人红细胞非凝集型单克隆抗体的研制及鉴定

以人Ｏ型红细胞免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，以红细胞凝集试验，剔除分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞后，以抗球蛋白试验筛选分泌非凝集型抗体的杂交瘤细胞株，共获４株分泌非凝集型抗体的杂交瘤细胞株并对其进行鉴定。结果表明，４株杂交瘤细胞所分泌的抗体在盐水介质中不能直接使红细胞发生凝集反应，但可使人红细胞致敏，在抗鼠球蛋白搭桥下可使红细胞凝集。这种凝集反应与红细胞血型无关，与红细胞的形态及疾病亦无关。     

ELISA快速检测单纯疱疹病毒抗原

用ELISA双抗体夹心法检测65份不同来源临床标本中HSV抗原,其结果分别与病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)进行比较。病毒分离的阳性率为40％(26/65),接种后72h内出现典型细胞病变的占53.85％(14/26)。34份临床标本同时做IFA检测,阳性率为38.2％(13/34)。ELISA检测的阳性率为35.4％(23/65),与病毒分离和IFA结果的符合率分     

小儿恶性淋巴瘤的误诊分析

我院收治的88例恶性淋巴瘤患儿,在院外误诊率为88.7％,误诊病种共15种。本文就其具有代表性的举例如下,并简要的剖析其原因以便吸取经验教训,此88例入院后均经病理证实。一、因淋巴结肿大误诊为淋巴结炎、淋巴结核:文献报告以浅在淋巴结肿大为首发症状者,有33％～80％以上病例被误为淋巴结炎及淋巴结核。Sutow等也报告许多病例初诊时误诊为与感染有关的淋巴结炎等疾病,本组63例以浅表淋巴结肿大者,有48例(76.2％)也误诊为淋巴     

致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测

目的建立多重PCR体系．实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf，（epf^＊）和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列，设计和合成4对特异性引物，通过体系和条件优化，建立多重PCR检测方法，并对72株种属背景明确的实验菌株（其中猪链球菌48株、阴性对照株24株）及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链球菌中，cps2检出率为33．3％（16／48）、mrp检出率为29．2％（14／48）、epf检出率为25％（12／48）、epf^＊检出率为6．3％（3／48）、sly检出率为54．2％（26／48），上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符；24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测，特异性和敏感性好，为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。     

猪链球菌基因芯片检测方法的研究

目的建立猪链球菌基因芯片检测方法,实现对猪链球菌种、致病血清型及毒力相关基因的同步检测和鉴定。方法根据GenBank中猪链球菌的相关序列,设计并合成探针,采用点样法制备芯片;检测样本基因组DNA标记后与基因芯片杂交,激光扫描检测信号。结果检测结果显示,针对猪链球菌种、主要致病血清型及主要毒力相关基因设计的寡核苷酸探针可特异地识别对应靶基因,重复性好;而针对不同菌株设计的株特异性探针未获得预期检测效果。结论初步建立猪链球菌基因芯片检测体系,敏感性与特异性高,对于高通量鉴定猪链球菌菌种及其毒力有重要价值。     

猪链球菌Ⅱ型致病机理研究进展

猪链球菌病属国家规定的二类动物疫病,是一种人畜共患传染病.在(Streptococcus suis, SS)的35个血清型中猪链球菌2型(SS2)对养猪业的危害最大,不仅可导致猪败血症、脑膜炎、心内膜炎、关节炎、肺炎、猝死症,还可导致从业人员感染出现中毒性休综合征、脑膜炎及败血症等严重疾患,给养猪业、食品安全和公共卫生都带来了很大危害.国内外对SS2的研究非常重视,猪链球菌的毒力相关因子是研究的重点和热点,本文重在论述猪链球菌的致病机理.     

2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备

目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。     

用噬菌体呈现技术表达抗人红细胞血型B抗原的单链抗体

本研究的目的是构建表达抗人红细胞血型B抗原5D12杂交瘤细胞的单链抗体(ScFv)。应用重组噬菌体抗体技术,分离与构建5D12 McAb单链抗体基因,将其克隆入噬粒pHEN-1中,转化E.coli TGl,M13KO7辅助噬菌体援救构建5D12噬菌体单链抗体库;用完整红细胞亲和富集法淘选阳性重组噬菌体,重组噬菌体鉴定及序列测定分析;免疫杂交试验检测重组噬菌体单链抗体的特异性抗原活性。经M13K07援救E.coli TGl转化菌中的pHEN-1重组噬菌体,得到滴度为3×10~9pfu/ml噬菌体单链抗体库;免疫杂交试验证实表达产物保留了亲本单抗对人红细胞血型B抗原的特异性亲和力。本研究成功地构建5D12 McAb单链噬菌体抗体库,为进一步研制高特异性和高亲和力的基因工程原核血型检定抗体试剂奠定了基础。     

葛根麸煨工艺优化及其药效学研究

目的 优化葛根麸煨工艺,并研究其药效学.方法 以外观性状及总黄酮、葛根素、大豆苷、大豆苷元含量的总评"归一值"(OD值)为评价指标,投药锅温度、麦麸用量、麸煨时间为影响因素,正交试验优化麸煨工艺.考察葛根麸煨前后大鼠心脏质量及血清AST、Mb、cTnI水平变化.结果 最佳条件为投药锅温度120℃,麦麸用量50％,麸煨时...