隆突性皮肤纤维肉瘤免疫表型和COL1A1/PDGFB融合基因的临床应用研究

目的：探讨隆突性皮肤纤维肉瘤（dermatofibrosarcoma protuberans,DFSP）诊断中免疫表型和荧光原位杂交（fluores cence in situ hybridization,FISH）检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的应用价值。方法：观察73例DFSP中免疫组织化学标记物vimentin、CD34、CD99、S100、desmin 、SMA 和FISH检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的表达。选取85例非DFSP作为免疫组织化学的对照组,10例非DFSP作为FISH检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的对照组。结果：vimentin、CD34、CD99、S100、desmin 、SMA 在73例DF?SP中阳性率分别是100% 、91.78% 、61.64% 、0、0、6.85% ,在对照组中不同程度表达,其中CD34的表达在鉴别诊断中有意义。COL 1A 1/PDGFB 融合基因在DFSP的阳性率为86.96%（60/ 69）,对照组均阴性。结论：在DFSP的诊断中,COL 1A 1/PDGFB 融合基因是DFSP较为特异性、敏感性的标记,而CD34是DFSP相对理想的标记。     

早期应用前列腺素E1对大鼠烟雾吸入性肺损伤的保护作用

目的：探讨早期应用前列腺素E1（PGE1）对烟雾吸人性损伤大鼠的肺保护作用及机制。方法：54只大鼠随机分为3组：正常组、损伤组和PGE1组,建立大鼠烟雾吸人性损伤模型。PGE1组于烟雾吸入伤后30min即予PGE1雾化吸入治疗,每隔8h雾化治疗1次。观测损伤组和PGE,组大鼠伤后6、24、48h肺脏病理、动脉血气分析、支气管肺泡灌洗液（BALF）总蛋白水平（TP）、肺组织湿于重比（W／D）及一氧化氮（NO）、总一氧化氮合酶（总NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）等指标的变化。结果：PGE1治疗后肺弥漫性充血、出血、水肿、大量中性粒细胞（PMN）浸润等改变范围及程度较损伤组均有所减轻;PaO2水平与氧合指数（PaO2／FiO2）明显提高;支气管肺泡灌洗液TP水平、W／D值较损伤组明显减低;在24、48h,PGE。组的肺组织NO与总NOS水平较损伤组有下降趋势,而iNOS水平在48h则明显低于损伤组。结论：早期雾化吸入PGE。可以改善烟雾吸入导致的大鼠肺水肿、出血等急性肺损伤,其保护作用可能是通过降低肺部毛细血管通透性、抑制iN-OS活化等途径实现的。     

螺旋藻多糖对肝癌细胞增殖及Caspase-3表达的影响

目的：研究螺旋藻多糖（PSP）对肝癌细胞增殖及Caspase-3表达的影响,以探讨其抗肝癌的作用机制。方法：体外培养肝癌细胞BEL7404,用MTT法检测螺旋藻多糖作用于肝癌细胞BEL7404后的细胞增殖情况。采用流式细胞术检测Caspase-3的表达。结果：螺旋藻多糖对肝癌细胞BEL7404增殖有抑制作用;螺旋藻多糖作用于肝癌细胞BEL7404,随着螺旋藻多糖浓度的增加,Caspase-3表达明显增加。结论：螺旋藻多糖能有效地抑制肝癌BEL7404的细胞增殖,抑制肝癌细胞增殖可能与螺旋藻多糖使细胞Caspase-3的活化增强有关。     

血清培养基辅以碱性成纤维细胞生长因子培养扩增小鼠神经干细胞

背景：神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞，是研究神经系统的发生、发育、发展规律及其内在的分子生物学、细胞学调控机制的理想载体，在神经系统疾病及损伤的治疗中具有广阔的应用前景。探讨一套较为简便、有效和实用的神经干细胞体外培养体系是其应用的前提和基础。 目的：观察血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子对小鼠神经干细胞体外培养的影响。设计：单一样本观察。 单位：右江民族医学院组织学与胚胎学教研室。 材料：2个月龄昆明种小白鼠5只，雌雄不拘。方法：实验于2003-06／2005-05在广西医科大学组织学与胚胎学试验室完成。①采用贴壁培养法，从成年小鼠大脑皮层分离并体外培养成年小鼠大脑皮层细胞，制成细胞悬液后将其置人DMEM／T12（1：1）液（包括体积分数为0．15的胎牛血清，碱性成纤维细胞生长因子20帆，青霉素100u／mL和链霉素100u／mL）培养，获得细胞克隆。②应用免疫组织化学技术检测克隆细胞巢蛋白的表达。 主要观察指标：①培养细胞形态学观察。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果。㈣神经干细胞鉴定。 结果：④培养细胞形态学观察：细胞接种后，绝大多数细胞在12h内附壁，细胞变扁平，接种后第3天，细胞开始生长，细胞数量增多，接种后第5天时生长成为数10个细胞到数百个细胞克隆，到第七八天，细胞占据瓶底80％～90％。经传代后仍成黏附生长，细胞形态规则，边界清楚。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果：可见细胞圆形或椭圆形，胞质少呈嗜酸性，细胞核大而圆，单个居中，着色深。③神经干细胞鉴定：免疫荧光检测显示，细胞巢蛋白抗原呈阳性。 结论：分离的小鼠大脑皮层细胞在血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子的培养条件下，具有很强的增殖能力，传代后表达巢蛋白，依然具有神经干细胞的特征。     

