多重实时荧光PCR快速检测沙门菌和单增李斯特菌

目的 建立可同时检测沙门菌、单增李斯特菌的双重实时荧光PCR快速检测方法,并应用于食品样品的检测.方法 根据GenBank上下载的沙门菌invA基因、单增李斯特菌hlyA基因的保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立并优化双重实时荧光PCR反应体系.对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行评估,并应用于食品标本...     

两种补充试验在艾滋病诊断中的应用分析

目的探讨两种补充试验在艾滋病诊断中的应用价值。方法对98例艾滋病诊断疑难病例进行3周随访检测蛋白印迹试验(WB)和1周病毒载量(VL)检测,比较两种检测方法对疑难病例的诊断效果。结果 98例艾滋病诊断疑难病例中,3周WB阳转数为26例(26.5%),而1周内VL5 000拷贝/mL判阳数为50例(50.1%),且26例的VL结果均5 000拷贝/mL,其中6种带型的VL阳转率均比WB阳转率高,VL能更早地做出诊断。另外1例四代初筛阳性三代初筛阴性,WB无特性条带的病例在1周内检测VL,结果即可判断阳性。结论病毒载量检测能对艾滋病疑难样本做出快速有效的诊断,也能对非特异性反应做出准确的鉴别。研究建议筛查阳性标本先进行WB检测,遇疑难样本立即采集血浆检测病毒载量,两种补充实验互相补充,即可达到快速有效诊断又可减轻实验成本。     

内镜下HSE联合无水酒精注射治疗Dieulafoy病

Dieulafoy病变又称胃黏膜下恒径动脉破裂出血，临床并非罕见，常表现为反复上消化道大出血，休克，病灶小且部位特殊，临床诊断困难，近年来随着内镜诊断水平的不断提高，发病率有明显上升趋势，内镜下注射止血是治疗Dieulafoy病变的主要方法之一，我们以HSE联合无水酒精注射治疗，取得较好疗效，现报告如下。     

纤体降脂Ⅰ号不同提取物对去卵巢大鼠的影响

目的 研究纤体降脂Ⅰ号不同提取物对去卵巢大鼠的影响。方法 270 g左右的SD大鼠100只,♀,按体质量随机选出正常组和假手术组各10只,其余采用双侧去卵巢法,建立去卵巢大鼠模型,灌胃给药干预,连续13周。测定大鼠食量、体质量、腹脂含量、Lee’s 指数、血脂、甲状旁腺激素含量。结果 各提取物均能抑制模型鼠体质量增长(P<0.05或P<0.01);石油醚提取A部分能明显抑制食量增长(P<0.01),降低腹脂含量和Lee’s 指数(P<0.05或P<0.01),显著降低血清LDL-C、TC水平(P<0.01),有抑制子宫萎缩的趋向。结论 纤体降脂Ⅰ号各提取物均能抑制模型鼠体质量的增长。石油醚提取A部分能够有效抑制模型鼠体质量和食欲的增加,改善脂代谢紊乱,有抑制子宫萎缩的趋向,可能是纤体降脂Ⅰ号的主要药效物质群。     

浙江省湖州市诺如病毒GⅡ.17型变异株的全基因组序列分析

目的分析浙江省湖州市检出的诺如病毒GⅡ.17型变异株的基因序列和系统发育与进化关系,为国内诺如病毒的遗传进化研究提供序列参考。方法根据GⅡ.17型诺如病毒保守序列,自行设计3对引物,扩增覆盖整个基因组的3个重叠片段,对来自急性胃肠炎病例的一株诺如病毒GⅡ.17型毒株进行全基因序列测定和系统发育和进化分析。结果在2015年3月湖州市急性胃肠炎病例标本中分离鉴定出一株诺如病毒株GⅡ.17［P17］变异株（毒株编号:NS15217）,获得该病毒基因组全长7556 bp,编码3个开放阅读框（ORF）,ORF1长5109 bp（5～5113 nt）;ORF2长1623 bp（5094～6716 nt）;ORF3长780 bp（6716～7495 nt）。 湖州NS15217毒株在ORF1和ORF2中均属于GⅡ.17型基因型,且与LC037415.1/Hu/GⅡ.17/Kawasaki308和湖州MG692610毒株最接近。 在VP1结构域中有106个插入/缺失/替换的残基,13个（12.3%）在S区,30个（28.3%）位于P1区;大多数替换和插入是位于P2域,有63个氨基酸（59.4%）。结论湖州地区2015年分离的诺如病毒GⅡ.17型变异株进化分支属于3b簇。 其全基因组序列将有助于诺如病毒的遗传进化研究以及快速诊断试剂的研制。     

