21三体综合征产前基因诊断的研究

[目的]建立一种准确、快速、简便的21三体综合征即唐氏综合征产前诊断技术,探讨应用串联重复序列信息进行21三体定性诊断的可行性。[方法]抽取109例高风险孕妇羊水,提取DNA,PCR扩增特异性STR片段,并对其进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染分析,通过电泳带型特征诊断21三体。同时选择17号染色体D17S953作为质控,排除羊水被母血污染造成对结果的影响。[结果]发现异常5例,其中D21S11异常2例,D21S1270异常3例。[结论]基于短串联重复序列（short tandem repeat,STR）的聚合酶链反应技术是一种简单、快速和可靠的21三体定性基因诊断技术,可应用于21三体的基因诊断和遗传筛查。     

唐氏综合征孕中期二联筛查算法初探

目的 探讨唐氏综合征孕中期二联筛查的算法,以更好地理解筛查结果.方法 对4364例孕中期唐氏综合征二联筛查数据进行曲线拟合建立模拟算法,并与原算法进行一致性分析.结果 经过曲线拟合建立了模拟算法,一致性分析Kappa值为0.988095,P＜0.01.结论 模拟算法与原算法具有高度的一致性,模拟算法可代表原算法.     

血清代用品在羊水细胞培养染色体分析中的应用

细胞培养已从完全使用天然培养基 ,发展到人工培养液添加血清。血清中含有大量促生长物质 ,是细胞培养的重要成分。但是 ,血清中也含有一定的细胞毒性物质和抑制物质 ,对细胞生长有一定负作用 ,影响细胞功能的表达[1 ] 。近年来 ,人们试图研制一种去除血清中有害物质的完全培养基 ,以满足临床科研和实验诊断的需要。法国 IBF公司研制了一种 Ultroser的血清代用品 ,可部分代替小牛血清 ,国内有少数实验室使用过 [2 ,3 ] ,但因价格昂贵 ,不易购得而受到限制。我们研制的血清代用品(serum supplement,SS)用于外周血淋巴细胞培养进行染色体分…     

孕妇血浆游离DNA在唐氏综合征筛查中的应用

目的探讨孕妇血浆游离DNA定量检测在唐氏综合征筛查中的价值。方法采用实时定量荧光PCR检测孕中期孕妇,唐氏综合征高危孕妇的血浆中3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)及男性特有Y性别决定区(sex determ in ingregion Y,S R Y)基因。结果孕中期、唐氏综合征高危孕妇GAPDH拷贝数均值分别为(4.28±1.36)×103copy/m l,(3.08±1.67)×104copy/m l;孕中期、唐氏综合征高危孕妇的SRY拷贝数均值分别为174.02±98.56 copy/m l、1065.01±588.72 copy/m l。孕中期和唐氏高危孕妇血浆游离DNA含量有显著性差异。结论孕妇血浆游离DNA的定量分析在唐氏综合征筛查中有重要的价值。     

血清代用品在绒毛膜细胞培养制备染色体中的应用

本文首次报道自行研制的血清代用品 (SS)替代小牛血清用于绒毛膜细胞培养制备染色体。通过 2 0 0例与常规方法的对比研究 ,结果表明 ,用血清代用品 (SS)替代大部分小牛血清进行绒毛膜细胞培养 ,其培养成功率及可分析的分裂相数与常规法比较均无显著性差异 (P >0 0 5 )。说明该代用品能用于绒毛膜细胞培养进行染色体分析     

重庆地区PCR检测慢性泌尿生殖道炎症患者的淋病以球菌,沙眼…

为明确慢性泌尿生殖道炎症的病原体种类我们对重庆地区８７例男女患者采用ＰＣＲ技术检测。结果５４例男性患者尿道分泌物中淋球菌（ＮＧ）、沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲支原体（ＵＵ）的检出阳性率分别为５９．２％、３３．３％和７．４％。３３例女性患者宫颈分泌物中的ＮＧ、ＣＴ和ＵＵ的检出阳性率为５４．５％、４５．５％和３９．４％。在５４例男性分泌物中同时检出ＮＧ与ＣＴ合并感染的１０例，检出ＮＧ与ＵＵ合并感染的为１例     

