抗L3T4单抗对线粒体腺苷酸转移酶多肽诱导小鼠心肌病的免疫治疗

目的 :探讨抗L3T4单克隆抗体对线粒体腺苷酸转移酶 (adeninenucleotidetranslocator ,ANT)多肽诱导的小鼠心肌病是否有治疗作用。方法 :15只雄性Balb/c小鼠分为 3组 :①免疫应答组 (n =5 ) :予ANT多肽免疫诱导心肌病的产生 ;②免疫治疗组 (n =5 ) :先予ANT多肽免疫 ,喂养 3个月后再给予抗L3T4单抗进行治疗 ;③对照组 (n =5 ) :以不含ANT合成肽的空白免疫液免疫小鼠。采用ELISA法检测血清抗ANT多肽抗体动态变化 ,实验结束时在光镜和电镜下观察小鼠心肌组织的病理改变 ,计算组织中的胶原纤维容积分数。实验期半年。结果 :免疫应答组小鼠体内均有ANT抗自身抗体的产生 ,且抗体的光密度值 (A )明显增高 ,与对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠经抗L3T4单抗治疗后自身抗体出现反应性下降 ,其A值与免疫应答组及对照组比较差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1) ;对照组抗体检测为阴性。病理结果显示 ,免疫应答组小鼠心肌组织出现弥漫性纤维化 ,心肌细胞线粒体和肌丝有明显损害 ,心肌胶原纤维容积分数明显高于对照组(P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠心肌组织的病理改变略轻于免疫应答组 ,心肌胶原纤维容积分数介于免疫应答组和对照组之间 ;对照组心肌组织基本正常。结论 :ANT多肽可诱导小鼠产生抗AN     

替比夫定(素比伏)体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究

目的观察替比夫定体外对乙型肝炎病毒（HBV）复制的抑制作用。方法HBV复制子pHBV1．3质粒转染Huh7细胞,在转染细胞培养液中加入不同浓度的替比夫定,然后在不同时间段观察替比夫定的抗病毒作用。用ELISA检测培养上清中HBsAg、HBeAg水平,用荧光定量PCR（FQ—PCR）检测培养上清中HBVDNA拷贝数,用Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果替比夫定减少了培养上清中HBsAg、HBeAg的表达及HBVDNA拷贝数,抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替比夫定对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论替比夫定在体外对HBV有较强的抑制作用。     

免疫细胞化学技术检测P－糖蛋白在人膀胱癌MDR细胞亚株中的表达

为探讨肿瘤细胞耐药性，以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，以递增阿霉素剂量的方法，历时８个月，成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对时受度较亲本细胞提高了６．３倍，对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂霉素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理，应用链霉亲和素－生物素免疫细胞化学技术对其耐药性进行研究发现，约７５％的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞Ｐ－ｇｐ过表达，而亲本细胞均为阴性。由此结果表明，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ耐药性的产生主要是由于Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的建立为进一步针对Ｐ－ｇｐ药泵功能逆转其抗药性的研究奠定了实验基础。     

活动性巨细胞病毒感染与反复自然流产的关系探讨

目的探讨活动性人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染与反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）的关系.方法采集反复自然流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞（PBMCs）和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV DNA,并比较2种方法的一致性.结果 65例RSA患者HCMV pp65抗原有20例阳性,阳性率30.8%,50例正常体检孕妇 HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8.0%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异（χ^2=8.87,P＜0.01）.孕妇HCMV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加（χ^2=7.53,P＜0.01）. 免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性（92.3%）.结论反复自然流产孕妇 HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测也许可作为RSA早期诊断指标之一.     

IL-1β和TNF-α在小鼠巨细胞病毒性心肌炎组织中的表达及其意义

目的研究IL-1β和TNF-α在巨细胞病毒（MCMV）心肌炎小鼠心肌组织中的表达及在心肌损伤中的作用。方法将60只4周龄BALB／C小鼠随机分为两组,实验组（36只）腹腔注射10-4TCID MCMV,对照组（24只）注射3T3细胞裂解液。观察腹腔注射后3、7、14d心肌组织中IL-1β TNF-α的表达及心肌病理改变。结果实验组心肌组织出现灶性或弥散性炎性细胞浸润、心肌细胞变性和坏死,对照组无病理改变。实验组IL-1β、TNF-α蛋自主要表达在炎性浸润细胞、变性或坏死的心肌细胞,而对照组几乎无表达。结论IL-1β、TNF-α在MCMV心肌炎心肌组织中表达,并可能在其发病中起重要作用。     

PTTG和bFGF在舌癌细胞株Tca8113中表达相关性研究

目的：探讨垂体肿瘤转化基因（Pituitary Tumor Transforming Gene,PTrG）蛋白在舌癌细胞株Tca8113中的表达及其与碱性成纤维细胞生长因子（basic Fibroblast Growth Factor,bFGF）间的关系.方法：应用免疫细胞化学方法,检测加入bFGF抗体后孵育的癌细胞中PTTG蛋白表达的变化.结果：Tca8113中PTTG蛋白呈阳性表达,并受bFGF影响,加入bFGF抗体的培养液中的癌细胞PTTG蛋白荧光明显减弱,随着时间延长和bFGF抗体滴度增加,减弱趋势明显.结论：舌癌细胞株中PTTG蛋白的表达受bFGF制约,对二者的联合治疗可能是一种治疗舌癌的有效方法.     

腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用

目的 通过腺病毒(adenovirus,Ad)载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC),探讨bel-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用.方法 体外培养新生大鼠SGC,携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒载体Ad-GFP转染SGC,并行神经丝蛋白(NF200)免疫细胞化学染色鉴定,激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察.携带bel-2基因的腺病毒载体Ad-bel-2转染SGC,蛋白质印迹法(Western Blot)检测bcl-2蛋白表达.设立Ad-bcl-2转染加顺铂组(A组),Ad-GFP转染加顺铂组(B组),顺铂组(C组)和正常对照组(D组),顺铂作用浓度为2μg,/ml;顺铂作用48 h后,行各组SGC计数,并通过lmageJ软件测量各组SGC轴突长度.结果 成功分离并培养新生大鼠SGC.激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC.Ad-bcl-2转染3 d后,Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达,而Ad-GFP转染组和顺铂组未检测到表达.顺铂作用后,A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩,胞体缩小、变圆,甚至浮起.A组SGC数目明显多于B组和C组(P值均＜0.01),但少于D组(P＜0.05);A组SGC轴突长度明显长于B组和C组,但短于D组(P值均＜0.01).结论 腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC.bel-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用.     

人鼻咽癌CNE细胞摄取99mTcN(NOEt)2与99mTc-MIBI动力学对比研究

目的：研究^99mTc-氮二{（N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐[N（NOEt）2]）和^99mTc甲氧基异丁基异腈（MIBI）在人鼻咽癌CNE细胞中的摄取动力学。方法：用放射性核素示踪技术研究人鼻咽癌CNE细胞在37℃和22℃时对^99mTcN（NOEt）2和^99mTc-MIBI的摄取动力学规律。结果：37℃和22℃时CNE细胞对^99mTcN（NOEt）2的摄取差异无统计学意义,^99mTcMIBI摄取则呈温度依赖性。37℃时CNE细胞对^99mTcN（NOEt）z摄取峰值为43．15％,^99mTc-MIBI为11．08％（P〈0．01）;5min时CNE细胞摄取^99mTcN（NOEt）2为峰值的63％．^99mTc-MIBI为48％（P〈0．05）;60min时^99mTcN（NOEt）2在CNE细胞中的滞留率为63．92％,^99mTc-MIBI为53．97％（P〈0．05）。结论：^99mTcN（NOEt）2可能较^99mTc-MIBI更适用于鼻咽癌显像,具有潜在的临床应用价值。     

化学合成siRNA体外对柯萨奇B3病毒的影响

目的RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具。本研究是在培养HELA细胞中，体外化学合成siRNA（small interfering RNA）对柯萨奇B3病毒（Coxsackievirus B3，CVB3）的影响，探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则，设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA，并在体外通过化学合成形成siRNA。同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA。用CVB3感染培养HELA细胞，将其分为3组，即siRNA组（n=8），阴性siRNA组（n=8），病毒对照组（n=8），分别观察转染后第1天到第5天的细胞病变，并与未感染CVB3的空白对照组进行比较；采用RT-PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断，观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值；用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达。结果RT-PCR检测各组CVB3病毒5’端非编码区（5’UTR）RNA，siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化（P〉0．05）；免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异；细胞病理效应（cytophatic effects，CPE）各组问未见明显差异。结论本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制。     

通用表达型T载体的构建与真核基因的快速克隆表达

目的:为简化PCR产物真核表达载体构建步骤,构建真核表达型T载体,并对其特性及表达效率进行分析.方法:限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与dTTP 70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化.将增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)和中国旱獭a干扰素基因(cwIFNA5)分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭a干扰素的生物学活性.结果:外源基因EGFP和cwIFNA5克隆进该载体后可以进行高效表达,基因转染72 h后,荧光显微镜观察到EGFP基因转染细胞荧光阳性率在80%以上,荧光强度高:病毒保护试验表明cwIFNA5转染细胞培养上清干扰素效价高达1∶600.结论:本研究构建的表达型T载体可用于基因的克隆之外,还可以直接用于基因的高效表达作蛋白质功能分析.