两份人脐血间充质干细胞混合培养及向神经元样细胞的分化

背景:脐血间充质干细胞可诱导分化为神经样细胞,但在临床中发现干细胞培养细胞增殖的数量不足.目的:观察两份脐血间充质干细胞混合培养的生长情况,以及经碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化.设计、时间及地点:于2007-01/10在郑州大学基础医学院微生物与免疫学实验室完成以细胞为对象的对照观察性实验.材料:健康分娩产妇自愿捐献的脐血60~180mL.方法:应用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液以密度梯度法获取脐血间充质干细胞,加入碱性成纤维细胞生长因子诱导分化.当细胞传至第3代时,随机取培养的6份脐血间充质干细胞(半量)为A组,6份脐血间充质干细胞(半量)为B组,将A、B组各剩余的半量脐血间充质干细胞混合为C组.3组细胞密度均为1.0×104 L-1.主要观察指标:以活细胞计数和MTT比色法比较3组细胞扩增数量,免疫组织化学检测脐血间充质干细胞神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白的表达.结果:活细胞计数和MTT比色检测显示,将两份不同脐血间充质干细胞混合后,细胞贴壁比单份脐血间充质干细胞快(P＜0.05),增殖也非常快(P＜0.05).3组细胞经碱性成纤维细胞生长因子诱导后均表达神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白,并且巢蛋白阳性表达率无差别(P＞0.05).结论:混合脐血间充质干细胞之间有互相促增殖作用,应用碱性成纤维细胞生长因子诱导的脐血间充质干细胞可表达神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白.     

Aurora-A在宫颈癌组织中异常表达的意义

目的:研究Aurora-A在不同宫颈组织中的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中的意义。方法:采用免疫组化法和荧光实时定量PCR检测25例子宫颈癌、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)和18例正常宫颈组织Aurora-A的表达。结果:免疫组化检测宫颈癌和CIN组Aurora-A的表达率分别为64.00%和43.80%,均高于正常对照组的11.10%,差异有统计学意义(P<0.05),而宫颈癌与CIN两组间比较,差异无统计意义(P>0.05);荧光实时定量PCR检测宫颈癌和CIN组织中Aurora-A mRNA含量分别为4.74±7.30和3.62±6.00,亦高于正常对照组的1.80±3.13,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌与CIN两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌Aurora-A高表达与患者年龄、组织学分级、临床分期均无相关性(均P>0.05)。结论:Aurora-A高表达发生在宫颈病变早期,在子宫颈癌的发病机制上起重要作用。     

4000/碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在培养人脐带Wharton’s jelly源间充质干细胞的作用（加急4月）

背景：培养脐带源间充质干细胞过程中,细胞形态常易变得宽大不规则,传代不易贴壁,死亡率高,找到一个维持细胞稳定的方法是有必要的。 目的：拟采用组织块培养法从人脐带Wharton’s jelly中分离培养间充质干细胞,观察碱性成纤维细胞生长因子对其生物学特性的影响。 方法：采用组织块法分离培养和扩增脐带组织间充质干细胞,对照组用DMEM/F12 培养基+体积分数为10%胎牛血清培养,实验组用DMEM/F12 培养基+体积分数为10%胎牛血清+ 20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养。观察组织块游出细胞的时间和细胞形态,每隔3 d或4 d更换培养液,待细胞达到80%~90%融合时,用0.25%胰酶消化后,按1∶2或1∶3的比例传代。 结果与结论：倒置显微镜下观察对照组中从8~10 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,实验组中从6~8 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,1周后可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,围绕组织块成旋涡状,前3代细胞形态及传代间隔时间两组基本相同;3代以后实验组细胞较对照组易于贴壁,传代死亡率低,生长曲线提示增殖能力强。流式细胞术分析两组细胞周期显示第3,6代 70%以上的细胞处于G0/G1期,且第3,6代细胞均阳性表达CD29,CD44,弱表达HLA-ABC,不表达CD34、CD45和 HLA-DR。结果提示采用组织块培养法可从人脐带Wharton’s jelly中分离出具有间充质干细胞特性的细胞,且碱性成纤维细胞生长因子能使细胞从组织块游出时间提前和有助于促使细胞贴壁,一定程度上维持细胞形态稳定性,提高增殖能力,并且不改变细胞的表面标志物表达。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子;间充质干细胞;人脐带;Wharton’s jelly;干细胞     

从管理角度剖析病历书写缺陷产生的原因与对策

目的从管理角度剖析病历书写缺陷产生的原因并提出对策.方法随机抽取某医院6120份住院病历,按照《湖北省病历质量考评标准(2010)》给予评价与评分.结果6120份病历中甲级病历率为85.61%;乙级病历率为14.36%;丙级病历率为0.03%.分析书写缺陷产生的原因主要有医务人员对相关法律法规及《病历书写基本规范》不熟悉,部分医师超负荷工作,少数医师人文素质不高,电子病历设计有缺陷以及质量管理体系不健全.结论加强对医务人员医事法律法规教育和《病历书写基本规范》培训,强化医务人员素质教育,合理分配医师工作量,完善电子病历功能建设,健全医院三级医疗质量控制体系,以期持续提升病历书写质量.     

豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

目的:研究豫医无毛小鼠(YYHL)突变的分子机制.方法:对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对扩增片段克隆后测序,并与Mus muscnlus进行同源性分析.结果:共测出YYHL DNA序列1 824bp和昆明小鼠DNA序列1816 bp,其不同之处有27处,变异方式包括插入、缺失和点突变.其中在12外显子中有一无义突变(G→A),导致该部位由编码色氨酸的UGG转变为终止密码子UGA.结论:YYHL无毛性状的产生可能与基因组的变异有关.     

人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP+转基因鼠的

目的：评估人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP转基因鼠的有效性和安全性。 方法：饲养转基因APP+胎鼠,定期合笼,利用PCR技术快速鉴定转基因鼠,以刚果红染色法观察脑组织切片中的β-淀粉样蛋白沉积。严格无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜,体外分离培养羊膜间充质干细胞,至第3代经尾静脉移植。Morris水迷宫测试移植前后小鼠学习、记忆能力。移植当天开始称重,每隔三天一次,持续三周。移植后解剖小鼠,收集全血并分离血清,进行心、肝、肾功能的血液生化和12项肿瘤标记物检测,对该细胞治疗的安全性作综合评价。 结果：移植后小鼠学习、记忆能力明显增强。移植组动物的体重增长趋势与对照组相比无明显差异（P＞0.05）,未见肿瘤和死亡发生。血液生化和12项肿瘤标记物各指标无明显差异（P＞0.05）。 结论：人羊膜间充质干细胞尾静脉移植治疗阿尔茨海默氏症小鼠明显促进小鼠学习、记忆能力,未见致死致瘤现象发生,心、肝、肾功能未受影响。利用该种干细胞移植治疗阿尔茨海默氏病是安全可行的。     

消渴活血汤口服结合外洗治疗早期糖尿病足378例临床观察

目的观察消渴活血汤口服结合外洗治疗早期糖尿病足的临床疗效。方法将378例早期糖尿足患者随机分为2组,对照组178例予西医常规治疗,治疗组200例在对照组治疗基础上加用消渴活血汤内服及外洗。2组均15 d为1个疗程,6个疗程后观察临床疗效。结果治疗组总有效率为97.0%,对照组总有效率为85.4%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组疗效优于对照组。结论消渴活血汤口服结合外洗治疗早期糖尿病足疗效显著。     

bFGF诱导脐血CD_(34)~+干细胞基因表达变化的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外诱导脐血CD_(34)~+造血干细胞分化的基因表达变化,理解脐血CD_(34)~+造血干细胞的生物学特性,为体外诱导分化和临床应用打下基础.方法 利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD_(34)~+造血干细胞,经含千细胞因子(SCF)、bFGF、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10～15d,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEAArray(R)芯片和GEArray表达分析软件进行芯片数据分析.结果 在所检测的263个基因中,发现10个基因培养后比培养前显著上调,20个基因显著下调.这些基因主要涉及干细胞特异性标志、细胞周期、干细胞分化标志、以及与干细胞相关的信号转导、细胞因子及其受体等.结论 bFGF通过一些特定基因的变化影响脐血CD_(34)~+干细胞增殖分化,有助于从基因水平理解bFGF对CD_(34)~+干细胞增殖分化的影响,促进bFGF诱导的CD_(34)~+细胞在临床上的应用.     

羊膜间充质干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验

目的:探讨羊膜间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤修复的影响。方法:90只成年SD大鼠按改良Allen′s打击方法建立脊髓损伤模型,随机分为3组:对照组、假移植组和移植组,每组30只。于脊髓损伤后1周经尾静脉移植Brdu标记的羊膜间充质干细胞。3组大鼠分别于损伤后第1 d、3 d、1周及移植后1 d、3 d、1周、2周、4周采用BBB评分法对行为学进行评价。并于移植后1 d、3 d、1周、2周、4周分批处死,切片观察Brdu标记的细胞能否迁移到损伤区。结果:脊髓损伤后第1 d,3组实验动物后肢运动功能BBB评分皆为0分;细胞移植1周后移植组动物BBB评分为5.6±0.6,对照组和假移植组动物BBB评分分别为5.3±0.4和5.2±0.6;细胞移植2周后移植组、假移植组和对照组BBB评分分别为11.3±0.9、6.4±0.5和6.5±0.8;4周后3组实验动物评分分别为13.4±0.9、8.3±0.6和8.5±0.7;在损伤部位出现了Brdu标记的羊膜间充质干细胞。结论:经静脉移植的羊膜间充质干细胞能够迁移到损伤区并对脊髓损伤有一定的修复作用。     

立体心电向量图对心肌梗死病变血管定位的价值

目的 对比分析常规心电图(ECG)和立体心电向量图(3D-VCG),评价3D-VCG在心肌梗死相关动脉(IRA)定位上的应用价值.方法 114例临床确诊心肌梗死患者,经冠状动脉造影,将冠状动脉单支完全闭塞或狭窄≥75%者,分成左前降支(LAD)、左回旋支(LCX)、右冠状动脉(RCA)共3个IRA组,分别分析其ECG和...