利用高效液相色谱-电化学法检测尿液8-羟基脱氧鸟苷

目的观察利用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测尿液8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)的效果。方法尿液经前处理后,利用美国Varian Prostar高效液相色谱仪检测8-OH-dG水平。结果8-OH-dG峰与杂质峰分离良好,8-OH-dG浓度在1~25 ng/ml之间呈良好线性,流动相最佳pH为3.5,最佳工作电压为0.80 V,最低检测浓度为0.39 ng/ml,回收率在89.1%和86.1%之间,批内差异(CV)均低于8%。结论该HPLC-ECD法是一种灵敏度高、重复性好的尿液8-OH-dG简便检测方法,值得推广。     

2010-2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌的病原学特征

目的：了解2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌分离株的血清型别、抗菌药物耐药性、毒力基因携带情况以及分子分型特征。方法对广州市2010—2013年食源性疾病监测中分离到的108株副溶血性弧菌进行血清分型、药敏试验以及耐热直接溶血毒素基因（ tdh）、耐热相关溶血毒素基因（ trh）的PCR检测,并进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型。结果2010—2013年广州市副溶血性弧菌的主要血清型为O3：K6（51株,47.2％）、O1：KUT（32株,29.6％）。药敏检测结果显示,分离株对氨苄西林（90.7％）和头孢吡肟（28.8％）耐药率较高,而对复方新诺明、氯霉素则100.0％敏感。多重耐药分析显示,2010—2013年分别有53.6％（15／28）、20.6％（7／34）、18.8％（3／16）、33.3％（10／30）的分离株同时耐受≥3种抗菌药物。毒力基因 PCR检测显示,95.4％（103／108）的分离株为tdh＋trh－,4.6％（5／108）的分离株为tdh－trh＋。 PFGE显示,108株副溶血性弧菌经Not Ⅰ酶切后的PFGE图谱可分为3个聚类,55个PFGE型别,相似值为60.2％～100％。优势血清型O3：K6和O1：KUT主要集中于聚类Ⅱ,O4：K8血清型主要集中于聚类Ⅲ。结论2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌优势血清型为O3：K6和O1：KUT型,菌株对多数抗菌药物仍然比较敏感,但存在多重耐药现象,多数菌株携带tdh基因,PFGE结果提示广州市食源性监测副溶血性弧菌存在遗传多样性。     

猩红热链球菌高通量测序基因组DNA提取方法研究

目的 通过改进猩红热链球菌样本前处理方法,提高提取猩红热链球菌基因组DNA的质量,为高通量测序奠定基础。方法 采用 3种不同的样本前处理方法（方法1为试剂盒推荐法、方法2为加溶菌酶和RNase法、方法3为改良的核酸提取法）提取猩红热链球菌基因组 DNA,并对提取的基因组 DNA分别进行浓度、纯度以及完整度检测,并进行高通量测序分析。结果 方法1提取的3株分离株的基因组DNA浓度分别为2.08、1.02和2.24 ng/μL,A260/A280比值为2.200~2.300,A260/A230比值为0.612~0.823;方法2提取的3株分离株的基因组DNA浓度分别为4.04、4.46、4.12 ng/μL,A260/A280比值为1.862~1.952,A260/A230比值为1.922~2.150;方法3提取的3株分离株的基因组DNA浓度分别为58.60、50.00、62.60 ng/μL,A260/A280比值为1.802~1.832,A260/A230比值为2.440~2.531。琼脂糖凝胶电泳分析结果显示,仅方法3的电泳条带比较完整,且亮度较亮;以方法3提取的宏基因组DNA作为模板,可以得到高质量的高通量测序结果。结论 不同的猩红热链球菌样本前处理方法会影响基因组DNA的纯度、浓度和产量,改良的猩红热链球菌样本前处理方法可以为后续的高通量测序提供高质量的模板。     

实时荧光PCR技术检测珠江水霍乱弧菌

目的 运用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,建立外环境水体霍乱弧菌快速检测方法,应用于珠江水的霍乱弧菌检测.方法 定期定点采集珠江河口水体,实时荧光PCR对样本进行筛查,结合常规分离培养、进行O1/O139群霍乱弧菌的检测.结果 共采集了567份标本,实时荧光PCR检测阳性184宗,分离培养阳性菌24株,霍乱弧菌检出率4.23%,明显高于前年同期常规分离培养方法的1.19%,差异有高度显著性(P<0.01).结论 实时荧光PCR检测霍乱弧菌可提高检测灵敏度,有效提高样本的检出率、检验及时性与准确性.     

