血清抗AT_1-受体自身抗体在难治性高血压患者中的病理作用及临床干预研究

目的 :本文探讨了抗AT1 -受体的自身抗体在难治性高血压中的存在及临床干预措施和效果。方法与结果 :根据美国JNC -Ⅵ的诊断标准 ,收集了 58例难治性高血压病人 ,96例非难治性高血压病人及 40例正常血压对照者 ;性别及年龄因素匹配。人工合成AT1 -受体胞外第二环肽片段作为抗原 ,以ELISA法检测入选病人及对照组血清中的抗AT1 -受体抗体 ,在上述 3组病例中 ,抗体的阳性率分别为 43 % ,1 0 4%及 7 5 % ,在难治性高血压组抗体阳性率具有显著性差异 (P <0 0 5)。对抗体阳性的难治性高血压病人 ,随机分为血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂治疗组及ACE抑制剂治疗组 ,进行了为期 6个月的临床随访 ,观察了两组病人在血压降低值、抗体变化及高血压并发症方面的差异 ,共得到有效病例数 48例 ,发现血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂组的血压降低值优于ACE抑制剂组 ,且血压控制稳定。结论 :抗AT1 -受体自身抗体可能是导致部分高血压病人血压控制困难的原因之一 ,其机制可能与抗AT1 -受体自身抗体对AT1 -受体的激动活性有关 ,使用血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂氯沙坦可有效地阻断AT1 -受体的各种激动途径 ,对抗AT1 -受体自身抗体阳性的难治性高血压病人具有更大的使用价值     

靶向血管内皮生长因子的siRNA表达框架对喉癌细胞株Hep-2细胞生长的抑制作用

目的研究培养Hep-2细胞中，靶向血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的小干扰RNA表达框架（small interference RNA expression cassettes，SECs）对肿瘤细胞生长的影响，检测VEGF基因表达的情况，筛选最佳干扰序列，探讨RNAi技术在肿瘤基因治疗中的应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则，设计出VEGF4个位点的干扰序列，然后进行合成，即为siRNA表达框架的下游引物。由于干扰试剂盒中采用RNA介导的u6聚合酶Ⅲ启动子和改良的终止序列，从而在靶细胞内可以高水平及精确地表达siRNA。我们将4个位点的PCR产物分别转染指数生长期的Hep-2细胞，48h开始观察和检测所产生的RNA干扰的效果。结果形态学检测：转染后的1366位点的细胞可见皱缩、变圆并开始脱落，而其他三个位点的细胞形态学上未见明显的改变；逆转录-聚合酶链反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，与对照组相比，1366位点细胞VEGF mRNA明显被抑制，吸光度为0．05，而其他三个位点的抑制效果不显著，吸光度分别是0．25、0．30和0．18。Western blot分析表明：与其他三个位点相比，1366位点的VEGF蛋白表达明显减弱；流式细胞仪检测表明：1366位点转染细胞的凋亡率为43％，而其他三个位点转染细胞的凋亡率改变不明显，分别为8．9％、6．5％和11．2％；本实验重复性强，同样的实验重复三次结果一致。结论研究表明靶向VEGF的1366位点的siRNA表达框架能高效抑制喉癌细胞株Hep-2细胞的生长。     

自身免疫性心肌病抗心肌线粒体腺嘌呤核苷异位酶抗体的动态变化

目的:观察自身免疫性心肌病(AIC)小鼠模型和病毒性心脏病(VHD)患者血清抗心肌线粒体腺嘌 呤核苷异位酶(ANT)抗体的演变规律。方法:建立ANT合成肽AIC小鼠模型,ELISA法定期监测小鼠血清抗 ANT抗体,观察心肌病理变化;对不同病程VHD患者血清进行抗ANT抗体检测。结果:AIC小鼠模型抗ANT 抗体阳性率随着病程延长,呈先上升后下降趋势,病理检查结果提示心肌组织有慢性炎症的改变。在不同病程 VHD患者中,血清抗ANT抗体阳性率也呈现先升高后降低的变化,临床随访发现12.9%病毒性心肌炎转化为 扩张型心肌病。AIC小鼠模型与不同病程VHD患者血清抗ANT抗体演变具有一致性(r=0.53,P>0.05)。 结论:抗ANT抗体水平的变化与心肌病进程相关。     

下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的:观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法:构建XIAP基因反义真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株MKN-45,RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达.选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞,采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性:透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率;Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.结果:RT-PCR和Western blot证实,稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01),各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后,转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01),12.3%-16.3%(P<0.01).透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率分别为34.12%和32.5%,显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%,P<0.05).与MKN-45细胞比较,稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01),活性水平提高3.68倍(P<0.0 1).结论:通过反义RNA技术下调XIAP基因表达,能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性,增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.     

