番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究

为明确番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律,采用固定病毒稀释血清法,测定了经弱毒疫苗免疫后的雏番鸭不同时间其血清中和抗体效价。结果显示：疫苗注射1日龄雏番鸭,免疫后28 d部分鸭血清中出现抗体,35 d全部鸭血清中出现抗体;6个月抗体效价达高峰,有效免疫期在18个月以上。表明番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗诱导的中和抗体产生期较晚,但持续期长。     

感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立

为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法。本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法。结果表明：采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液（7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、65 mmol/L DTT、40 mmol/L Tris-base、0.5% IPG buffer）法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100 μg上样,设置IEF参数为：50 V 12 h、200 V 1.5 h、500 V 1 h、1000 V 1 h、8000 V 3 h、8000 V 60000 V h、500 V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点。该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持。     

两株不同疾病型鸭呼肠孤病毒部分生物学特性的比较

通过电镜观察、血清交叉中和试验、病毒的细胞病变特征、病毒基因组特征及S3蛋白基因分析等方法,比较2株不同疾病型鸭源呼肠孤病毒的生物学及基因组特性差异.染毒细胞的超薄切片观察结果表明,2种病毒为球形,直径约70 nm,新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)在胞浆中呈晶格状分布,而番鸭呼肠孤病毒(MDRV)呈零星、散在分布;MDRV和NDRV之间的相关系数R值很小,抗原相关性较低;NDRV的细胞病变类型以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩、坏死为主;经尿囊腔接种,NDRV能致死鸡胚,而MDRV不能致死鸡胚.MDRV及NDRV的S基因片段的迁移率明显不同;两者S3基因处在不同的进化分支.结果初步表明不同疾病型的水禽呼肠孤病毒MDRV和NDRV的生物学特性有较大差异.     

猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体的制备及应用

【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-60和10-48,对其生物学特性进行鉴定,并将其作为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。【结果】8-60和10-48的染色体数平均为98～105对,间接ELISA检测其细胞培养上清液效价分别为1∶16和1∶32,小鼠腹水效价分别为1∶3×212和1∶3×213,抗体的免疫球蛋白亚型均为IgM。间接免疫荧光结果显示,8-60和10-48能与PCV2发生反应;利用这种特性,建立了能诊断PCV2病原的间接免疫荧光诊断方法,实际应用结果表明,其诊断结果与PCR方法诊断结果基本一致,阳性和阴性的符合率分别为93.75%和100%。【结论】以制备的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。     

番鸭肝白点病活疫苗研究简报

“番鸭肝白点病”是 1 997年以来在福建、广东、浙江等省新出现的一种番鸭传染病。该病临床上以软脚为主要症状 ,以肝、脾表面有多量灰白小点 ,肾肿大、出血、表面呈黄色为主要病理变化。该病只发生于番鸭 ,发病日龄为 7～ 45 d,以 1 0～ 2 0 d番鸭为最甚。发病率为 3 0 %～ 90 % ,病死率为 6 0 %～ 90 % ,临床上应用抗生素和磺胺类药物治疗无效 ,给番鸭生产造成严重经济损失。我们于 1 997年开始对本病进行研究 ,现以证实“番鸭肝白点病 "是一种新的番鸭传染病 ,其病原是一种新的 RNA病毒[1] 。在明确病因的基础上 ,我们在国内外首次选育…     

番鸭呼肠孤病毒病活疫苗诱导的免疫应答分析

本研究旨在评价番鸭呼肠孤病毒病活疫苗对番鸭免疫功能的影响,探讨番鸭呼肠孤病毒病活疫苗的免疫机理;1日龄番鸭免疫番鸭呼肠孤病毒病活疫苗,分别于免疫后7～35 d观察番鸭生长发育,检测免疫番鸭血清中和抗体效价,外周血淋巴细胞、胸腺细胞和法氏囊细胞对ConA、LPS的反应,细胞毒T细胞(CTL)的细胞毒性作用.结果显示:免疫番鸭生长发育正常,免疫器官中胸腺明显增大;免疫后35 d血清中和抗体才开始上升;外周血和胸腺淋巴细胞对ConA的增殖反应显著提高(P＜0.05);而外周血和法氏囊淋巴细胞对LPS增殖反应无显著变化(P＜0.05);外周血细胞毒性T细胞杀伤功能增强(P＜0.05).结果提示番鸭呼肠孤病毒病活疫苗免疫后主要刺激提高番鸭细胞免疫功能,提高机体抵抗番鸭呼肠孤病毒的能力.     

