鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

根据NDVNL株的F基因序列，自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符，大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后，克隆到融合表达载体pThioHisB中，并转化到大肠杆菌Top10内，利用AMP抗性筛选阳性重组子，并用PCR及双酶切鉴定克隆成功，用IPTG化学诱导表达了F基因。经SDS－PAGE电泳分析，结果在分子量约为35KD处可见到表达的蛋白条带。这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符。说明外源片段插入正确表达成功。用HRP标记的兔抗鸡抗体与该条带进行Western－Blot检测，该条带呈阳性反应。进一步证实表达正确。通过蛋白灰度扫描显示表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20％。     

家鸭流感病毒的流行病学研究 Ⅱ.鸭源A型流感病毒对鹌鹑与鸡的致病性

利用６株鸭源Ａ型流感病毒（ＡＩＶ）的鸡胚传１代、２代或３代尿囊液,采用滴鼻－点眼、腹腔注射、静脉注射或肌注－腹注等途径,分别对鹌鹑、商品来航鸡、ＳＰＦ来航鸡进行人工感染。结果,鹌鹑５０％发病,无死亡;商品鸡１００％发病,死亡６２．５％;ＳＰＦ鸡１００％发病,死亡９２．４％。结果显示,腹腔注射和静脉注射最为有效,滴鼻、点眼的致病效果同样确实。本试验发现雄禽比雌禽易感,发病率高。试验表明,鸭源弱致病性流感病毒对其他禽类存在致病潜力,因而具有一定的流行病学意义及生态学意义。     

检测抗猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体的间接ELISA方法

用PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心从细胞培养物中纯化猫泛白细胞减少症病毒(FPV),以纯化病毒包被酶标反应板,建立了检测猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体(FPV-McAb)的间接ELISA。本法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点,本试验比HI试验敏感64倍,阳性检出率为HI试验的两倍。在两次杂交瘤细胞融合中,共检出12株阳性孔。     

IBDV野毒株主要结构蛋白基因RT─PCR方法的建立

借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶＰ２和ＶＰ３基因，经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定，获得４个ＩＢＤＶ野毒株ＶＰ２和ＶＰ３基因，为ＩＢＤＶ分子生物学研究奠定了基础     

禽呼肠病毒NAU—8902株接种一日龄SPF雏鸡的病理变化及病毒在鸡体内的分布

一日龄SPF雏鸡接种呼肠病毒NAU－8902株后，主要的病理学变化是关节炎、心肌炎、肠炎、肾炎、脾肿大、法氏囊萎缩和肠粘膜上皮细胞坏死脱落等。与其他毒株不同的是，NAU－8902还能引起大部分组织的出血性变化。从人工接种雏鸡的跗关节、肝脏、脾脏、空肠、肾脏、法氏囊等回收到接种的病毒，其中以跗关节和脾脏内含毒量最高。     

伊氏锥虫单克隆抗体制备及性质研究

本研究运用杂交瘤技术成功地分离了B_8、I_2两株分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体(McAb)的细胞系。首先用可溶性伊氏锥虫抗原接种BALB/C小鼠,经过一定的免疫程序后,取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经过两次有限稀释法克隆,用ELISA方法选育出B_8、I_2两株产生抗伊氏锥虫McAb的细胞株。用琼脂扩散法与标准羊抗鼠亚类血清反应证明两种McAbs皆隶属于IgG_1亚类。细胞株在连续传代及冻存复苏后其分泌抗体能力稳定;经多种血清学反应证实,这两株McAb与伊氏锥虫可溶性抗原不起凝集反应,只有ELISA反应阳性。pH稳定试验表明,B_8株McAb比I_2株稳定。     

表达MDV gB基因的重组鸡痘病毒的免疫效果研究

将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV疫苗免疫组比攻毒对照组病毒血症持续时间短 ;上述 3种疫苗免疫后用京 1株MDV(vMDV)攻毒 ,脾脏T淋巴细胞增殖反应处于较高水平 ,而攻毒对照组脾脏T淋巴细胞增殖反应减弱 ,两者差异显著(P <0 0 5 ) ;用HVT +rFPV二价疫苗免疫雏鸡 ,其抵抗vMDV攻击的免疫保护力高于HVT和rFPV单价苗 ,HVT +rFPV、rFPV、HVT免疫保护指数分别为 81 7% ,6 3 4 %和 6 4 1%。以上结果表明 ,表达MDVgB基因的重组鸡痘病毒疫苗在一定程度上能保护鸡体抵抗vMDV的攻击 ,并且HVT和rFPV具有免疫协同作用。