RNAi抑制PSA表达对前列腺癌22RV1细胞增殖和侵袭力的影响

目的 研究PSA表达对去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞增殖和侵袭的影响.方法 构建含有针对PSA基因特异性短发夹RNA(shRNA,分别为shPSA1、shPSA2、shPSA3、shPSA4)和阴性对照序列(NC)的慢病毒载体并由慢病毒颗粒包装后,分别感染去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞并筛选稳定表达PSA特异性shRNA的shPSA1-、shPSA2-、shPSA3-、shPSA4-和表达NC序列的NC-22RV1细胞.分别应用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测shRNA对22RV1细胞中PSA mRNA及蛋白表达的影响;采用CCK-8法、Transwell侵袭试验和流式细胞术检测PSA基因沉默后的22RV1细胞增殖、侵袭和凋亡情况.结果 与NC-22RV1细胞相比,shPSA3-22RV1细胞的基因和蛋白表达水平的沉默效果最好;shPSA2组在24、48、72 h的吸光度值分别为(0.1564±0.0225)、(0.2438±0.0358)、(0.3641±0.0205),shPSA3组分别为(0.1069±0.0120)、(0.1588±0.0192)、(0.2534±0.0289),与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.01);shPSA1、shPSA2、shPSA3组侵袭力分别为NC组的77.35%(P=0.002)、54.35%(P<0.001)、42.21%(P<0.001);shPSA2、shPSA3组凋亡率分别为(27.97±4.28)%(P=0.001)、(43.03±3.19)%(P<0.001),高于NC组[(16.77±0.59)%].结论 PSA具有促进去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞的增殖和侵袭效应,抑制PSA表达后前列腺癌22RV1细胞凋亡增加.     

兔膝关节软骨单位微管吸吮黏弹性力学分析

目的 探讨体外急性消化软骨单位的生物力学特性.方法 成年8月龄新西兰白兔8只,随机分为两组,各4只.无菌条件下剖取双膝关节全层软骨,一组采用常规质量浓度0.4%的pronase酶和质量浓度0.025%的Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞;另一组采用质量浓度0.3%的dispase酶和质量浓度0.2%的Ⅱ型胶原酶联合搅拌消化3 h为软骨单位.利用微管吸吮结合半无限体细胞力学模型定量分析急性消化软骨细胞及软骨单位黏弹性力学特性,包括平衡模量(E∞)、瞬间模量(E0)和表观黏性(μ)等黏弹性参数.结果 成年软骨细胞在0.2-0.4 kPa恒定微管负压下,表现为典型黏弹性固体特征,即在微管中产生瞬间微小变形,随后发生形率单调减小的蠕变过程,其到达平衡状态时间为(110±18)s.成年软骨单位在微管吸吮负压提高到1.0～1.2 kPa时,与软骨细胞发生同样的黏弹性蠕变行为,但其瞬间吸入微管内的长度明显减少,且到达平衡状态的时间缩短为(36.5±4.5)s.同时,软骨单位黏弹性参数平衡模量(E∞)、瞬间模量(E0)和表观黏性(μ)均明显高于软骨细胞.结论 与软骨细胞相比,成年软骨单位同样表现为黏弹性固体特征,但其黏弹性力学特性明显提高.

