中国旱獭α干扰素家族基因的克隆及序列分析

目的 克隆中国旱獭α干扰素（IFN-α）家族基因，以期利用克隆的中国旱獭家族IFN-α在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的干扰素治疗方案和策略。方法 利用分子克隆技术对中国旱獭IFN-α家族基因进行克隆，并对所克隆的系列基因进行测序、分型、系统发生树分析、同源性比较及理化特性分析。结果从112个中国旱獭IFN-α基因克隆中获得18个独立的不重复序列，其中的14个序列来自4次以上相对独立的PCR产物，将它们分为14个基因亚型，其中8个是功能基因亚型，6个是假基因亚型。中国旱獭IFN-α各基因亚型之间在核苷酸水平和氨基酸水平有很高的同源性，平均分别为93％和85％，前体蛋白N端含23个氨基酸的疏水性信号肽。结论 中国旱獭巧IFN-α家族至少有14个基因亚型，这些基因的克隆可能应用于中国旱獭HBV动物感染模型，进行干扰素基因治疗和研究干扰素治疗策略。     

聚合酶链反应检测复发性口腔溃疡患者石蜡切片中的幽门螺杆菌

目的：建立检测石蜡切片中幽门螺杆菌的PCR方法，明确复发性口腔溃疡患者口腔中是否存在幽门螺杆菌。方法：利用幽门螺杆菌保守的16SrRNA基因设计一对引物，通过PCR方法检测复发性口腔溃疡患者病理石蜡切片中的幽门螺杆菌，其中实验组复发性口腔溃疡者病理标本50例，对照组口腔外科手术标本20例。结果：PCR方法具有较好的特异性和敏感性，复发性口腔溃疡患者病理标本幽门螺杆菌DNA阳性率为42％（21／50），对照组标本阳性率为5％（1／20）。结论：PCR方法能敏感检测口腔石蜡病理切片中的幽门螺杆菌。复发性口腔溃疡患者口腔中存在幽门螺杆菌。     

合成肽检测巨细胞病毒酶联免疫方法的建立及应用

目的：应用合成肽建立检测人巨细胞病毒（HCMV）特异敏感的酶联免疫方法，并用于临床检测患者血清中HCMV－IgM。方法：根据人巨细胞病毒PP150氨基酸序列，利用计算机辅助设计。决定含HCMV PP150国强抗原决定簇的单链多肽序列，合成肽作抗原，建立检测抗HCMV－IgM的酶联免疫吸附试验（ELISA）法，并用聚合酶链反应（PCR）方法检测全血中HCMV DNA，比较ELISA与PCR两种方法的相关性。结果：本实验所建立的检测抗HCMV－IgM的ELISA方法具有较好的特异性，正常孕妇血清中抗HCMV－IgM阳性率与HCMV DNA存在相关性。结论：本研究所建立的以合成多肽作抗原检测巨细胞病毒酶联免疫方法具有较好的特异性，简单，快速，适用与临床标本的检测。     

新的抗病毒核苷类似物替比夫定体外对乙型肝炎病毒复制子的抑制作用

目的：观察新的抗乙型肝炎病毒（HBV）核苷类似物——替比夫定体外对乙型肝炎病毒复制子的抑制作用。方法：将乙型肝炎病毒复制子pHBV1．3质粒转染Huh7细胞，在转染细胞培养液中加入不同浓度的替比夫定，然后在不同时间段观察替比夫定的抗病毒作用。ELISA检测培养上清中HBsAg、HBeAg的表达，荧光定量PCR（FQ-PCR）定量检测培养上清中HBVDNA拷贝数，Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果：替比夫定减少了培养上清中HBSAg、HBeAg的表达及HBVDNA拷贝数，抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替比夫定对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论：替比夫定在体外对HBV复制有较强的抑制作用。     