抗血管紧张素Ⅱ受体1型和α1-肾上腺素受体自身抗体在高血压患者检测结果分析

目的探讨抗血管紧张素Ⅱ受体1型(AT1-受体)和α1-肾上腺素受体自身抗体在高血压发病中的作用.方法收集2级以上高血压病患者194例,给予规范抗高血压联合药物治疗,根据治疗效果,将高血压病患者分为降压达标组和降压未达标组,40例正常血压志愿者作为对照.以合成的抗AT1-受体和α1-肾上腺素受体多肽片段为抗原,酶联免疫吸附法检测血清抗AT1-受体和α1-肾上腺素受体自身抗体.同时检测血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ和儿茶酚胺浓度.结果高血压病组抗AT1-和α1-受体抗体阳性率分别为26.8%(52/194)和 25.3%(49/194),较正常血压组(7.5% 和 5.0%)明显升高(P<0.01).进一步分析表明,降压未达标组抗AT1-受体和α1-肾上腺素受体抗体阳性率分别为42.9%(42/98)和36.7%(36/98),明显高于降压达标组(10.4%和13.5%)(P<0.01).降压未达标组血浆血管紧张素Ⅱ水平、儿茶酚胺水平、蛋白尿和血清肌酐水平等指标亦明显高于降压达标组.结论高血压病患者血清存在抗AT1-受体和α1-肾上腺素受体自身抗体,这些抗体主要在难治性高血压病患者中检出,可能是高血压发病的机制之一.     

抽动-秽语综合征儿童巨细胞病毒感染的意义初探

儿童抽动-秽语综合征（Tourette＇s syndrome，TS）近年发病有增多的趋势，严重影响患儿的学习和生活，其发病原因至今未明，病毒感染可能是发病机制之一。人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）易导致儿童感染，为此我们对86例TS儿童和50例正常儿童进行了外周血淋巴细胞HCMV pp65抗原与血浆HCMV DNA定量检测，以规探讨HCMV感染与儿童TS的关系。     

Growth-inhibiting and Apoptosis-inducing Effects of Tanshinone Ⅱ A on Human Gastric Carcinoma Cells

To explore the effects of Tanshinone ⅡA on the proliferation, apoptosis and gene ex- pression of p53 and bcl-2 in human gastric carcinoma MKN-45 cells. Cell count and MTT assay were used to study the proliferation-inhibiting effect of Tanshinone ⅡA on MKN-45 cells. The effect of Tanshinone ⅡA on the cell cycle and apoptosis of MKN-45 cells were examined by propidium io- dide (PI) staining and flow cytometry. Semi-quantitative RT-PCR was used to further verify the ex- pression of p53 and bcl-2 gene after exposure to Tanshinone ⅡA in MKN-45 cells. The results showed that Tanshinone ⅡA significantly inhibited the growth and proliferation of MKN-45 cells in a dose- and time-dependent manner (P<0.05). Tanshinone ⅡA arrested MKN-45 cells in G2/M phase which led to an obvious accumulation of G2/M phase cells while decreased number of G0/G1 phase cells. This resulted in apoptosis of MKN-45 cells and the apoptosis rate was as high as 43.91% after treatment with 2.0 μg/mL TanshinoneⅡA for 96 h. It was also found that Tanshinone ⅡA up-regulated expression of p53 gene and down-regulated expression of bcl-2 gene. The cytostatic and antiproliferative effect of Tanshinone ⅡA makes it a promising anticancer agent for the treatment of gastric carcinoma.     

肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法 采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全长 HIMF cDNA ,克隆至 T 载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo( )的限制性内切酶位点 EcoR Ⅰ ;重组子在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞 MLE-12、血管内皮细胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法检测细胞HIMF表达水平.结果 HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠 HIMF 全长 cDNA(336 bp),与 GenBank 报道的序列一致.真核表达载体 pcDNA3.1-HIMF 转染细胞后,细胞内 HIMF mRNA 和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论 从小鼠肺组织中克隆出 HIMF 这一组织特异性基因,为深入研究 HIMF 的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础.     

外周血单核细胞IFN-α和IL-18表达与慢性丙肝患者干扰素应答的关系

目的检测慢性丙肝(CHC)患者外周血单核细胞(PBMC)α干扰素(IFN-α)及白细胞介素18(IL-18)mRNA的表达,探讨慢性丙肝患者细胞免疫功能与干扰素应答的关系。方法聚肌胞(PolyIC)体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染组患者PBMC,取培养上清利用病毒保护试验测定IFN-α2b治疗前后病人PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时用脂多糖(LPS)体外刺激不同组PBMC,RT-PCR检测PBMC IL-18 mRNA水平的变化。结果治疗前干扰素治疗应答组患者(n=12)和无应答组患者(n=26)PBMC分泌的干扰素抗病毒生物学活性显著低于正常对照组(n=20)(均P<0.01)。应答组患者PB-MC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月已显著高于无应答组患者(P<0.01);无应答组患者PBMC分泌的干扰素活性始终处于低下水平。治疗前,应答组患者和无应答组患者PBMC IL-18 mRNA水平也显著低于正常对照组(均P<0.01);治疗后,应答组患者IL-18 mRNA水平随治疗时间延长而升高,1个月时显著高于无应答组患者(P<0.01),无应答组患者IL-18 mRNA水平始终较低。PBMC IFN-α活性和IL-18 mRNA水平有良好的正相关性(r=0.873,P<0.01)。结论慢性HCV感染无应答组的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α和IL-18,而应答组经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。慢性丙肝患者PBMC IFN-α活性和IL-18 mRNA水平检测可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

武汉地区婴幼儿合胞病毒肺炎资料分析

婴幼儿急性呼吸道感染是冬、春季的常见病、多发病,其中以病毒所引起者为多。为了做到有效的防治,必须弄清我国各地区引起婴幼儿急性呼吸道感染的病毒种类以及它们所占的此例。国外资料表明合胞病毒是婴幼儿下呼吸道疾病非常重要的病原,我国北京、昆明等地已发现合胞病毒感染。我