Abstract：

Objective To characterize the biomechanical behavior and properties of the chondrons enzymatically isolated from rabbit knee articular cartilage in virto. Methods Eight months old New Zealand white rabbits were randomly divided into chondroctye and chondron groups (4 rabbits in each group). In chondrocyte groups, the full articular cartilages from both knees were enzymatically isolated to chondrocytes by 0.4% pronase and 0.025% collagenase type-Ⅱ in turn. In chondron groups, chondrons were obtained from articular cartilage using the mixture of 0.3% dispase (a neutral protease) and 0.2% collagenase type-Ⅱin at 37C for 3 h. The micropipette aspiration was used to quantify changes in biomechanical properties of chondrons and chondrocytes and the viscoelastic parameters, including K1, K2, E∞ (equilibrium modulus), E0(instantaneous modulus), and μ (apparent viscosity), were calculated coupled with standard linear half-space viscoelastic solid model. Results In response to a constant negative pressure of 0.2-0.4 kPa, the chondrocytes exhibited standard linear viscoelastic solid properties. Namely, the cells showed an initial elastic response followed by a viscoelastic creep response. then cells continued to enter into the micropipette with a monotonically decreasing rate of deformation, until reaching equilibrium within about (110±18) s. Comparing with chondrocytes, the chondrons exhibited significant viscoelasticity under a greater negative pressure of 1.0-1.2 kPa. But the instantaneous length deformed into the micropipette significantly reduced, and the equilibrium time reduced to (36.5±4.5) s. The equilibrium modulus (E∞), the instantaneous modulus (E0) and the apparent viscosity (μ) of chondrons were significantly higher than the those of chondrocytes. Conclusion Comparing with chondrocytes, the chondrons exhibited significant viscoelastic properties, and viscoelastic properties of chondrons have increased in vitro.     

血清炎症标志物在社区获得性肺炎中的诊断价值

目的 社区获得性肺炎(community acquired pneumonia, CAP)是呼吸系统最常见的疾病之一,不同的患者表现出不同的炎症指标升高,本研究将观察炎症指标对CAP的诊断价值。方法 收集2018年10月至2020年1月,实验组216例,来自中国中医科学院西苑医院肺病科,健康对照组100例,来自体检中心。采用非参数检验分析两组降钙素原(procalcitonin, PCT)、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、白介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞计数(white blood cell, WBC)、中性粒细胞计数(neutrophils, Neu#)和淋巴细胞计数(lymphocyte, Lym#)的相关性;采用卡方检验比较阳性率;Spearman方法分析各炎症指标的相关性;受试者工作特征曲线(ROC)评价炎症指标对CAP的诊断价值。结果 实验组PCT、CRP、IL-6、WBC和Neut#水平均高于对照组,Lym#水平低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组PCT、CRP、IL-6、WBC、Neu...     

蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

陈旧性心肌梗死患者的微伏级T波电交替

目的研究陈旧性心肌梗死(简称心梗)患者的微伏级T波电交替(MTWA),旨在探讨MTWA的临床意义。方法平板运动试验过程中利用渐量修正技术监测陈旧性心梗患者83例(Ⅰ组,依试验过程中有无室性心律失常发生分为Ⅰa、Ⅰb组),健康人群90例(Ⅱ组)的MTWA,分析各组之间MTWA的差异及MTWA与心梗部位的相关性。结果①各导联组间MTWA除aVR导联三组间无差异外,余导联均有差异;②Ⅰa组与Ⅱ组除aVL导联外余各导联MTWA值无差异(P>0.017);Ⅰa组与Ⅰb组Ⅱ、Ⅲ、aVF导联MTWA值有差异(P<0.017),余各导联MTWA值无差异(P>0.017);Ⅱ组与Ⅰb组各导联MTWA值有差异(P<0.017)。③Ⅰb组不同部位心梗的相关导联MTWA值有差异。结论MTWA可作为陈旧性心梗患者发生恶性室性心律失常危险分层的指标。     

黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型标志基因表达和细胞增殖的影响

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响，采用体外培养的血管平滑肌细胞，以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖，在此基础上，通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化，研究黄芪和当归注射液对碱性成纤维细胞生长因子上述效应的抑制作用。结果发现，碱性成纤维细胞生长因子可明显下调分化型标志基因平滑肌α-肌动蛋白的表达，上调去分化型标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达，诱导原癌基因c-jun表达及促进血管平滑肌细胞DNA合成。黄芪和当归可上调分化型标志基因的表达活性，下调去分化型标志基因的表达，不同程度地抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞表型转化和DNA合成，有效抑制血管平滑肌细胞增殖，其作用机制可能与抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的c-jun基因表达有关。二者相比，当归的作用大于黄芪。结果提示，黄芪和当归可从多位点上拮抗碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞表型转化及细胞增殖。     

