牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学分析

为研究牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽（JH-0、JH-1、JH-2、JH-3）的生物学功能,本研究利用在线软件分析了抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学特性,发现这5个抗菌肽均带正电荷,等电点均大于8.00,均为疏水蛋白,定位于细胞外,不含有跨膜区、信号肽序列和糖基化位点,P3和JH-2的二级结构为α-螺旋+β-折叠,JH-3为100%的α-螺旋,JH-0和JH-1为无规则卷曲结构,P3、JH-2和JH-3在第13位氨基酸即苏氨酸（Thr,T）有一个糖基化位点。根据分析结果推测抗菌肽P3及其类似肽可作用于细胞壁或细胞膜,从而使菌体死亡。     

Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达以及多克隆抗体的制备

为构建Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白昆虫细胞表达载体,并免疫小鼠制备多克隆抗体,研究根据病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR扩增衣壳蛋白基因全长,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTA,经过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒rBacmid-cap,将鉴定正确的阳性质粒转染至昆虫Sf9细胞获得重组杆状病毒.We...     

鸡鸭鹅A型禽腺病毒的PCR检测和分析

为了解A型禽腺病毒在家禽中的分布情况,从不同地区外表健康家禽中采集泄殖腔拭子,根据鸡胚致死孤儿病毒（Chicken Embryo Lethal Orphan Virus,CELOV）的全基因组序列设计引物,采用PCR方法扩增了禽腺病毒（Fovl Adenoviruses,FAV）病毒基因组右未端ITR片段和ORF 8片段。结果表明：A型禽腺病毒在家禽中分布比较广泛,鸡群、鸭群和鹅群的阳性率分别为23．8％、51．7％和17．2％。ITR片段扩增产物测序结果表明,禽腺病毒分离株与A型禽腺病毒CELOV、FAV-JS株在ITR片段具有很高同源性,而与FAV-9、火鸡腺病毒A型和鸭腺病毒A型的同源性较低。ORF8片段扩增产物测序结果表明,分离株的ORF8的序列与CELOV、FAV-JS株的ORF8片段也具有高度同源性。     

商品蛋鸡血管瘤和髓细胞瘤型J亚群禽白血病的分子诊断及病理学研究

对江苏商品蛋鸡6个鸡场临床表现严重血管瘤鸡群的送检样品进行了病理学分析,结果发现,送检的6只商品蛋鸡均可见体表血管瘤,内脏主要在肝、脾、肌胃和肠系膜表面的大小不等的血管瘤,引起严重的肝破裂、脾脏失血和肌胃失血,6个病例中有4个病例出现血管瘤和髓样细胞瘤并存。追踪检测父母代蛋鸡表明,父母代蛋鸡场的各个日龄鸡群均存在不同程度的丁亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Vivus SubgroupJ,ALV-J感染;而送检商品病鸡均呈现病毒血症而抗体阴性,提示垂直传播的可能;ALV-J特异性RT-PCR结果显示,6个样品均存在ALV-J感染;对扩增克隆的部分序列分析可见,此六株病毒之间同源性为97．9％～99．6％,而与原型毒HPRS103之间的同源性则较低（94．6％～95．2％）,与同为蛋鸡分离毒株AY360088和SD07LK1同源性为94．2％～95．0％。     

以畜禽疱疹病毒为载体的重组基因工程疫苗研究进展

畜禽疱疹病毒常作为表达外源基因的活病毒载体,用于构建重组基因工程疫苗。论文从重组基因工程疫苗的常见构建方法着手,分析比较了利用不同方法构建重组疫苗的优缺点,并阐述了不同类重组病毒活载体疫苗的特征、免疫保护效果等研究现状,为今后新型疫苗的研发和相关疾病的防控提供参考。     

多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用

本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)检测方法,并对REV在鸡胚成纤维细胞(chick embryo fi broblast,CEF)上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物,利用重组质粒作为模板,绘制3种不同基因的标准曲线。检测结果显示,本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法,所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101copies。REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测,发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势。该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。     

禽白血病病毒衣壳蛋白单克隆抗体研制及其双夹心ELISA的建立

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为5D3、4F12、5B10、1C5和3C6,亚类鉴定3C6为IgG2b,其余为IgG1.通过IFA、Western-blot及竞争抑制ELISA,表明该5株单抗与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应,而与其他常见禽源病毒无交叉反应.利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法,经663份临床样本验证,该方法与商品化试剂盒的符合率达到95.17％,证明所研制的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值.     

苏皖地区规模化鸡场禽白血病净化的初步研究

基于苏皖地区禽白血病(AL)流行病学调查结果,本研究参考国际AL净化方案,针对该病在苏皖地区的流行特点,选择代号为DYAH91和DYJS31的两个规模化地方品系鸡群开展了禽白血病净化初步研究。经过一个世代的净化更替,DYAH91鸡群p27抗原阳性率由14.4%下降到8.1%,p27抗体阳性率由3.4%下降到1.0%,A/B亚群抗体阳性率由5.7%下降到2.2%,病毒分离阳性率由3.1%下降到0.45%;DYJS31鸡群,p27抗原阳性率由40.7%下降到2.8%,p27抗体阳性率由18.7%下降到3.3%,A/B亚群抗体阳性率由10.2%下降到1.4%,J亚群抗体由1.7%下降到1.4%,病毒分离阳性率由4.1%下降为0。以上结果表明通过净化程序的实施,鸡群ALV阳性率显著下降,净化方案效果确实。     

家禽糖原合成酶激酶-3β基因荧光定量PCR方法的建立及应用

旨在建立家禽糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)基因荧光定量方法并检测分析马立克病病毒(MDV)感染雏鸡不同脏器组织中GSK-3β基因的表达水平。参考GenBank中提供的GSK-3β参考序列设计全长基因的扩增引物,构建pCAGGS-GSK-3β重组质粒作为阳性标准品,并绘制标准曲线,建立了家禽GSK-3β荧光定量PCR方法。通过家禽GSK-3β基因荧光定量PCR方法检测MDV感染雏鸡不同组织脏器中GSK-3β基因的分布和表达变化。检测表明,病毒感染雏鸡中脑组织表达GSK-3β水平最高(P<0.000 1),最低的是盲肠组织(P<0.000 1);而正常对照组雏鸡中GSK-3β表达水平最高的也是脑组织,较低的是肝脏组织和胰腺组织。本研究为进一步探究GSK-3β的生物学功能提供了理论依据。     

血凝素蛋白145位潜在糖基化位点对H9N2禽流感病毒生物学特性的影响

从某肉鸡场分离的A/Chicken/Jiangxi/106/2012(H9N2)(JX106)毒株,其HA蛋白在145位氨基酸由S突变为N,使得在该处增加了一个潜在的糖基化位点NGT。本研究以JX106为研究对象,通过反向遗传操作获得重组病毒rgJX106-HA145N和rgJX106-HA145S。利用不同方法探究了HA蛋白145位糖基化位点对病毒的毒力、复制、受体亲和力和致病性等方面的影响。研究发现,rg JX106-HA145N和rg JX106-HA145S在A549细胞上的复制、对鸡胚的感染力无明显差异,而HA蛋白145位无糖基化位点的rg JX106-HA145S与α2,6-唾液酸受体的亲和力更强,在小鼠肺脏中复制更快、致病力更强且能产生更高的交叉HI效价,这一结果提示流感病毒血凝素的糖基化对病毒诱导的体液免疫具有重要影响。