PCR方法检测EHEC O157：H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的：应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物，对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157：H7（EHEC O157：H7）检测鉴定，全面了解此类菌的致病力情况。方法：分纯并富集被鉴定菌株，首先以单克隆诊断血清学凝集，阳性者再经100℃水煮制成粗模板，应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及stx2及其变种5种基因，扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照。结果：45株被检测菌经PCR扩增检测，5种基因全部阳性的有10株，4种基因出现阳性的只有1株，3种基因阳性的有6株，2种基因阳性的有17株，1种基因阳性的有10株，1株菌的5种基因检测均为阴性。45株菌中和。，阳性的有44株fliCH7基因阳性的菌株有30株，hlyA阳性的菌株只有10株，eaeA阳性基因的菌株有21株，stx2及其变种阳性的也只有11株。结论：这次45株菌中有5株具有全部的5种基因，44株为EHEC O157，其中30株为EHEC O157：H7，这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性，而且能较全面地反应其毒力强度，适合于有条件的基层实验室开展。     

徐州市肠出血性大肠杆菌O157:H7宿主动物的监测研究

目的系统观察宿主动物携带大肠杆菌O157:H7水平及菌株毒力变化,为制订O157:H7感染性疾病防制策略提供依据。方法采集徐州市疫情暴发点和监测点宿主动物粪便标本分离菌株。应用PCR技术检测stx1和stx2毒力基因。采用R×C列表χ2检验、确切概率法对宿主动物粪便带菌情况和变化趋势进行统计学分析。结果共监测宿主动物粪便3608份,带菌145份,带菌率为4.02%。随着年份的不同宿主动物带菌率有明显的差异(χ2=337.00,P<0.05)。不同的宿主动物带菌率不相同。牛、羊1999年带菌率与其他年份差异明显(χ2=4.98,P<0.05)。不同年份O157:H7毒力基因发生了变化。结论徐州市1999—2006年O157:H7宿主动物带菌情况、菌株带毒情况发生了明显变化。牛、羊是主要的宿主动物,猪、鸡是否为宿主动物有待进一步研究。     

中国部分地区大肠埃希菌O157的分子分型及变异研究

目的了解出血性大肠埃希菌（EHEC）O157的分子流行特征和遗传变异关系并完善EHECO157：H7感染性腹泻监测制度。方法采用聚合酶链反应分析毒力基因的分布情况；用脉冲场凝胶电泳技术对1988-2005年部分地区分离到的249株EHECO157：H7（其中产志贺毒素的245株，不产志贺毒素的4株）和51株O157非H7进行分子流行病学分析。结果stx2基因在我国的EHECO157：H7菌株中有着很高的分布率，部分菌株携带stx2基因变种。300株O157共分为161种带型，其中51株O157非H7菌株共有42种带型，4株O157：H7非产毒株分别为4种带型，245株EHECO157：H7共有115种带型。结论EHECO157间的基因变异较大；产stx2原毒素的菌株和5衄2毒素发生变异的菌株带型相差较大。部分菌株之间存在着一定的交叉，说明虽然这两大类菌株有其特有的流行克隆系，但是它们的克隆系之间亲缘关系较近。     

猪链球菌分泌蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的 寻找猪链球菌(S.suis)SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索.方法 采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF MS)技术,分析和鉴定S.suisSC84菌株分泌蛋白中能与感染病例恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点.结果 在S.suis SC84菌株分泌蛋白的免疫杂交膜上,共发现14个具有抗原活性的蛋白点,其中11个点可以在考马斯蓝染色胶上找到匹配点.11个蛋白点经质谱鉴定,分属于8种蛋白,全部定位于胞壁或胞外.其中溶菌酶释放蛋白、溶血素、细胞外因子为S.suis 已知的抗原蛋白;5'-核苷酸酶、ribonucleases G和E、金属内肽酶等为新发现的具有抗原活性的蛋白;所有的蛋白均能在测序菌株S.suis 05ZYH33基因组中找到相应的编码基因.结论 在S.suis 分泌蛋白中发现了新的具有抗原活性的蛋白,可能作为S.suis特异诊断抗原和疫苗候选抗原,用于诊断试剂和疫苗的研究.     