端粒酶逆转录酶激活脐静脉内皮细胞端粒酶活性

目的　探讨外源性端粒酶逆转录酶 (hTERT)能否激活人脐静脉内皮细胞端粒酶活性 ,为建立体外人脐静脉内皮细胞系奠定基础。方法　用逆转录病毒转染法 ,将编码hTERT片段逆转录病毒载体与VSV G共转染 2 93 GP2 细胞 ,产生病毒上清液 ,感染原代分离的人脐静脉内皮细胞 (hUVEC) ,以嘌呤霉素筛选。观察细胞生长曲线、第Ⅷ因子、CD34、β 半乳糖苷酶染色、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)等指标。 结果　细胞生长曲线显示培养至 30代的转染细胞生长速度基本与原代培养脐静脉内皮细胞一致但快于原代培养传至第 10代内皮细胞 ;RT PCR结果转染细胞有特异扩增 ;衰老指标 β 半乳糖苷酶染色显示转染后细胞胞浆内着染阳性细胞数明显少于第 10代内皮细胞。结论　外源性hTERT转入原代培养人脐静脉内皮细胞 ,可重现其端粒酶活性 ,从而阻止人脐静脉内皮细胞老化     

NF-κB及其调控基因在胃肠道肿瘤发生发展中的作用

核转录因子NF-κB通过调控众多相关基因的转录表达,可介导广泛的生物学作用,参与炎症、应激、免疫反应等.近来研究发现,NF-κB通过调节其下游基因转录,参与多种实体肿瘤的进展.NF-κB活性与肿瘤的关系已成为目前研究的热点,通过IκB的基因治疗或应用抗氧化剂、蛋白酶体抑制剂来抑制NF-κB活性,有望成为肿瘤治疗的新靶点.     

醛固酮对豚鼠耳蜗水通道及离子通道蛋白的作用

目的检测醛固酮作用后早期（6h）及远期（1月）豚鼠耳蜗水通道及离子通道蛋白基因与蛋白质的表达改变情况。方法使用RT-PCR方法检测醛固酮腹腔注射后6h豚鼠耳蜗中Na-K ATP酶β1、β3亚单位及钠离子通道蛋白仅亚单位（ENaCα Subunit）基因表达的改变情况：使用免疫组织化学染色的方法检测醛固酮作用后1月耳蜗水通道蛋白1（AQP1）蛋白的表达情况。结果醛固酮作用后早期,在豚鼠耳蜗中Na-KATP酶β1、β3亚单位的表达情况无明显改变,钠离子通道蛋白仅亚单位则出现明显上调（P〈0．05）;远期则出现AQP1表达的下调（P〈0．05）。结论醛固酮在豚鼠耳蜗中可能通过基因组作用方式发挥作用．并且醛固酮引起膜迷路积水可能是由于其对离子浓度的改变所引起的。     

影响平板运动试验结果的相关因素logistic回归分析

目的探讨冠心病诊断中影响平板运动试验(TET)结果的相关因素。方法回顾分析2014年5月—2017年5月在兰州大学第一医院行TET检查和冠状动脉造影(CAG)检查的患者321例,以CAG结果作为金标准,结合患者临床资料对可能影响TET结果的因素进行单因素和多因素logistic回归分析。结果 321例患者CAG检测阳性182例,阴性139例,TET检测真阳性147例,假阳性59例,真阴性80例,假阴性35例;检测灵敏度、特异度及准确度分别为80.77%、57.55%和70.72%;假阳性率为42.45%,假阴性率为19.23%。多元logistic回归分析结果显示,性别、吸烟和高血压是TET假阳性的独立影响因素(OR=1.453、1.677和2.231,P0.05),冠状动脉病变程度及病变支数是TET假阴性的独立影响因素(OR=2.375、1.963,P0.05)。结论 TET结果的准确性主要受性别、吸烟、高血压及冠脉病变程度及病变支数的影响,临床上应予以重视,结合多种因素进行综合分析。