造血干细胞移植配型中HLA分型方法的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)是造成异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和器官移植失败的关键因素之一，而移植前选择供受体HLA合适的配型则是减弱和减轻移植排斥反应的重要措施。随着无关供受体移植数量的逐年增加以及HLA新等位基因的不断发现(已发现1900多个等位基因)．势必要求建立一种快速、特异、高分辨、低成本、大规模及智能化的新型HLA分型技术平台，因此，HLA分型技术为适应这一现状而取得了飞速发展。我们对近年出现的几种HLA分型策略作一概述。     

兔VX2肺癌模型的建立及鉴定

目的利用CT引导下构建兔VX2肺肿瘤模型。方法家兔50只，cT引导下将载有VX2肺肿瘤组织悬液的亲水凝胶接种于家兔右肺内。自接种后7d起，每3天进行1次CT扫描观察肿瘤生长和胸腔内转移的情况，并对模型成功的家兔进行病理检查确认。结果接种的50只家兔中，1例麻醉后穿刺死亡（2％），3例发生气胸（6％），6例发生多发结节生长并出现胸腔积液（12％），剩余41只（82％）符合肺癌模型的标准。成功兔肺癌模型的肿瘤长到约1cm的时间为（11±2．2）d。结论利用CT引导下构建兔VX2肺肿瘤模型，方法简便。为进一步应用，奠定了良好的基础。     

HLA-A*110104新等位基因的克隆与序列分析

目的识别并确认中国人群HLA新等位基因。方法采用基因克隆、测序及生物信息学技术,分析HLA新等位基因与HLA已知基因序列的差异。建立HLA新等位基因序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型方法,并对1200名HLA-A*11阳性的造血干细胞移植无关供者(包含100名HLA-A*11纯合子个体)进行HLA新等位基因筛选和频率分析。结果HLA新基因与A*110101的差异只是在外显子3区域中279位碱基发生C→T突变,导致93位密码子由CAC变为CAT,但氨基酸未发生变化,并最终被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*110104。该新基因出现在2个无关家系中,分别具有2～3代遗传史。在1200名无关供者中未发现其他带有新基因的个体。其基因频率为0．000 83。结论HLA-A*110104新基因具有稳定的遗传性和一定的普遍性,对无关供者的选择和人类学、遗传学等的研究具有一定意义。     

我国汉族人群HLAⅠ类经典基因单倍型及连锁分析

本研究旨在探讨我国汉族人群HLAI类经典基因座位HIA—A、HLA—B、HIA—Cw位点的基因频率，单倍型频率及连锁特征。采用序列特异性引物（SSP）PCR低分辨基因分型技术对1014例随机选择的无关个体的经典HIAⅠ类位点进行基因分型，并对其相关遗传学参数进行统计学分析。结果发现汉族人群中较为常见的HIA—Ⅰ类基因是A＊02（0．33）、A＊11（0．24）、B＊15（0．14）、B＊13（0．13）、Cw＊03（0．25）、Cw＊07（0．18）；较为常见的单倍型是A＊02-B＊46（0．071）、A＊11—B＊15（0．051）、A＊02-Cw＊01（0．084）、A＊11—Cw＊03（0．079）、B＊46-Cw＊01（0．095）和B＊13-Cw＊03（0．071）等，其中A＊02-B＊46、A＊30-B＊13、A＊30-Cw＊06、A＊02-Cw＊01、B＊46-Cw＊01和B＊58-Cw＊03等单倍型呈现出显著的连锁不平衡；而A＊02-B＊15、A＊02-B＊40、A＊24-Cw＊03、A＊02-Cw＊03、A＊31—Cw＊03等连锁不平衡性相对较低，其中A＊24-Cw＊03在重组事件中较常出现。此外，A＊02-B＊46-Cw＊01（0．075）、A＊30-B＊13-Cw＊06（0．046）、A＊11—B＊13-Cw＊03（0．045）、A＊33-B＊58-Cw＊03（0．044）、A＊11—B＊15-Cw＊08（0．027）、A＊02-B＊38-Cw＊07（0．023）、A＊11—B＊40-Cw＊07（0．022）等为常见扩展单倍型。结论：本研究较系统地分析了我国汉族人群的HIA遗传学分布特点，为群体进化、临床移植及疾病相关研究等提供了有价值的遗传学资料。     