miRNA-30a通过介导Th17细胞分化影响免疫性血小板减少性紫癜发病的初步探讨

目的:探讨miRNA-30a是否通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;通过对miRNA-30a预测靶基因SOCS3的验证,进一步探讨miRNA-30a参与ITP发病的可能机制。方法:建立慢性ITP小鼠模型,检测其脾脏单个核细胞中miRNA-30a、RoRγt的表达并分析两者相关性;构建含靶基因mRNA 3′UTR的荧光素酶表达载体及含有miRNA的绿色荧光载体,通过Luciferase荧光检测、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blot验证SOCS3是否为miRNA-30a的靶基因。结果:实验组小鼠血小板计数在注射抗小鼠血小板血清(APS)48 h后下降至正常的20%,且至少可维持14 d。实验组小鼠脾脏单个核细胞中miRNA-30a及RoRγt表达较对照组升高(P<0.05),且两者存在正性相关(r=0.54)。pMDH-GFP-miRNA-30a与pMIR-report-UTR实验组的荧光素酶的活性明显低于pMDH-GFP空质粒与pMIR-report-UTR的对照组(P<0.05)。转染miRNA-30a质粒的EL4细胞中SOCS3在mRNA及蛋白水平与对照组均无差异。结论:miRNA-30a在ITP小鼠脾脏单个核细胞中表达升高,且与RORγt表达呈正相关性,它可能通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;SOCS3能与miRNA-30a靶位点结合,却不是其功能靶基因。     

HIV/AIDS病人CD_4^＋、CD_8^＋T淋巴细胞检测结果与标本存放时间的相关性研究

目的研究血样处理前后的存放时间,对艾滋病病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）病人（简称HIV/AIDS病人）CD_4^＋、CD_8^＋T淋巴细胞（简称CD4、CD8细胞）检测的影响。方法选取2013年新确证的HIV/AIDS病人119例,其抗凝全血室温放置6、24、48、72小时用FACSCalibur流式细胞仪分别检测CD4、CD8细胞绝对数,在样品处理后4℃放置0、24、48、72小时再上机检测CD4、CD8细胞绝对数;结果用EPI INFO软件进行统计学分析。结果抗凝全血存放24、48、72小时,与存放6小时相比,CD4、CD8细胞绝对数变化均无差异（P〉0.05）;血样处理后存放24、48、72小时,其CD4细胞数与存放0小时相比变化无差异（P〉0.05）,而血样处理后存放48小时,其CD8细胞数变化差异有统计学意义（P〈0.05）。结论抗凝全血在室温放置72小时,检测CD4、CD8细胞结果是可靠的,所以血样采集后放置时间可延长至72小时,处理过的血样在4℃放置72小时,虽然CD4细胞结果是可靠的,但CD8细胞却发生了明显变化,其二者比例也将随之发生变化,故处理后的样品应在24小时内完成检测。     

心理支持联合功能锻炼在胫腓骨折术后患者中的应用

目的:探讨心理支持联合功能锻炼在胫腓骨折术后患者中的应用效果.方法:将2018年1月1日～2020年1月31日收治的100例行胫腓骨骨折手术患者按住院尾号奇偶分为对照组和观察组各50例;对照组实施常规护理干预,观察组实施心理支持联合功能锻炼干预;比较两组干预前后的心理状态[采用焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SD...     

离子色谱法测定矿泉水中的溴和碘

以往测定水中碘和溴的方法有化学法、分光光度法等.随着分析仪器的发展,近年又出现了发射光谱法.化学法和分光光谱法分析步骤繁琐,实验条件不易控制,影响结果的准确度和精密度,而发射光谱法价格昂贵,不易普及.离子色谱技术近年来已虽日趋完善,对阴离子的分析改变了经典化学法测定阴离于的现状.本文对离子色谱测定矿泉水中碘和溴方法进行了实验,结果表明各种分析指标均能满足分析的要求.     

食品中副溶血弧菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

实时荧光PCR(Real-time PCR)是近几年兴起的分子生物学检测技术。其检测灵敏性高,特异性好且操作简便,出结果快。在众多现代检测技术中脱颖而出,成为检测领域中越来越重要的一种快速检测手段。我们针对副溶血弧菌的属特异性基因gyrB基因设计引物和探针。优化该菌的Real-timePCR反应条件,建立了食品中副溶血弧菌实时荧光PCR检测方法。材料与方法1仪器设备与试剂7300型荧光定量PCR仪(美国ABI公司),No:11175674型高速冷冻离心机、220/224型台式高速离心机为Thermo公司产品。Real-timePCR反应试剂盒为大连宝生物工程有限公司生产的TaKaRa Ex Taq产品,细菌培养用显色培养基均为法国科玛嘉(郑州博赛生物技术研究所),增菌培养基为杭州天和微生物试剂有限公司生产。2引物与TaqMan探针设计合成从GenBank中获取各种不同来源地副溶血弧菌的gyrB基因序列,应用Primer Express软件分析基因序列,根据文献提供的TaqMan引物和探针设计原则,在这些序列的保守区域筛选一对引物,并在该引物的扩增区域内设计1条荧光探针[4],见表1。探针5′,端标记的荧光报告...