M115与ACP215制备冰冻解冻去甘油红细胞的比较研究

红细胞冰冻是保存稀有血型红细胞的一项技术,也用于自体红细胞储存及保持血型平衡[1～4].冷冻保护剂多为甘油,可长期保存[5],输注前要解冻并去甘油,洗涤方法有手工和机器两种.本研究采用M115型、ACP215型细胞洗涤机来制备冰冻解冻去甘油红细胞,并对产品各种质控指标进行分析.     

右旋糖苷代替人血白蛋白深低温保存外周血干细胞初探

目的　观察改良的外周血干细胞深低温保存方法的效果。方法　用右旋糖苷代替人血清白蛋白 ,与二甲基亚砜组成联合冷冻保护剂 ,复苏后加入 10 %体积的ACD A抗凝剂。通过测定冻存前后总有核细胞数、CD 34+ 细胞数、CFU GM、细胞活性率等评估该方法。结果　所冻存的 8例 19次外周血干细胞 ,复苏后活细胞回收率达 90 .8% ,有核细胞回收率达 89.1% ,CD34+ 细胞回收率达 85 .7% ,输注后全部获得造血重建。结论　右旋糖苷能有效深低温保存外周血干细胞。     

人类白细胞抗原-DRB1第3外显子单链测序方法的建立及其多态性分析

目的 建立人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1第3外显子单链测序方法,并分析其多态性.方法 采用组特异性引物扩增HLA-DRB1第2和3外显子序列,扩增产物经双酶切后进行双向测序分析,采用Assign 3.5 SBT分析软件指定等位基因型.结果 PCR产物经直接测序后得到清晰的序列冬,并向IMGT/HLA数据库提交了HLA-DRB1*08:09和DRB1*12:02:01第3外显子全部序列.在检测的25个等位基因中,HLA-DRB1第3外显子全长序列中存在27个单核苷酸多态性位点,占第3外显子序列碱基总数的9.56%.建立的方法可有效区分HLA-DRB1*14∶01∶01/14∶54歧义标本,证实中国人群中存在HLA-DRB1*14∶01∶01.结论 本实验建立的HLA-DRB1第3外显子测序方法是可行的,HLA-DRB1第3外显子存在多态性.     

S-谷胱甘肽诱导巨核细胞株meg-01凋亡

目的:探讨一氧化氮供体S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)对巨核细胞株meg-01诱导凋亡的可能作用.方法:将meg-01细胞株分为三组,对照组不加S-谷胱甘肽培养2 h,实验组分别加50 μmol/L、100 μmol/L、150μmol/L、200μmol/L的S-谷胱甘肽培养2...     

HLA-B无效等位基因B*5408N的核苷酸序列分析

本研究探讨HLA新的等位基因HLA-B＊5408N的分子基础。采用商用抽提试剂盒抽提样本DNA,利用单链特异性引物PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第2-4外显子,对PCR扩增产物直接进行第2、3、4外显子双向测序分析。结果表明：先证者样本测序得到两个等位基因,其中一个等位基因为HLA-B＊1527,另一个经blast验证其为新的等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank（DQ295998,DQ295999,DQ296000）。与最接近的HLA-B＊5401等位基因序列相比,新的等位基因仅在第3外显子上有1个核苷酸不同,即第553位G→T,这导致第161位氨基酸Glu（GAG）→终止密码（TAG）,蛋白质的翻译提前终止。血清学方法未能检出HLA-B54抗原。结论：该等位基因为HLA-B无效表达等位基因,已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B＊5408N。     

Jk(a-b-)表型分子机理的初步研究

目的　研究Jk(a-b - )表型的分子机理。方法　在标准血清学鉴定的基础上 ,对Jk(a -b - )表型进行第 4～ 11外显子及部分内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接进行测序分析。结果　Jk(a -b - )表型在第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A ;第 3内含子 3’端第 78位A→G ;第 8内含子 5’端第 84位C→T ;外显子第 5 88位A→G(第 7外显子内 ) ;第 838位G→A(第 9外显子内 )。其中第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A导致转录后外显子 6的缺失。结论　第 5内含子 3’端拼接接受位点的碱基G突变为A可能是Jk(a -b - )表型的分子遗传机理之一。     

2例类孟买表型的分子机理研究

本研究探讨2例类孟买血型表型的分子机理。先证者样本通过血清学方法鉴定为类孟买血型,采用PCR扩增先证者的FUT1和FUT2基因编码区序列,并对PCR产物进行直接测序分析。同时FUT1基因PCR产物经TOPOTA转染克隆到质粒上分离后,对其进行测序分析,以证实突变在染色体上的位置。结果表明：直接测序发现2例先证者FUT1基因第547-552位AG两碱基缺失杂合（CAGAGAG→CAGAG）和第658位C→T杂合。克隆后证实一条染色体上FUT1基因第547-552位中的两碱基AG缺失,可导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码;另一条染色体上FUT1基因第658位C→T错义突变,导致第220位精氨酸（Arg）→半胱氨酸（Cys）。2例先证者FUT2基因均为357C→T同义突变。结论：2例先证者FUT1基因突变为不同染色体的复合性突变,均为h1h3。     

基因扫描技术在ABO血型基因型鉴定中的应用

目的 建立基因扫描（GeneScan）技术鉴定ABO血型基因型的方法。方法根据O1基因在261位G缺失而非O1基因无缺失，B基因第803位核苷酸与A基因不同的特点，设计4对引物，分别在上游引物5’端标记荧光基团，PCR-SSP扩增后，用基因扫描技术鉴定ABO血型基因型。结果129例样本用Genescan技术鉴定的ABO血型结果与血清学结果完全符合，A、B、O基因频率分别为0．198、0．159、0．643。其中AA基因型8例（6．2％），AO基因型29例（22．5％），AB基因型6例（4．7％），BB基因型6例（4．7％），BO基因型23例（17．8％），OO基因型57例（44．2％）。结论Genescan技术鉴定ABO血型基因型具有可行性，提供了一种可选择的方法。     

从采供血机构现场室间质评刍议中心化检测

浙江省卫生行政部门和省血液质量管理委员会于2002年末随机对省内八家采供血机构进行血液安全状况的检查．检查内容包括对这八家采供血机构进行现场室间质量评价(EQA)。结果提示开展中心化检测的必要性，现报告如下。     

浙江汉族人群KIR3DL2等位基因的多态性分析

目的探讨浙江汉族人群KIR3DL2等位基因的多态性分布情况。方法KIR3DL2等位基因分型采用聚合酶链反应寡核苷酸探针杂交方法，利用引物特异性扩增KIR3DL2基因的两个片段，合成21条探针检测KIR3DL2基因的多态性位点，根据探针的格局判断出样本的KIR3DL2等位基因情况。结果样本中共发现17种探针格局，检测到7种等位基因，其中KIR3DL2＊002等位基因占57％。1例样本无法用现有等位基因探针格局进行分析。结论聚合酶链反应寡核苷酸探针杂交方法可有效检测KIR3DL2等位基因，浙江汉族人群KIR3DL2等位基因的分布有其特点。