脑死亡供体吸入一氧化碳对肺移植后细胞凋亡的影响

目的观察脑死亡(brain death,BD)肺移植供体吸入一氧化碳(carbon monoxide,CO)对移植肺细胞凋亡的影响。方法将24只大鼠随机分为3组,对照组(sham组)供体鼠颅内置入Fogarty导管,但不膨胀前端球囊;脑死亡组(BD组)和脑死亡CO治疗组(BDCO组)供体鼠颅内置入Fogarty导管,并膨胀前端球囊建立BD模型。sham组和BD组吸入氧气浓度为40%的氧氮混合气150 min,BDCO组在开始BD诱导后30 min,确认BD后,吸入氧气浓度为40%的氧氮混合气和250 ppm的CO2 h。然后进行肺移植,移植后2 h取移植肺组织切片进行TUNEL染色观察移植肺中细胞凋亡情况,使用RT-PCR和免疫组化技术观察Caspase-3 mRNA和蛋白表达情况。使用免疫组化评分(immunohistoche micas scores,IHS)对细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达进行评估。结果BD组细胞凋亡程度,Caspase-3蛋白和mRNA表达显著高于sham组(P0.05),BDCO组与BD组相比,上述指标显著降低(P0.05)。结论供体BD过程增加了移植肺细胞凋亡比率,BD供体吸入CO对移植肺再灌注后细胞凋亡有拮抗效应。     

HIF-1α在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）中HIF-1α的表达及与其淋巴结转移、脑转移的关系。方法应用免疫组化法检测71例非小细胞肺癌组织标本中HIF-1α的表达,并分析其临床意义。结果 HIF-1α高表达与非小细胞肺癌的淋巴结转移及脑转移有关（P〈0.05）。结论检测HIF-1α蛋白的表达,有可能为判断非小细胞肺癌淋巴结转移、脑转移的发生、发展提供依据。     

“消渴丸”循证医学研究报告引起关注

本刊讯第15届中华医学会糖尿病学分会年会于11月23～26日在北京隆重召开。由中华医学会糖尿病学分会主任委员纪立农教授所作的《863计划——消渴丸循证医学研究报告》引起了与会者的关注。     

支撑喉镜下CO_2激光治疗声门下息肉的麻醉管理

目的 探讨非气管插管高频喷射通气(High-Frequency Jet Ventilation,HFJV)全凭静脉麻醉方法应用于声门下息肉激光切除的可行性.方法 42例ASAⅠ级～Ⅱ级声门下息肉手术患者,采用瑞芬太尼复合丙泊酚全凭静脉麻醉.在置人支撑喉镜前气管插管,机械控制通气,置入支撑喉镜即刻拔除气管插管,应用内径2.5 mm,外径3.0 mm 的金属导管于声门下5 cm处HFJV.术中持续监测并记录诱导前、气管插管机械控制通气后5 min、置入支撑喉镜即刻、HFJV后1 min、HFJV后5 rain、HFJV后10 min、HFJV后15min的心率(HR)、平均动脉压(MAP)、心电图(ECG)和脉搏氧饱和度(SpO_2);在置入支撑喉镜拔除气管插管即刻和HFJV后15 min采集足背动脉血进行血气分析.记录术毕患者苏醒情况、麻醉时间和手术时间.结果 麻醉时间(30.1±3.8)min,手术时间(7.9±2.6)min,术中各时间点HR、MAP与支撑喉镜置入即刻相比差异有统计学意义(P<0.01),但与诱导前相比差异无统计学意义(P>0.05);术中所有患者保持SpO_2≥99%;HFJV后15 minPaCO_2较拔除气管插管即刻升高,差异有统计学意义(P<0.01),但均低于70 mm Hg.结论 非气管插管HFJV全凭静脉麻醉可安全用于声门下息肉激光切除.     

小鼠微量甲醛炎性痛模型的建立及其脊髓背角c-fos的表达

目的 建立稳定的小鼠微量甲醛炎性痛模型,观察其脊髓背角c-fos的表达规律.方法 ①16只小鼠随机分成对照组(C组)和炎性痛组(F组),每组8只.F组小鼠左后肢足背注射5%的甲醛溶液3μL,对照组注入等量的甲醛溶液溶酶蒸馏水,分别于注射前,注射后1h、4h、12h、1d、2d、3d、5d和7d测定小鼠的热板舔足潜伏期...