中国人尿路斑块蛋白Ib组织特异性及其启动子的克隆与鉴定

目的:研究中国人尿路斑块蛋白Ib的组织特异性并克隆与鉴定其启动子。方法:RT-PCR检测32例膀胱癌、16例正常膀胱粘膜、15例正常小肠粘膜、16例正常食道粘膜、19例正常肾实质、20例正常肝实质、8例正常皮肤及8例正常心肌标本中尿路斑块蛋白Ib的表达。以人正常膀胱粘膜为材料提取基因组DNA,克隆尿路斑块蛋白Ib启动子片段,并凝胶电泳和测序鉴定。结果:所有正常膀胱粘膜标本、16例分化Ⅰ级膀胱癌中有15例(93.8%)、9例分化Ⅱ级膀胱癌中有7例(77.8%)、7例分化Ⅲ级膀胱癌中有4例(57.1%)检测到尿路斑块蛋白Ib表达,而正常食道粘膜、小肠粘膜、肾实质、肝实质、皮肤、心肌标本均未检测到尿路斑块蛋白Ib表达。中国人尿路斑块蛋白Ib234bp的启动子被克隆并完成鉴定。结论:中国人尿路斑块蛋白Ib具有高度尿路移行上皮特异性,加上其启动子短小,尿路斑块蛋白Ib启动子非常适合膀胱癌的靶向基因治疗研究。我们成功克隆出中国人尿路斑块蛋白Ib启动子片段,为后续研究奠定了基础。     

首席教师负责制在八年制医学生感染病学教学改革中的探索和实践

目的：探讨首席教师负责制在八年制医学生感染病学教学改革中的探索和实践效果。方法：在2008-2011级临床医学八年制学生的感染病学临床教学及早期见习中实施。结果：试验组的学习兴趣和各方面学习综合能力均有所提高。结论：首席教师负责制可增强学生的学习积极性,提高学生对医学知识的掌握程度,在今后的教学过程中值得推广。     

携Smac基因人尿路斑块蛋白Ⅰb启动子调控的真核表达载体的构建

目的构建携带Smac基因、人尿路斑块蛋白Ⅰb(UroplakinⅠb,UpⅠb)启动子(promoter)调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体。方法切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1-Smac内部的人巨细胞病毒和T7启动子序列,替换为在膀胱移行上皮特异表达的UpⅠb的启动子。构建的质粒经双酶切凝胶电泳及测序鉴定。结果成功构建携带Smac基因人UpⅠb启动子调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体pcDNA3-UpⅠb promoter-Smac质粒。结论新构建的载体为膀胱癌的靶向基因治疗奠定了基础。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞INF-α和IL-8表达的检测及临床意义

目的检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞α干扰素（IFN—α）的诱导表达及白细胞介素8（IL-8）表达,评价慢性乙肝患者外周血单个核细胞（PBMC）细胞免疫功能。方法PolyIC体外刺激正常对照组和慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus,HBV）感染组病人PBMC,取培养上清液利用病毒保护试验测定IFN—α2b治疗前后病人PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时在IFN—α2b治疗前后,RT-PCR检测慢性乙肝患者不同干扰素应答组病人PBMCIL-8表达的变化。结果治疗前应答组病人（n=13）和无应答组病人（n=27）PBMC分泌的干扰素生物学活性显著低于正常对照组（n=20）（P〈0．01;P〈0．01）。应答组病人PBMC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月时已显著高于无应答组病人（P〈0．01）;无应答组病人PBMC分泌的干扰素活性始终处于低下水平。治疗前,应答组病人和无应答组病人PBMCIL-8mRNA水平都显著高于正常对照组（均为P〈0．01）;治疗后,应答组病人IL-8水平随治疗时间延长而降低,1个月时已显著低于无应答组病人（P〈0．01）,无应答组病人IL8水平始终处于较高水平。结论慢性HBV感染病人的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α但应答组病人经干扰素治疗后IFN—α表达能力逐渐恢复。慢性乙肝患者PBMCIL-8表达与肝脏炎症活动有关。慢性乙肝患者PBMCIFN—α活性检测结果也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。