慢性铅暴露小鼠海马CaMKⅡ、CREB与学习记忆损伤的关系

目的 环境中低浓度铅暴露对儿童中枢神经系统的损伤作用，特别是对儿童学习记忆，心理行为的影响受到人们的普遍关注。由于血脑屏障没有发育完整，儿童的血铅浓度达到100μg／L时便可以导致学习记忆及行为异常。研究表明，在长时程记忆过程中，转录因子CREB起着关键性的作用。CaMKⅡ是磷酸化CREB的重要蛋白激酶之一。铅对它们的影响至今还见报道。本研究观察慢性染铅小鼠海马CaMKⅡ、CREB基因及蛋白的表达水平，探讨铅致学习记忆功能异常的分子机制。     

慢性染铅对小鼠海马Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。     

线粒体及内质网对铅引起的[Ca2+]i升高的作用

目的 研究线粒体、内质网Ca^2 -ATP酶以及Na^ 和K^ -ATP酶活力的改变对铅引起的[Ca^2 ]i升高的调节作用，探讨铅引起的[Ca^2 ]i增高对学习记忆功能的影响。方法 Wistar大鼠神经肉瘤C6细胞培养于含醋酸铅的培养液中，于不同时间终止染铅，检测[ca2’]；及线粒体、内质网Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力。结果 (1)0．2μmol／L染铅组：[Ca^2 ]i轻度升高，线粒体Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力升高，内质网酶活力略增高；(2)1．0μmol／L染铅组：[Ca^2 ]；于染铅后0．5h升至最高，以后逐渐降低，波动于iL60～190nmol／L之间；线粒体、内质网Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶于染铅后0．5h升至最高(分别为未染铅前酶活力的29．1、39．2、10．8和19．8倍)，2d后降至接近正常水平。结论 (1)铅可使Wistar大鼠神经肉瘤C6细胞Ca^2 浓度及线粒体、内质网Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力增高；(2)当[Ca^2 ]i增高不显著时以线粒体Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力增高为主；当[Ca^2 ]i急剧升高时，线粒体、内质网Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力均明显增高，尤其是线粒体Ca^2 -ATP酶、Na^ 和K^ -ATP酶活力增高更为显著。     

慢性铅暴露对小鼠pCREB蛋白表达影响

目的探讨铅对小鼠海马磷酸化环磷酯腺苷（cAMP）反应成分结合蛋白（pCREB）表达的影响。方法小鼠出生第1 d起染铅组母鼠开始通过饮水饲以2.4,4.8,9.6mmol/L浓度醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,28,42,56 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区pCREB蛋白表达状况。结果慢性铅暴露小鼠脑海马pCREB蛋白的表达总体上呈现下降趋势,与对照组比较,2.4mmol/L铅暴露使14 d小鼠pCREB蛋白表达升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）;而4.8,9.6mmol/L铅暴露组pCREB蛋白表达一直维持在较低的水平,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论铅扰乱pCREB蛋白正常表达。     

急、慢性染铅对cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的探讨急、慢性染铅对大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法急性染铅实验:取正常30d大鼠海马脑片培养,分别用含20μmol·L-1醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,作为急性染铅标本。慢性染铅实验:孕鼠在体染铅,取新生大鼠海马作为慢性染铅标本。用蛋白质免疫印迹法测定标本CREB的活性(即磷酸化CREB)和总量CREB的含量。结果急性染铅实验:海马脑片培养中,染铅组CREB的活性随时间延长而下降,染铅组和对照组总量CREB含量均无显著性变化。慢性染铅实验:总量CREB的含量无显著性变化。结论急性染铅引起CREB的活性下降,对总量CREB含量没有显著影响。慢性染铅总量CREB含量无显著性变化。     

P38MAPK、caspase-8在Fas-放线菌素D诱导Bel-7402细胞凋亡中的作用

目的 确定P38MAPK、caspase-8的关系,以探讨Fas-actinomycin D(Fas-AD)诱导Bel-7402细胞凋亡的信号转导机制.方法 通过流式细胞仪检测Fas-AD、SB203580(P38MAPK特异性抑制剂)及Ac-IEFD-cho(caspase-8特异性抑制剂)对Bel-7402细胞凋亡的影响;通过Western-blot法检测Fas-AD、SB203580及Ac-IEFD-cho对培养的Bel-7402细胞的P38MAPK、caspase-8的激活及其表达的影响.结果 Fas-AD能明显诱导Bel-7402细胞凋亡,SB203580和Ac-IEFD-cho能明显抑制Fas-AD诱导的细胞凋亡.Fas-AD能诱导P38MAPK、caspase-8激活并表达,而SB203580和Ac-IEFD-cho能分别抑制它们的激活及表达.结论 在Bel-7402细胞凋亡中,P38MAPK与caspase-8参与Fas-AD凋亡途径,并且相互调节.     

