI染色经流式细胞术分析其杀伤效应;③S180小鼠动物肿瘤模型观察N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺对肿瘤的体内抑制作用.结果 合成出了N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺并确证了其结构;N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺于体外0.15～10.0 μg/ml的浓度范围对Tca8113有较强的杀伤效应,杀伤率均超过30%,但与浓度递增无明显的正相关,在100.0 μg/ml以上的浓度反而杀伤效果不佳;体内抑制S180的生长,剂量为5 mg/kg时,抑制作用最好,生命延长率为38.20%,体重平均增长速率为2.45%.结论 采用微型合成法能够快速、方便地合成出N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺;N,N-二(2-氯乙基)芥酸酰胺在在体内外具有明显的抗肿瘤活性.     

氨溴索对急性肺损伤的保护作用

目的 通过建立急性肺损伤大鼠模型和体外肺泡巨噬细胞培养体系,观察急性肺损伤中,肺泡巨噬细胞在氨溴索干预前后细胞因子表达的情况,探讨氨溴索可能的肺损伤保护机制.方法 一、体内实验:大鼠24只,随机分成3组,每组8只:(1)正常对照组;(2)急性肺损伤组:采用腹腔注射酵母悬液方法复制大鼠急性肺损伤模型;(3)氨溴索治疗组:建立ALI大鼠模型后用氨溴索干预.观察指标主要有:肺部病理学改变、测量大鼠肺系数、血氧分压,肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达则采用通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.二、体外实验:收集肺泡巨噬细胞后分3组:(1)正常对照组:肺泡巨噬细胞中加无菌生理盐水;(2)LPS组:予LPS 10 mg/L刺激肺泡巨噬细胞;(3)LPS+氨溴索组:予LPS10 mg/L和氨溴索180 μmol/L刺激肺泡巨噬细胞.分别于刺激前(0 h),刺激后(6、12、24 h)留取细胞.通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达变化.结果 氨溴索治疗组在病理改变,肺系数,动脉血氧分压等各项指标均优于急性肺损伤组,氨溴索干预治疗组,TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA表达水平均明显下降,与急性肺损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但仍高于正常对照组.体外实验也得出了相同的结论.结论 氨溴索可抑制急性肺损伤或LPS刺激的肺泡巨噬细胞TNF=α、IL-10、IL-24细胞因子mRNA的表达水平.     

人脑星形细胞瘤中p53、bcl-2基因表达的研究

目的探讨p53、bcl-2基因在人脑星形细胞瘤发生发展中的作用,以及上述基因蛋白检测对星形细胞瘤的诊断、分级的临床意义.方法采用免疫组化S-P染色法对47例人脑星形细胞瘤组织蜡块标本进行p53、bcl-2基因蛋白检测.结果47例脑星形细胞瘤中p53、bcl-2蛋白的阳性率分别为48.9%(23/47)、57.4%(27/46),其中多形性胶质母细胞瘤的p53基因蛋白阳性水平高于星行细胞瘤,而bcl-2蛋白阳性水平则是星行细胞瘤高于多形性胶质母细胞瘤.结论p53、bcl-2基因的异常表达与人脑星形细胞瘤的发生、发展有密切关系,对星形细胞瘤的病理分级和预后判断有积极的意义.     

芥酸乙醇酰胺的微型有机合成及其抑制BEL-7404细胞作用的研究

目的探讨合成芥酸乙醇酰胺对人肝癌细胞BEL-7404的抑制作用。方法（1）运用微型有机合成技术,以芥酸、甲醇和乙醇胺为原料、金属钠为催化剂合成芥酸乙醇酰胺,采用硅胶柱层析分离纯化,红外光谱和核磁共振谱确证结构;（2）用芥酸乙醇酰胺作用于BEL3404,用倒置显微镜镜下观察其对BEL-7404细胞的生长状况的影响,MTT法观察其抑制作用。结果合成出了芥酸乙醇酰胺并确证了其结构;芥酸乙醇酰胺浓度在50．0μg／ml以上时,能很明显的抑制BEL-404的增殖,抑制率均高于40％,IC50为101．77588μs／ml。结论采用微型合成法能够快速、方便地合成出芥酸乙醇酰胺;芥酸乙醇酰胺对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。     

2型糖尿病KKAY小鼠胰岛β细胞凋亡与胰岛素水平关系的研究

目的 :探讨 2型糖尿病发病的机制 ,并了解 APP- 17肽、APP- 11肽、胰岛素对胰岛 β细胞凋亡率及功能的影响。方法 :将30只 2型糖尿病小鼠随机分为 4组 ,其中 3组被分别注射 APP- 17肽、APP- 11肽和胰岛素 ,另 1组未用药 ,并设 6只非糖尿病KKAY小鼠为正常对照组。 6个月后 ,用原位末端转移法 (TUNEL)对各组胰岛 β细胞进行观察 ,计算凋亡胰岛 β细胞的阳性率 ;并用放射免疫法检测胰岛素的水平。结果 :2型糖尿病小鼠未用药组胰岛 β细胞凋亡率 (5 6 .2 4± 2 .38) %显著高于正常对照组 (47.38± 3.6 5 ) % (P <0 .0 5 ) ,APP- 17肽、APP- 11肽组胰岛 β细胞的凋亡率分别为 (49.96± 2 .6 9) % ,(5 1.2 0± 2 .2 7) % ,显著低于 2型糖尿病小鼠未用药组 (P均≤ 0 .0 5 ) ;胰岛素组胰岛 β细胞的凋亡率为 (5 2 .84± 4 .5 6 ) % ,绝对值低于 2型糖尿病小鼠未用药组 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5 )。胰岛 β细胞凋亡率在 (47.38± 3.6 5 ) %～ (5 6 .5 4± 2 .38) %时 ,所检测的胰岛素水平无显著性差异。结论 :胰岛 β细胞凋亡是 2型糖尿病的发病机制 ,APP- 17肽、APP- 11肽、胰岛素可减少胰岛 β细胞的凋亡     

RECK蛋白表达与舌鳞癌淋巴结转移和浸润的相关研究

目的:探讨RECK蛋白表达水平与舌癌侵润和淋巴转移的关系.方法:选取舌癌标本59例,采用免疫组化与图像分析系统,检测RECK、MMP-9蛋白表达情况,并与舌癌的临床特征进行相关分析.结果:RECK蛋白的低表达水平与舌癌的浸润和淋巴结转移有关,而且与MMP-9蛋白表达水平呈负相关,相关系数为-0.415.结论:RECK蛋白高水平表达可降低舌癌的侵袭与转移,其调控机制可能与RECK蛋白可能抑制MMP-9蛋白表达有关.