小鼠脾淋巴细胞转化试验最佳条件的测定

淋巴细胞转化试验是检测T细胞免疫功能的方法,本文讨论小鼠脾淋巴细胞转化试验的最适条件。1材料与方法1.1试验小鼠8～10周龄健康昆明鼠。1.2试剂和仪器RPMI1640培养基,GIBCOBRL公司产品;ConA,华美产品;Brdu-ELISA试剂盒,Roche公司产品;淋巴细胞分离液,上海试剂二厂产品;318MC型酶标仪,上海三科仪器有限公司;GS-15R型离心机,BECKMAN产品;96孔细胞板,FALCON公司产品。1.3小鼠脾淋巴细胞悬液的制备将小鼠拉颈处死,无菌取出脾脏置于含10%小牛血清的RPMI1640营养液中,用无菌弯头镊子轻轻挤压脾脏,吹打分散成脾细胞悬液,将悬液…     

雏番鸭细小病毒病显微和超微结构研究

应用光镜和电镜技术研究了人工感染雏番鸭细小病毒病死鸭的心、肝、脾、肺、肾、胰、法氏囊和大脑等8种器官的显微结构和发病鸭的心、肝、脾、肺、肾、胰等6种器官的超微结构变化。结果如下：1．显微结构变化主要表现为：各器官的血管扩张、充血，以肺脏尤为严重，并见少量淋巴单核细胞浸润，同时心、肝、肾、胰和大脑均呈现不同程度的变性；而免疫器官脾、法氏囊则主要表现为淋巴细胞数量减少。2．超微结构变化主要表现为：（1）各实质细胞内线粒体肿胀，嵴变少而或崩解，内质网减少，脂滴增多，部分细胞水肿坏死；（2）血管内皮均有不同程度的脂滴增多，水肿以至脱落；（3）吞噬能力加强，表现为细胞内次级溶酶体增多，吞噬细胞数量增加，其胞浆内含大量的吞噬体。     

番鸭花肝病(暂定名)活疫苗的研究

１９９７年底以来，在福建莆田、福州、广东佛山、浙江余姚等地番鸭饲养区，先后发生一种以软脚为主要临床症状；以肝脏、脾脏肿大、表面大量白点为主要病理变化的疫病，俗称“花肝病”。该病发病率８０％～１００％，病死率６０％以上。由于缺乏有效防治措施，致使该病迅速蔓延到全国各番鸭饲养地区，给养鸭业造成严重经济损失。我们于１９９８年从莆田地区病鸭肝组织中分离到一株病毒（Pu株）。Pu株病毒通过禽胚成纤维细胞适应诱变后，选育出符合制造活疫苗用的弱毒株（Pu－１）。并研制成活疫苗。１Pu－１株的特性对１日龄雏番鸭失去致…     

应用间接免疫荧光法诊断鸭短嘴矮小综合征

应用抗鹅细小病毒(GPV)单克隆抗体(Mab E16)为一抗,建立检测鸭短嘴矮小综合征病毒(SBDSGPV)的间接免疫荧光方法 (IFA),并对人工感染SBDS-GPV的发病鸭和临床送检鸭短嘴矮小综合征(SBDS)病鸭的肝脏、脾脏、肾脏和胰腺进行检测。结果显示该方法具有良好的特异性,能识别鹅细小病毒抗原呈现亮绿色特异荧光,而与MPV、MDRV、NDRV、DHV、DPV、PMV等其他鸭病病原均无交叉反应;应用该方法检测SBDS-GPV人工感染发病鸭和SBDS临床病鸭组织,均不同程度出现亮绿色荧光,其中人工感染发病鸭阳性率100%(5/5),临床送检病鸭阳性率91.7%(11/12)。表明建立的IFA具有快速、特异等优点,可用于SBDS的快速诊断。