高脂血对临床生化测定影响及处理方法的临床研究

目的分析高脂血对临床生化测定的影响,探讨利用聚乙二醇-4000(PEG-4000)法消除高脂血对常见8项临床生化指标测定的影响。方法分别对不同浓度的高脂血标本(11例);用PEG处理前后的正常澄清标本(各30例)、中度脂血标本(各30例)、重度脂血标本(各30例)进行常见8项临床生化指标测定;将测定结果进行统计学分析。结果当脂血样本410nm吸光度值大于0.8时,ALT、AST无法检测;PEG浓度为6.67g/dL时,对常见8项临床生化指标测定无影响;中度脂血标本、重度脂血标本经PEG处理后可消除脂血对测定指标结果的影响。结论高脂血影响临床生化测定的准确性,利用6.67g/dL的PEG处理高脂血标本可以消除高脂血对常见8项临床生化检测指标测定结果的影响。     

CYJ—Ⅱ型细胞培养试剂盒检测外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换率和染色体核型分析

染色体是遗传物质的载体,是细胞遗传学的核心研究对象之一.长期以来,细胞培养用培养基都是靠各实验室自已配制的,但基层医疗单位特别是边远地区由于条件无法开展细胞培养和染色体检查     

基因芯片分型与实时荧光PCR筛查成都地区妇女宫颈HPV-DNA感染结果比较

目的了解成都地区HPV亚型的感染情况;评价基因分型（genotyping）与实时荧光定量PCR（real-time PCR）两种人乳头瘤病毒（HPV）检测方法的差异性,为临床应用提供参考。方法对2012年1月-2013年6月间来院就诊的女性,其中3537名进行基因芯片检测,991名进行实时荧光PCR检测。所得数据用SPSS 17.0进行统计分析。结果基因芯片分型法检测出阳性1315例,阳性率37.18%;实时荧光PCR检测出阳性137例,阳性率13.82%,两种方法检出率差异明显。基因分型法显示,HPV6、11、16、58、43型位居前五;荧光定量PCR显示HPV6、11、16、52、58在前五位。结论成都地区低危感染以HPV 6、11型为主,高危以16型为主,次之52、58型;基因芯片分型与临床HPV-DNA筛查检出率高,优于荧光定量PCR法。     

L1、E6和E7基因序列分析

目的了解中国西南地区HPV16亚型基因的一级结构特点,为由HPV16亚型感染引起的疾病特别是宫颈癌的临床诊断、治疗提供理论依据。方法选取经分型明确为HPV16型感染的官颈癌组织32例,用PCR方法获得其E6、E7及L1基因的全长序列并进行测序分析。结果与德国标准株相比,32个标本中总共发现131（G—A）（Gly-Arg）、178（T—G）（Asp—Glu）、350（G-T）（Val—Leu）、647（A—G）（Asn-Asp）、846（T—C）（同义突变）、IA基因第966（C—T）（同义突变）、L1基因第1302（C-T）（同义突变）和L1基因第1434（A—G）（同义突变）等20个突变位。结论与标准序列比较,中国西南地区HPV16亚型L1、E6和E7基因存在一定范围变异,提示在预防治疗西南地区妇女宫颈癌病人以及研制该地区HPV疫苗时,需要注意这些位点的变异,特别是一些引起氨基酸变异的位点。     

老年患者白假丝酵母菌基因分型与药敏试验分析

目的了解老年慢性阻塞性肺炎（COPD）患者白假丝酵母菌基因分型及药敏结果差异。方法对320株白假丝酵母菌进行25SrDNA基因分型,用ATB Fungus3进行药敏实验。结果320株白假丝酵母菌分成了A、B、C3型。A型对5-氟胞嘧啶耐药率高于B型和C型;C型对两性霉素全都敏感,敏感率高于A型和B型;C型对氟康唑、伊曲康唑的耐药率高于A型和B型;B型对伏立康唑耐药率高于A型和C型。结论白假丝酵母菌PCR分型法有较强的特异性,且快速简便;白假丝酵母菌基因型别对不同药物的敏感率有影响。     

