恶性疟原虫抗药性的体外培育

最早报告恶性疟原虫对抗疟药产生抗性的,是1910年Nocht等报告在巴西发现对奎宁(quinine)产生抗药性。以后又发现对乙胺嘧啶(Pyrimethamine)产生抗药性。60年代初期,在哥伦比亚、南美洲、泰国和东南亚地区又分别报道发现恶性疟原虫对氯喹(Chloroquine)产生了抗药性。其后,抗氯喹虫株出现的范围不断地扩大,同时,产生抗药性的药物也不断增多。我国自70年代以来,已先后证实粤、桂、滇、黔、闽、苏,皖、豫等八省(区)均有恶性疟原虫抗氯喹株存在,其中尤以海南岛和云南南部地区最为严重。海南岛近年还出现了恶性疟原虫对喹哌(Piperaqui     

疟疾免疫过氧化酶试验——一种检测恶性疟原虫抗体的敏感方法

目前,疟疾学家们最常使用的血清学检验方法有间接荧光抗体试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。最近的研究发现IFA抗体滴度与人群中的带虫率呈反比关系,这表明IFA可用于予测人群对疟疾的免疫力。但IFA的结果观察需用荧光显微镜,这限制了其广泛应用。本文报告一种酶酸检测方法,即用辣根过氧化酶(HRP)代替异硫氰酸荧光素(FITC)的免疫过氧化酶试验(MIA)。具体操作如下:     

恶性疟原虫FCC1/HN株3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的序列测定

3-磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)是疟原虫糖酵解过程中重要的酶 ,其基因最近被发现 [1 ]。本文报告恶性疟原虫 FCC1/HN株 GAPDH基因序列测定结果。1　材料与方法1.1　虫株恶性疟原虫 FCC1/ HN株在本室长期保种 ,体外培养参照Trager等 [2 ]方法并略作改进 [3]。1.2　基因组 DNA的提取取 5 0 μl培养物 ,按文献 [4 ]方法用 5 %磷酸钠盐溶液提取 ,最后溶于 5 0 μl DEPC- H2 O中。1.3　提取总 RNA收获培养物中的环状体期疟原虫 (1× 10 9以上 ) ,用 RNA提取试剂盒 (采用 TRIZOL试剂盒 ,Gibco,BRL )抽提总RNA,紫外分光光度计测…     

“饲养细胞”在建立恶性疟原虫红内期体外培养中的作用

在建立恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）新分离株体外连续培养的初期，使用小鼠腹腔洗脱细胞（主要是单核巨噬细胞）作为“饲养细胞”。结果表明，在饲养细胞的辅助下，Ｐ．ｆ虫株很快适应体外培养条件，生长发育良好。６周后停用饲养细胞，虫株仍能继续正常生长繁殖。     

恶性疟原虫海南分离株裂殖子表面蛋白1基因的分型研究

目的　了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1(PfMSP1)等位基因型的分型特征。方法　采用套式PCR方法 ,用几对PfMSP1特异引物扩增疟原虫虫株PfMSP1基因第 2区与第 3区部分片段 ,并对等位基因型代表株的基因片段进行序列分析。结果　 39份血样中有 36份恶性疟患者共扩增出 44个PfMSP1基因片段 ,以MAD2 0型为主导型 (占 75 % ) ,K1型为次要型 ,未检出RO33型。两种不同等位基因型的混合感染率为 19 4%。序列分析表明 ,海南省恶性疟原虫虫株的MAD2 0型和K1型第 2区序列与MAD2 0和K1原型序列具有高度同源性。结论　海南省恶性疟原虫虫株存在MAD2 0型和K1型两种等位基因型 ,以MAD2 0型为优势虫株。     

恶性疟原虫海南分离株pfmdr1基因与氯喹抗性的相关性分析

目的了解海南省恶性疟原虫pfmdr1基因同氯喹抗性的关系。方法采用套式PCR技术特异性扩增pfmdr1基因含有编码第86位、1042位和1246位氨基酸的基因片段,并对扩增产物进行RFLP分析。结果42个样本中,pfmdr1第86位氨基酸均未发生突变,即86位氨基酸是野生型的Asn,而不是突变型的Tyr。第1246位氨基酸发生突变的样本共有7个,全部为抗性虫株。第1042位点PCR扩增结果阳性的37个样本中突变的样本共有10个,其中9个为抗性虫株,一个为敏感虫株。结论我国海南省恶性疟原虫氯喹抗性产生与pfmdr186位氨基酸基因多态性无关,但第1042和1246位氨基酸的突变更易在抗性虫株中检出。     

套式PCR用于海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1和2的分型研究

目的了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(pfMSP1)和表面蛋白2(pfMSP2)等位基因型的分型特征。方法采用套式PCR法分别扩增pfMSP1基因第2区与第3区部分片段和pfMSP2基因的中间可变区(第3区)，对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型。结果 55份血样中有52份恶性疟疾患扩增pfMSP1基因片段，以MAD20型为主导型(84.6％)，K1型为次要型，未检出RO33型，两种不同等位基因混合感染率为15．4％。同时，55份血样中有53份恶性疟疾患扩增出pfMSP2基因片段，以3D7型为主导型(83％)，FC27型为次要型，混合感染率为17％。结论 海南省恶性疟原虫的MSPl存在MAD20型和K1型两种等位基因型，以MAD20型为优势虫株；其MSP2存在3D7型和FC27型两种等位基因型，以3D7等位基因家族为主。     

人工感染十二指肠钩虫以治疗红细胞增多症

用人工感染十二指肠钩虫以治疗人类红细胞增多症首先报告于1938年。本文报告用此法治疗一例3岁女孩。该女孩患有严重的先天性红细胞生成素介导型红细胞增多症。由于缺乏适合手术用的静脉,故难以施行常规的多次静脉切开放血术。其他几种治疗方法又效果甚差。故征得其父母的同意,采用     

海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3的分型研究

目的 了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3(pfMSP3)等位基因型的分型特征。方法 采用套式PCR法扩增pfMSP3基因的可变区序列,对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型,并对其代表株的基因片段进行序列分析。结果 41份血样扩增出51个pfMSP3基因片段,以3D7型为主导型(78．4％),K1型为次要型(21．6％),其中,混合感染率为24．4％。序列分析表明,海南省恶性疟原虫虫株的3D7型和K1型的可变区序列与3D7和K1原型序列具有高度同源性。结论 海南省恶性疟原虫的MSP3存在3D7型和K1型两种等位基因型,以3D7型为优势虫株。     

毒饵盒法作为巩固灭鼠方法的探讨

目的研究毒饵盒对提高灭鼠效果的作用.方法采用自制毒饵盒与传统塑料饵袋灭鼠,分别对多年灭鼠仍保持一定密度、灭鼠难度较大的局部地区进行灭鼠效果对比评价.结果毒饵盒法盗食率为43.0%,毒饵袋法为20.0%;经150 d灭效观察,试验区鼠密度(粉迹法)下降率94.36%,对照区仅为69.29%(u=2.896,0.005>P>0.002);灭效RPI指数为18.37.结论毒饵盒法的鼠类盗食率较高,现场灭鼠效果明显优于传统毒饵袋法.