生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。     

深化教学改革 加强《医学微生物学》精品课程建设

精品课程建设是教学质量工程的重要组成部分，我们从教学内容、教学方法和教学手段、师资队伍、教学与科研良性互动等方面进行实践，加强医学微生物学精品课程的建设。     

Effect of HCMV IE1 Protein on Cytokines Secretion and Apoptosis of Macrophages

Objective： To investigate the effect of human cytomegalovirus （HCMV） IE1 protein on the secretory activity and apoptosis of macrophages. Methods： The eukaryotic expression vector pEGFP-C1/IE1 was used to transfect THP-1-macrophages. 48 h after transfection, the expression and localization of GFP or GFP-IE1 was observed under fluorescent microscope. The levels of IL-1β and TNF-α in the culture media were examined by ELISA, and the mRNA expression of them was analyzed by RT-PCR. Cell undergoing apoptosis were determined by flow cytometry using the propidium iodide （PI） staining method. The data were analyzed by SPSSI3.0. Results： As observed under fluorescent microscope, the expressions of GFP-IEI and GFP by plasmid pEGFP-C1/IE1 or pEGFP-C1 in THP-1-macrophages could be found in nuclei or whole cells. Conclusion： As demonstrated by RT-PCR and ELISA, mRNA and protein expressions of IL-1β and TNF-α and promotes apoptosis in THP-1-macrophages.     

湖南地区3545例结核病患者梅毒螺旋体感染情况分析

目的：分析湖南地区结核病（ TB）患者中梅毒螺旋体（ TP）感染状况及特征。方法采集3545例TB患者静脉血进行TP相关血清学检测,同时收集患者临床资料并行流行病学调查。结果3545例TB患者中共检出TP感染106例（2．99％）。不同年份TB患者TP感染率差异有统计学意义（P＜0．01）,且总体呈上升趋势。男性TP感染率（3．75％）高于女性（2．04％）,P＜0．01。21～50岁组感染率（4．53％）、51～88岁组感染率（3．20％）高于6～20岁组（1．03％）,P均＜0．01。职业不详（含不便分类者）感染率（5．25％）＞工人组（2．68％）＞农民组（2．56％）,P均＜0．01。检出3种合并感染模式,共计17例（占16．04％）。其中TP合并HBV、TP合并HCV双重感染分别为12例（0．34％）、4例（0．11％）;TP、HBV、HIV三重感染1例（0．28‰）。结论湖南地区TB患者有着较高的TP感染率,且伴有HCV和HIV合并感染的趋势。应进一步加大TB患者中TP、HBV、HIV、HCV监测力度,制定有针对性的防治对策。     

广东江门市性高危人群支原体感染分析

目的：了解广东江门市性高危人群解脲脲原体(Uu)、人型支原体(Mh)与穿透支原体(Mpe)感染现状。方法：设计Uu、Mh、Mpe引物，用PCR扩增425例按摩妇女等标本，统计分析Uu、Mh、Mpe感染。结果：Uu阳性297例(69．9％)，Mh阳性162例(38．1％)，Mpe阳性仅1例(0．23％)。结论：广东江门市性高危人群的Uu与Mh感染率明显高于非性混乱人群(P＜0．05)。Mpe的感染率很低。     

医学微生物学精品课程建设的探索与实践

课程建设是教学质量的中心环节,是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现培养目标的基本保证。为做好医学微生物学精品课程的建设工作,从师资队伍、教学科研相结合、教学内容、教材建设、教学方法和手段、实践教学等方面进行了探讨和实践,取得了显著的成效。     

衡阳地区2008年—2012年支原体感染及药敏情况分析

目的分析衡阳地区泌尿生殖道人型支原体(M.hominis,Mh)与解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)感染趋势及其耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法采用分离培养方法检测534例疑为泌尿生殖道支原体感染患者分泌物中的解脲脲原体和人型支原体,并测定阳性培养菌对常见抗生素的敏感性。结果 534份临床标本共检测出支原体198例,阳性率为37.1%,其中Uu感染102例(19.1%),Mh感染60例(11.2%),Uu合并Mh感染36例(6.7%)。支原体感染率呈逐年下降趋势。Uu对四环素、交沙霉素、强力霉素、美满霉素及克拉霉素较为敏感,而Mh对克拉霉素敏感性差。Uu合并Mh感染对克拉霉素耐药,但对交沙霉素和强力霉素敏感。结论 Uu和Mh在泌尿生殖道感染率高,其混合感染使耐药性增加。交沙霉素、美满霉素和强力霉素可作为治疗支原体感染的首选药物。     

生殖支原体黏附素蛋白模拟表位的筛选和鉴定

目的制备兔抗重组生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa)的多克隆抗体(pAb),以期筛选MgPa的模拟表位。方法用rMgPa免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa的pAb,以此pAb为靶分子对噬菌体展示随机12肽库进行生物淘洗,随机挑取74个噬菌体克隆进行DNA测序与分析,用ELISA检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果制备了兔抗rMgPa的特异性pAb,以此抗体为靶分子对噬菌体展示肽库进行生物淘洗后,特异性噬菌体克隆得到了明显富集。经对74个噬菌体克隆所展示的外源性多肽序列进行比较分析,共可大致分为3组一致性的核心序列:P-S-A-A/V-X-R-F/W-E/S-L-S-P,A-K-I/L-T/Q-X-T-L-X-L和K-S-L-S-R-X-D-X-I。ELISA结果说明36个噬菌体克隆能与pAb发生特异性结合,因此,这三组核心序列可能是MgPa的模拟表位。结论成功制备了兔抗rMg-Pa的pAb,并筛选到MgPa的3个可能的模拟表位,为进一步研究Mg的诊断与预防提供一定的实验依据。     

人乳头瘤病毒16型E2蛋白真核载体的构建与表达

目的构建人乳头瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白真核载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E2基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1（＋）,双酶切及测序鉴定。将质粒pcDNA3.1（＋）与pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2分别转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E2基因在HeLa细胞中的表达。结果 HPV16 E2基因片段插入到pcDNA3.1（＋）相同酶切位点,即构建了真核表达载体pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2;转染pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2的细胞,检测到HPV16 E2 mRNA。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2能在HeLa细胞内有效表达。     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5原核表达及免疫原性鉴定

目的 构建沙眼衣原体(CT)pORF5蛋白基因重组质粒pGEX-6p/pORF5,表达并纯化质粒蛋白pORF5,并鉴定其免疫原性.方法 用PCR法扩增pORF5基因,定向插入pGEX-6p原核表达载体构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达pORF5融合蛋白.融合蛋白纯化后免疫BALB/c鼠,ELISA及Western-blot分析pORF5质粒蛋白免疫原性及免疫反应性.结果 PCR扩增出795 bp基因片段,序列测定证实重组质粒插入片段与GenBank登陆的D型Ct一致;pORF5融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;ELISA检测免疫小鼠的血清效价为1:25 600.结论 pORF5蛋白在原核细胞中可有效表达并具有较好的免疫原性,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件.