T-SPOT．TB、痰涂片和TB—DNA检测在肺结核诊断中的比较研究

目的评价T—SPOT．TB、痰涂片和TBDNA3种方法对肺结核病人的临床应用价值。方法应用T—SPOT．TB、痰涂片和TBDNA3种检测方法分别对确诊组130例肺结核（TB）患者及60例非结核疾病患者进行检测。结果T—SPOT．TB、痰涂片和TB-DNA在肺结核检测中的敏感性分别为92．31％、26．15％、71．54％,在对照组中其特异性分别为93．33％、100％、97．87％。T—SPOT．TB在“涂阴”肺结核中的阳性率为94．79％,在TH-DNA检测阴性的肺结核中检出率为94．59％。结论3种方法中,痰涂片敏感性最低,T—SPOT．TB最高,极大地减少了结核的漏检率,可以成为结核病早期诊断的一项有效的辅助检查手段。     

含前S表位重组HBsAg联合重组HBcAg的免疫原性研究

 目的  研究含前S表位重组HBsAg（SS1S2）与重组HBcAg（C）联合免疫BALB/c小鼠的体液和细胞免疫应答。 方法   用纯化的SS1S2与C分别配制含或不含Al(OH)3佐剂（Al）的疫苗。采用简单随机法将雌性BALB/c小鼠分为5组：阴性对照（NC）、SS1S2、SS1S2+C、SS1S2+Al、SS1S2+C+Al,各组分别于0和21 d进行腹腔免疫,对照组注射磷酸盐缓冲液。初免及加强后1周各取一半小鼠采血,采用ELISA法测定抗-HBs、抗-前S1、抗-前S2和抗-HBc滴度;常规制备脾淋巴细胞,用酶联免疫斑点法测定分泌IFN-γ的T细胞频数。采用t检验对各组结果进行比较。 结果   联合HBcAg的疫苗组均产生了较高水平的抗-HBs、抗-前S1、抗-前S2和抗-HBc。初免后1周,SS1S2+C组的抗-HBs阳转比例（1/5）高于SS1S2组（0/5）、SS1S2+Al+C组（4/5）高于SS1S2+Al组（3/5）;SS1S2+C组的抗-前S1阳转比例（3/5）高于SS1S2组（0/5）;HBcAg对抗-前S2的产生无影响。加强免疫后,各疫苗组的抗体滴度均升高,联合HBcAg的疫苗组各抗体滴度明显高于SS1S2疫苗组。各组疫苗免疫后均可诱导细胞免疫应答,初免后SS1S2+C和SS1S2+Al+C组分泌IFN-γ的T细胞频数显著超过SS1S2和S1S2+Al组（t值分别为2.926、2.974,P值均<0.05）;加强免疫后,各组均有加强效应,SS1S2+C组的T细胞频数明显超过SS1S2组（t=4.604,P=0.010）。 结论   SS1S2联合HBcAg可在BALB/c小鼠中诱导较强的免疫应答,HBcAg可增强SS1S2诱导的体液及细胞免疫应答。     

应用多色引物原位标记技术在未培养羊水细胞中同时识别18号、X和Y染色体

目的 建立多色引物原位标记(multi-primed in situ labelling)技术在未培养羊水细胞中检测染色体数目异常.方法 用非双膜氧核苷酸阻断的三色引物原位标记技术对未培养羊水细胞中的18、X和Y染色体同时进行标记.结果 成功地在69份未培养羊水细胞间期核中检测到相应的染色体信号,且结果与培养羊水细胞的染色体制备分析及其三色引物原位标记相符合,反应成功率达96%,标记率达85%.结论 该研究方法提高了检测通量,快速、简便、经济可行,值得进一步研究与推广.     

荧光定量PCR检测血浆游离DNA方法的建立

[目的] 建立TaqMan探针定量PCR 术检测血浆游离DNA的方法.[方法] 构建重组质粒pMD-18-TGAPDH、pMD-18-T-sRY作为标准品,并通过软件设计出TaqMan探针,优化定量PCR体j募≯并对其特异性进行分析.[结果] 建立了1个检测GAPDH和4个检测SRY荧光定量PCR方法,得到上述5个荧光PCR的扩增动力曲线和定量标准曲线,模板起始浓度与阈值循环数(CT值)之间有很好的相关关系(r分别为0.97.0.99.0.98、0.97、0.99).[结论] 成功建立了定量检测血浆游离DNA的方法,其灵敏度高、特异性强,有望成为一种检测孕母血浆游离DNA含.量的快速简便方法.