应用高分辨熔解曲线技术检测经典型苯丙酮尿症患者PAH基因第7外显子基因突变

目的 建立操作简便、快速,使用成本低,结果准确的鉴定PAH基因第7外显子c.728G>A突变热点的基因诊断方法.方法 应用高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术,对山西省临床确诊的88例经典型苯丙酮尿症患儿第7外显子c.728G>A突变热点进行检测,并将检测结果进行测序验证.结果 受检患儿PAH基因第7外显子c.728G>A突变位点HRM技术检测结果和测序结果完全相符.结论 高分辨熔解曲线技术操作简便、快速,使用成本低,结果准确,可作为PAH基因第7外显子热点突变的快速、灵敏检测方法.     

GJB2基因V27I和E114G位点与耳聋相关性的研究

目的通过对127例耳聋患者和127例健康人GJB2基因测序,探讨V27I和E114G位点与耳聋发生及发展的相关性。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增所有标本的GJB2基因区段,测序分析扩增产物。结果 V27I+E114G双杂合和V27I+E114G非双杂合突变,在127例耳聋患者中分别检测到37和14例患者,127名对照组成员中分别检测到18和12名成员,SPSS 13.0统计软件分析,V27I+E114G双杂合、V27I+E114G非双杂合在耳聋组和对照组中均无显著相关性(P>0.05)。此外,3个家系的患者GJB2基因均显示V27I+E114G双杂合,家系其他成员为V27I+E114G非双杂合。结论部分家系研究结果提示V27I+E114G双杂合可能是引发耳聋的一个原因,因此,深入探讨V27I+E114G双杂合在耳聋发生发展中的作用,为明确病因及预防耳聋发生提供理论基础。     

p73基因在急性自血病中的表达及临床意义

目的探讨p73基因在急性白血病（AL）中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测100例初诊及复发或难治AL患者和20例正常对照者p73基因的表达,并采用χ2检验、t检验及单因素方差分析对结果进行统计学分析,以比较各组p73基因表达阳性率及表达强度差异。结果58％的AL患者有较高水平的p73的表达,初诊及复发或难治组明显高于经过治疗缓解组及正常对照组（P〈0．05）。结论p73基因表达在AL的发病机制及不良预后中起了重要的作用。     

应用PCR-RFLP分析法进行苯丙酮尿症的基因诊断

苯丙酮尿症（phenylketonuria,PKU）是一种氨基酸代谢异常的常染色体隐性遗传病。由于苯丙氨酸羟化酶（phenylalaninehydroxylase,PAH）缺陷或活性降低,导致苯丙氨酸不能正常转化为酪氨酸,苯丙氨酸在体内异常蓄积并打破大脑氨基酸的平衡而引起中枢神经系统的损伤。PAH缺陷引起了患儿神经系统损害,尤其是智力发育障碍和语言发育迟缓等更为严重。     

FISH技术在儿童ALLTEL-AML1融合基因检测中的应用价值

目的探讨双色间期荧光原位杂交（I-FISH）技术在儿童急性淋巴细胞白血病t（12;21）形成的TEL-AML1融合基因检测中的应用价值。方法联合双色间期FISH和常规染色体核型分析技术（CCA）对31例儿童初治ALL的骨髓有核细胞进行t（12;21）TEL-AMLI融合基因检测。结果7例患儿经FISH检测发现TEL-AML1融合基因,占总病例的22．6％;而CCA检测均未发现有叮疑的t（12;21）。结论FISH技术较常规染色体核型分析技术特异性强、敏感度高,可以有效检测出TEL-AML1融合基因,从而为儿童ALL的诊断确立、采用个体化治疗方案提供重要的依据。     

17例多发性骨髓瘤患者13号染色体缺失的检测

目的探讨多发性骨髓瘤患者13号染色体的缺失情况。方法应用常规细胞遗传学和采用D13S319位点特异性探针荧光原位杂交技术对17例MM患者的骨髓标本进行13号染色体缺失的检测。结果常规细胞遗传学检测17例MM患者中3例核型分析失败,6例为正常核型,8例具有染色体异常,仅有2例为含有13号染色体缺失。应用LSID13S319探针发现5例患者有13q14缺失,其中2例与CC检测结果一致;另外3例中CC分析失败1例。结论13q14.3位点的缺失在MM中较为常见,FISH是一种在分析MM患者del（13q14）异常方面较为快速、准确和敏感的方法。     

bcr／abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.     

苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶exon6基因、exon7基因突变的研究

目的 探讨山西省苯丙酮尿症(PKU)患儿的苯丙氨酸羟化酶(PAH)exon6 基因、exon7 基因的突变特征.方法 通过测序及序列比对的方法对56 例PKU 患儿和112 例健康儿童的336 个PAH exon6 基因、exon7 基因进行序列分析,以确定其突变位点、性质和频率.结果 通过序列分析,发现在PKU 患儿和健康儿童中均高频率的出现Q232Q(CAA→CAG)、V245V(GTG→GTA)两种同义突变,其中cDNA 696 位点的频率高达96.2%,cDNA 735 位点的频率高达76.1%.健康儿童的其他序列与Genbank 完全相同.而PKU 患儿的基因序列中还发现了9 种共计37 个突变基因,占全部PAH 突变基因的33.04%.exon 6 仅发现一种突变基因Y204C,突变频率达9.8%;exon 7 中R243Q 的突变率最高,占10.7%,其次为Ivs7 +2 T ＞A,占5.4%,其余的G247V、R252Q、L255S、R261Q、T278I 和E280K 分别占0.9%、0.9%、0.9%、0.9%、2.7%和0.9%.9 种突变都在之前文献中有过报道,其中有7 种错义突变和2 种剪接位点突变.结论 明确了PAH exon6 基因、exon7 基因的突变种类和分布等特征,表明exon6 基因、exon7 基因中Y204C 和R243Q属于山西人群中PAH 基因突变的热点.