铅对大鼠神经胶质培养细胞ERK活力及总量的影响

目的探讨不同浓度、不同时间染铅对体外原代培养的神经胶质细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)活力及总量的影响。方法出生4~8d Wistar大鼠脑神经胶质细胞原代培养,细胞不同浓度及不同时间染铅组及丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated proteinkinase,MAPK)特异抑制剂PD098059预处理组分别收集作为样品,应用Western印迹法测定样品ERK活力及总量的变化。结果0.2、1.0、10μmol/L染铅后,神经胶质细胞中ERK活力均显著增高,分别比对照增高了19.7%、69.8%和16.1%(P<0.05);PD98059抑制铅激活ERK活力,1.0μmol/L染铅30min时ERK活力最高,约为对照的2倍(P<0.05),120min时降至接近正常。染铅后ERK总量无变化。结论低浓度染铅可使原代培养的神经胶质细胞中磷酸化的ERK含量短暂升高,一段时间后又恢复正常,而对ERK的总量无影响。     

bFGF和celecoxib对胃癌BGC-823细胞株生长的影响及其机制

目的：探讨bFGF和celecoxib对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的作用及对COX-2、NF-κB、VEGF蛋白表达的影响.方法：bFGF和celecoxib作用于BGC-823人胃癌细胞后，MTT比色法测定细胞的增殖，使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，荧光显微镜观察细胞凋亡形态，应用Western印迹分析法检测COX-2、NF-κB和VEGF蛋白的表达.结果：25ng/ml bFGF对BGC-823细胞有促增殖作用，能增强COX-2、NF-κB、VEGF蛋白表达，呈时间依赖性（P＜0.01）.不同浓度的celecoxib对BGC-823人胃癌细胞均有增殖抑制作用，并能促进细胞凋亡，使COX-2、NF-κB、VEGF蛋白表达明显减弱，呈浓度依赖性（P＜0.01）.结论：bFGF对BGC-823细胞具有促进增殖和COX-2、NF-κB、VEGF蛋白表达的作用.celecoxib对BGC-823细胞具有促进凋亡和抑制COX-2、NF-κB、VEGF蛋白表达的作用.COX-2、NF-κB、VEGF之间具有相关性（r分别为0.852、0.908、0.930，P＜0.01）.     

慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响

目的研究慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)表达的影响,探讨mTOR在慢性铅暴露所致小鼠海马神经元学习记忆功能障碍中的作用。方法 5⁶周龄小鼠交-1配后,铅暴露组仔鼠通过胎盘、乳汁和饮水饲醋酸铅2.4,4.8和9.6mmol·L,连续42d。对照组鼠饮用自来水。第42天检测血及脑铅浓度,Western印迹法检测脑海马总量mTOR(t-mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达。结果各慢性染铅组小鼠血铅和脑铅含量均明显高于对照组(<0.01),升高的程度与饮用水的铅浓度呈正相关。慢性染铅组小鼠大脑海马组织p-mTOR表达水平呈下降趋势,各染铅组p-mTOR表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(<0.05)。p-mTOR表达与血、脑铅浓度呈负相关(r=-0.82,铅对小鼠大脑皮层神经元t-mTOR的磷酸化没有影响。结论 p-mTOR蛋白的表达量随着铅暴露的浓度升高而降低,与铅致小鼠学习记忆功能减退有关。P P P<0.01),铅对小鼠大脑皮层神经元t-mTOR的磷酸化没有影响。结论　p-mTOR蛋白的表达量随着铅暴露的浓度升高而降低,与铅致小鼠学习记忆功能减退有关。     

运动对大鼠骨骼肌GLUT-4表达的影响

将40只SD大鼠随机分为5组,A组为安静对照组,B、C组每天运动1 h,D、E组每天运动1.5 h,共7周,B组与D组、C组与E组分别于运动结束后24、48 h取材,测定葡萄糖和胰岛素水平;Western blot法检测骨骼肌葡萄糖载体-4(GLUT-4)蛋白表达;RT-PCR法分析GLUT-4 mRNA表达.发现与对照组比较,各运动组糖耐量胰岛素水平均降低,GLUT-4蛋白表达均升高;D、E组GLUT-4 mRNA表达增加.认为耐力运动提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,促进GLUT-4蛋白和基因表达.