中国六省致病小肠结肠炎耶尔森菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 对中国致病小肠结肠炎耶尔森菌分离株进行脉冲场凝胶电泳分析。方法 参照美国疾病预防控制中心PulseNet实验方法对中国6省165株致病小肠结肠炎耶尔森菌进行脉冲场凝胶电泳分析，使用BioNumerics软件进行聚类分析，并按照PulseNet命名原则对带型进行命名。结果 将114株O：3血清型小肠结肠炎耶尔森菌分成25个带型；K6GNllC30012（50株）、K6GNllC30015（19株）及K6GNllC30016（10株）是其主要带型，三个主要带型之间聚类相似性很高。将51株O：9血清型小肠结肠炎耶尔森菌分为14个带型；其中K6GNllC90004（22株）与K6GNllC90010（13株）是其主要带型，K6GNllC90004与K6GNllC90010带型之间有一定的差异。O：3与O：9血清型的主要带型之间有明显的差异。结论 O：3血清型的小肠结肠炎耶尔森菌可能起源于一个克隆系，且在不同地区和年代变异很小；O：9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌可能起源于两个不同的克隆系，且各自有一定的变异。O：3与O：9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌亲缘关系较远。     

广州市某野生动物市场从业人员携带SARS冠状病毒抗体状况调查

目的了解广州市新源野生动物市场从业人员严重急性呼吸综合征（SANS）抗体产生情况及其暴露果子狸的关系。方法对野生动物市场从业人员中的志愿者进行SARS病毒血清抗体监测，对监测结果结合果子狸在市场的存在情况进行分析。结果2003年5和12月、2004年1和7月、2005年6月，共5次分别对328、238、135、139和53名市场从业人员开展调查，SARS病毒IgG抗体检出率依次为25．61％、13．03％、12．59％、5．04％和9．43％，没有检测到SARS病毒IgM抗体。在接受2次以上随访调查的129人中，97人的血清抗体一直为阴性，博人一直为阳性；有13人从阳性转为阴性，有1人从阴性转为阳性。在清除果子狸后进入市场的工作人员，SARS病毒IgG抗体检测全部阴性。结论广州市新源野生动物市场从业人员SARS病毒抗体检出率和市场内果子狸的存在情况密切相关。     

耶尔森菌的分子分型

耶尔森菌属包括11个种,其中能引起人类疾病的有鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌.本文综述了目前耶尔森菌多种分子分型技术的研究现状.这些分子分型技术是对常规表型分型技术的补充和深入,使我们对所要研究的细菌有更加全面的了解.     

小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备

目的 利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定.方法 用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果 筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应.结论 本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象.     

非致病性小肠结肠炎耶尔森菌ail基因克隆菌株的构建及其侵袭性研究

目的 利用3种不同序列型致病性肠结肠炎耶尔森菌的ail基因构建非致病性小肠结肠炎耶尔森菌ail基因克隆菌株,并对其进行表达和侵袭性研究.方法 将3种不同序列型ail基因连接到载体pMD18-T后转化入非致病性小肠结肠炎耶尔森菌Y40中.井以HEP-2和HT-29细胞做粘附侵袭实验.结果 经PCR和序列分析证实3种序列型...     

用免疫胶体金快速诊断卡初筛粪便中的O157∶H7大肠杆菌

我们用O15 7∶H7大肠杆菌免疫胶体金快速诊断卡 ,对腹泻患者粪便标本中的E .coliO15 7∶H7进行初筛 ,然后再用免疫磁珠捕获集菌及病原菌的分离和鉴定。结果发现 ,该诊断卡可检测到每卡 70个菌细胞。诊断卡强阳性的粪便标本 ,91 18%可以分离到O15 7∶H7大肠杆菌 (31/34 ) ;诊断卡弱阳性的粪便标本 ,5 47% (7/12 8)可以分离到O15 7∶H7大肠杆菌 ;诊断卡阴性的粪便标本 ,没有分离到病原菌。O15 7∶H7大肠杆菌免疫胶体金快速诊断卡是一种快速、灵敏、简便的技术 ,可用于对疑似病例的早期诊断和对粪便标本进行初筛 ,减少了工作量 ,值得推广。