广东省2003-2011年35株C群脑膜炎奈瑟菌多位点序列分析

流行性脑脊髓膜炎(流脑)近年来在广东省发病维持在低水平,但流行菌群有不断变迁趋势,B、C群菌株已成为主要致病菌群之一.本研究采用多位点序列分析(MLST),对2003-2011年广东省保存的35株C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)分离株开展分子流行病学研究,探讨菌株间遗传进化关系.     

珠江河口水体霍乱弧菌污染状况调查研究

目的:了解珠江河口水体01/0139群霍乱弧菌的污染情况,提出改善水体霍乱弧菌监测的建议,为采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行提供依据.方法:根据历年霍乱监测资料和疫点分布状况,在珠江水系广州段选择设立24个采样点,每月采集水体标本进行01/0139群霍乱弧菌分离培养,对分离得到的阳性菌株进行血清分型、噬菌体一生物分型、PCR检测毒力基因、K-B法药敏试验.结果:2006年3月～2007年2月共采取862份水体样本,其中有67份检出01或0139群霍乱弧菌,检出率为7.77%,血清型以01群为主,尤以稻叶型占优;01群菌株均为非流行株,2株0139群菌株检出ctx毒力基因;菌株耐药分析发现不同血清型菌株耐药谱有所差异.结论:01/0139群霍乱弧菌在珠江河口水体环境中广泛存在,常年均可从水体中分离获得.必须加强环境水体及海水产品霍乱弧菌监测,及时了解其污染状况,以便采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行.     

2007年茂名地区霍乱弧菌流行菌型及其耐药性研究

目的掌握茂名地区霍乱弧菌的流行菌型及其耐药性，为霍乱的防控工作提供参考。方法采集霍乱日常监测标本和霍乱疫情标本，参照《霍乱防治手册》（第5版）进行霍乱弧菌的分离培养和菌型鉴定，并利用全自动微生物鉴定仪对获得的霍乱弧菌菌株进行临床常用的20种抗菌药物的药敏分析。结果共采集各类标本334份，检出12株01群埃尔托型（El Tor）霍乱弧菌稻叶型流行株（1d）。12株霍乱弧菌对20种药物的敏感度完全一致，其中敏感抗生素有菌必治、庆大霉素等11种，占55％（11／20）；中敏抗生素有氨苄青霉素等8种，占40％（8／20）；100％耐药的抗生素为复方新诺明1种，占5％（1／20）。结论2007年茂名地区霍乱弧菌的流行菌型为01群埃尔托型（El T0r）霍乱弧菌稻叶型流行株（1d）；该流行菌型的菌株除对1种抗生素（复方新诺明）耐药外，对其余大多数抗生素均敏感（或中敏），没有出现多重耐药菌株。     

霍乱弧菌基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术谱库的构建

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAIDI-TOF MS)技术构建霍乱弧菌谱库。方法选取56株有代表性的霍乱弧菌,在相同环境下培养,通过生化、分子生物学及血清型鉴定,利用MAIDI-TOF MS对56株霍乱弧菌进行质谱数据采集,建立数据库。另选取10株野生霍乱弧菌及104株非霍乱弧菌用自建数据库进行MAIDI-TOF MS检测及评价。结果自建数据库对10株野生霍乱弧菌鉴定,阳性率为100%,对104株非霍乱弧菌鉴定,均无误判,菌种鉴定结果可靠。56株霍乱菌株的聚类分析发现,MALDI-TOF-MS分型与血清型抗原分类之间无相关性,不同血清型间的质谱数据差异不明显,不能用于区分血清型别。结论本研究建立的霍乱弧菌谱库对霍乱弧菌的鉴定准确性高,适用于实际检测。本研究结果填补了谱库中缺失的霍乱弧菌谱库,建立了霍乱弧菌的MAIDI-TOF MS检测鉴定平台,同时也为其他细菌建立或补充完善谱库提供了很好的方法借鉴。     

两种技术在广东地区布鲁氏菌菌株分型中的应用与评价

目的 对脉冲场凝胶电泳方法(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分型(MLVA)两种分子分型方法在布鲁氏菌分型研究中的应用进行比较和评价。方法 采用PFGE和MLVA分子分型方法对60株布鲁氏菌地方株和3株标准菌株(16M、544A、1330S)进行分型比较。结果 63株菌株间PFGE相似性系数介于72.1%～100%,在94.4%相似水平可区分羊、猪、牛3个种,在100.0%相似水平上可分为14个群29种PFGE型别,分辨力为0.957 5;MLVA相似性系数介于16.9%～100%,在52.3%相似水平可区分羊、猪、牛3个种,在100.0%相似水平上可分为8个群47种MLVA型别,分辨力为0.985 2。结论 PFGE和MLVA均可在一定的相似系数从种的水平区分羊、猪、牛3个种,但不能区分同种异型;两种方法均可用于布鲁氏菌的分子分型,MLVA较PFGE具有稍高的分辨能力。