改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用

目的改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coliDH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSF lA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。     

用重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性

目的　建立一种特异性强 ,灵敏度高的结核分枝杆菌 (结核菌 )的检测及药敏试验方法。方法　采用生物发光技术检测可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体phage 40 ,对不同细菌的发光反应和药敏试验进行测定 ,探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和特异性。结果　phage 40对各种分枝杆菌均有特异性发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性意义 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,在 4 2× 10 6 ml时最大发光值为 2 84 7mV ,结核菌的发光值最低 ,H37Ra在 6 4× 10 6 ml时最大发光值为 72 4mV ,H37Rv在 7 6× 10 6 ml时的最大发光值是 74 3mV ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核菌的发光强度比非耐药结核菌强 ,其强度差异有显著性意义。phage40的药敏试验结果与常规罗氏培养基法符合率一致 ,可在 72h内得到结果。结论　生物发光技术可快速、敏感地检测结核菌 ,通过发光分析 ,建立了一种简便、快速的药敏试验方法     

吡嗪酰胺抗结核杆菌作用机制的研究进展

吡嚎酰胺（PZA）是一种重要的抗结核杆菌的一线药物,对处于酸性环境中缓慢生长的吞噬细胞内的结核杆菌来说,PZA是目前最佳杀菌药物,这种特性是其他药物不具有的,且使得PZA对于缩短疗程从12～9个月到目前的6个月有着重要的作用。由于它具有不同于其它抗结核杆菌药物的一些优点,使得近年来对PZA的研究成为热点。尽管PZA作为抗结核药物已经普遍应用,但至今人们对于PZA抗结核杆菌的作用机制、作用靶点、结核杆菌耐受机制等还了懈甚少。本文就目前国内外对PZA抗结核杆菌作用机制的研究做了相关归纳如下。     

金纳米颗粒修饰寡核苷酸适配子对蛋白质进行比色检测方法

目的 利用核酸适配体（aptamer）建立一种检测与疾病有关蛋白质的新方法。方法 用金纳米颗粒（AuNP）修饰的寡核苷酸适配子与蛋白质结合,同时另一个生物素化的寡核苷酸适配子也结合于蛋白质,构成一个三明治形式的复合物,接着三明治复合物被卵白素结合于酶标板上,利用银离子强化技术对复合物上的蛋白质浓度信息进行放大,然后用酶标仪对吸光度进行检测。结果（1）本研究可以得到吸光度与PDGF—BB浓度的剂量一效应关系曲线,在一定的浓度范围内（1fM～1μM）,吸光度与PDGF—BB浓度的对数值呈线形相关,决定系数R^2=0．9801;（2）本方法可以检测出1fmol／L的靶蛋白质。结论本方法有较高灵敏度,不需要复杂的仪器,易于操作,是一种新颖而应用前景的蛋白质标志物分析方法。     

武汉市市政供水系统中总有机碳测定的应用

目的：总有机碳（TOC）相对于化学耗氧量（COD）能更全面的反应水体中有机物的污染程度,且TOC测定操作更简单,数据更准确。方法：分别测定水体的TOC和COD,通过回归方程计算COD的理论值,利用统计方法分析测定结果。结果：水体中的总有机碳和化学耗氧量存在良好的相关性,相关系数在0.7以上,且化学耗氧量的理论值与实测值不存在显著差异。结论：该研究为TOC代替COD提供了实践依据,总有机碳的测定将得到更加广泛的应用。     

带蒂大网膜移植治疗慢性脊髓损伤的疗效分析

脊柱损伤常合并脊髓损害结果导致肢体不同程度瘫痪,对这些病例至今尚无有效的治疗方法。我院共收治了30例慢性脊髓损伤病人,应用带蒂大网膜脊髓移植术,进行治疗,术前后对临床症状及体感诱发电位(SSEP)的变化进行了分析。手术后随访6个月～18个月,结果是这些病人术后运动、感觉和括约肌功能改善的有效率分别为29.1％、66.7％和83.3％,SSEP恢复率为62.5％。本文目的是探讨大网膜脊髓移植术对慢性脊髓损伤治疗作用的临床意义。     

应用Meta分析方法分析血清p53抗体和肺癌预后关系

目的　探讨血清 p5 3抗体和肺癌预后的关系。方法　应用Meta分析Dersimonian Laird分析模型对有关血清p5 3抗体和肺癌预后的文献进行综合定量评价。入选 11篇文献 ,病例 136 0例 ,血清p5 3抗体阳性 30 5例 ,阳性率2 2 .4 3%。结果　入选文献一致性检验 ,Q值为 2 6 .5 7,P <0 .0 0 5。文献具有异质性。合并相对危险比 (HR)为 1.6 7,95 %可信区间 1.17～2 .35 ,在敏感性分析中HR为 1.6 2 ,表明结果稳定可靠。结论　血清 p5 3抗体可能是肺癌患者预后的危险因素 ,这一发现有利于肺癌的决策治疗。     

枸橼酸他莫昔芬胶囊的人体生物等效性

目的:研究枸橼酸他莫昔芬胶囊在人体的相时生物利用度和生物等效性.方法:20名健康男性受试者,采用双周期交叉、自身对照试验设计,分别单剂量口服枸橼酸他莫昔芬受试和参比制剂各40 mg,采用液相色谱-串联质谱法测定其血药浓度,应用DAS软件计算药动学参数和相对生物利用度,评价2种制剂的生物等效性.结果:枸橼酸他莫昔芬受试和参比制剂的主要药动学参数:t1/2分别为(53.5±14.4)h和(51.7±8.9)h;tmax分别为(3.9±0.9)h和(4.0±1.1)h;Cmax分别为(108.1±19.8)μg·L-1和(101.3±16.5)μg·L-1;AUC0-72分别为(3 073.7±439.1)μg·h·L-1和(3148.8±373.7)μg·h·L-1;AUC0-∞分别为(5 074.8±1 082.2)μg·h·L-1和(5 121.2±902.0)μg·h-1.方差分析结果表明,2种制剂的主要药动学参数之间差异无显著性.枸橼酸他莫昔芬受试制剂的相对生物利用度为(97.9±10.8)%.结论:经统计学分析,两种制刑具有生物等效性.     

Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。