人乳头瘤病毒6和11亚型E6、E7基因的克隆及序列分析

[目的]了解四川地区引起尖锐湿疣的HPV-6和11亚型早期基因E6、E7的结构和变异特点.[方法]采用PCR和T-A克隆技术从尖锐湿疣样本中扩增、克隆HPV-6/11 E6、E7基因,最后对其测序并与原型进行序列比对.[结果]成功扩增和克隆了HPV-6/11 E6、E7基因,其序列与原型序列相比,存在多处核苷酸的突变,并且有几处核苷酸的突变引发了氨基酸序列的突变,其中有3处引起氨基酸的突变为所有样本共有:HPV-6 E6:252G→C(谷氨酰胺→组氨酸);HPV-6 E7:685A→(酪氨酸→苯丙氨酸);HPV11 E7:662G→T(丙氨酸→丝氨酸).[结论]四川地区HPV-6和11亚型E6、E7基因均存在一定程度上的变异,大部分的突变为同义突变,E6基因较E7基因更易突变.     

引物原位标记合并荧光原位杂交技术在人类中期染色体分析中的应用

[目的]建立检测人类外周血淋巴细胞中期染色体的引物原位标记合并荧光原位杂交技术,并进行其在产前诊断中的可行性分析.[方法]采用单色引物原位标记合并单色荧光原位杂交技术同时对正常人外周血淋巴细胞18号染色体的着丝粒α-卫星序列和21号染色体长臂的单拷贝序列进行双色标记.[结果]成功地在淋巴细胞培养的中期分裂相上同时获得了18号和21号染色体的标记,其中18号标记为绿色信号,21号标记为橙红色信号,标记率分别达96.2%和93.6%,双标记率达到91.3%.[结论]应用该技术对人类外周血淋巴细胞染色体进行标记结合了引物原位标记和荧光原位杂交技术各自的优点,增加了检测靶点的多样性,为其在产前诊断中的应用奠定了基础.     

原发生精障碍者Y染色体AZF区域微缺失基因诊断

目的对男性不育患者Y染色体AZF区域微缺失进行基因诊断。方法采用多重PCR-凝胶电泳技术对23例原发性无精症患者、28例原发性少精症患者和7例正常生育男性对照进行Y染色体微缺失检测。结果23例原发性无精子症患者中,5例发生了Y染色体微缺失,缺失率为21.7%,在28例少精症患者中,有6例发生缺失,其缺失率为21.4%。其中无精症(AZFa)区sY86缺失1例(2.0%);AZFb区sY127缺失1例(2.0%),sY134缺失1例(2.0%),sY127和sY134同时缺失1例(2.0%);AZFc区sY254缺失1例(2.0%),sY254和sY255同时缺失4例(8.0%)。7例正常生育男性均未检测到Y染色体微缺失。结论男性不育患者Y染色体AZF区域6个STS位点微缺失与男性原发性无精症和少精症密切相关,采用多重PCR技术进行微缺失分析简便、快速、准确,值得推广应用。     

孕妇血浆游离DNA片段长短分布分析

目的探究不同孕周、异常妊娠孕妇血浆DNA片段长短分布及变化情况。方法用两种方法分别检测孕妇血浆中不同来源的DNA片段长度,母源DNA采用琼脂糖电泳分离后用realtimePCR分析不同长度中GAPDH基因分布情况;胎儿DNA采用一系列不同长度PCR产物的real—timePCR分析SRY基因片段长度分布情况。结果与母源性DNA不同,血浆中胎源性游离DNA片段主要集中在300bp以下;与孕中期相比,唐氏高危和孕晚期孕妇血浆母源性DNA片段分布没有明显差异,而血浆胎源性DNA片段比孕中期长。结论孕妇外周血中胎源性DNA片段长度远远小于母源性DNA片段。同时,由于异常妊娠以及孕周的增加使得胎儿DNA不仅在数量上有较大的增加,也使得进入母体的胎儿DNA在片段长短等理化性质上产生了一定改变。