基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群

目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并在裸鼠体内连续传代4代,并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4",根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况.联合单细胞培养,取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆,检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性,即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率;取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色,并在共聚焦显微镜下观察其染色情况;根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.结果:裸鼠体内低剂量阿霉素干预,在体内连续成瘤传代过程中,裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%,且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短,以此达到了肝癌干细胞的初步富集;增殖能力:全克隆增殖速度最快,细胞量最大,部分克隆次之,旁克隆增殖速度最慢,并于第10天开始出现细胞皱缩死亡;克隆形成率:BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M,差异有统计学意义(P<0.05);悬浮球形成率:仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球,其余细胞系不形成悬浮球,而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较,无统计学意义(P>0.05);BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况:BEL-7404及BEL-7404-A D M-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在,但部分克隆、旁克隆全染,且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强于BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆.结论:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法所形成的克隆亚群中,全克隆含有更高比例的肝癌干细胞.     

链脲佐菌素诱导急性非糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡模型的建立

目的：以非致糖尿病的小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导 BABL/ C 小鼠胰岛β细胞发生凋亡,建立小鼠急性损伤胰岛细胞凋亡的模型,明确其诱导胰岛β细胞凋亡的发生规律,为胰岛β细胞凋亡相关研究提供在体模型。方法选取 BABL/ C 小鼠,分别予生理盐水（对照组）及60、80、100 mg/ kg 小剂量 STZ 一次性腹腔注射（实验组）,观察时点分别为干预后6、12和24 h,动态观察指标为血糖、胰腺 HE 染色观察病理改变以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口标记技术（ TUNEL）检测胰岛β细胞凋亡。结果在所有测试时点血糖均在6～11 mmol/ L 范围内波动,未达到糖尿病模型范畴,TUNEL 凋亡检测发现：与对照组相比,实验组各时点的胰岛β细胞凋亡率均明显升高（P ＜0.05）;各实验组均在12 h 时点凋亡率达到最高峰,并且80 mg/ kg 组与60 mg/ kg、100 mg/kg 组相比明显升高（P ＜0.05）。结论非致糖尿病的小剂量 STZ 可成功构建急性非糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡模型,凋亡高峰期在注射后12 h 时点。     

人肾上腺皮质癌裸鼠腹腔种植转移模型的建立及意义

目的：建立人肾上腺皮质癌裸鼠腹腔种植转移模型并探讨其生物学特性。方法：将1×10^6/mL体外培养的人肾上腺皮质癌SW-13细胞悬液接种于10只裸鼠腹腔内,分别于接种后第2、3周随机处死3只裸鼠,余下裸鼠于第4周全部处死取材。动态观察裸鼠体内成瘤及组织浸润转移情况,对肿瘤组织和可疑转移脏器进行病理形态学观察及免疫组化检测Ki67的表达。结果：10只裸鼠接种第8天于接种部位成瘤率100%,接种后3、4周裸鼠腹腔内均可见到转移瘤结节,以肠系膜最为显著,转移率均为100%,第4周时可见到2只裸鼠肾转移,1只裸鼠胰腺转移。镜下发现受侵犯的肠系膜淋巴结大部分被破坏,受累的肾、胰腺组织有明显肿瘤细胞浸润。SW-13细胞在体内外均高表达Ki67。结论：成功构建人肾上腺皮质癌裸鼠腹腔种植转移模型,为深入研究肾上腺皮质癌浸润转移机制及防治研究提供较为理想的动物模型。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000～10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。     

热休克蛋白40 mRNA在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的:了解热休克蛋白40(heat shocking protein,Hsp 40)mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达,并分析其与临床病理资料之间的关系.方法:用RT-PCR技术检测40份卵巢上皮性癌组织、20份卵巢良性肿瘤组织、15份正常卵巢组织中Hsp 40 mRNA的表达情况并进行半定量比较,将其表达结果与临床病理资料进行统计学分析.结果:Hsp 40 mRNA在卵巢上皮性癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中均有表达,但在卵巢上皮性癌组织中的相对表达水平明显高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01)及正常卵巢组织(P<0.01),差异有高度统计学意义;卵巢良性肿瘤组织中Hsp 40 mRNA的相对表达水平高于正常卵巢组织,差异有高度统计学意义(P<0.01).Hsp 40 mRNA的表达与组织类型、临床分期、病理分级无相关性.结论:Hsp 40 mRNA的表达可能与卵巢上皮性癌的发生、发展有关.     

牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡

目的观察牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。方法体外皮层神经细胞至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分7组,即对照组、染锰组(低、中、高剂量0.2,0.6,1.0mmol/L)、干预组(染低、中、高浓度锰同时分别给予1.5mmol/L牛磺酸干预)。各组处理24h后终止培养,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。结果1.TUNEL显示染锰后神经细胞呈现典型的凋亡形态学变化,牛磺酸对中浓度锰有一定的拮抗作用;2.FCM结果表明牛磺酸能拮抗锰诱导的神经细胞凋亡。结论牛磺酸对锰所致体外培养的皮层神经细胞的凋亡有保护作用。