犬细小病毒病PCR检测方法的建立及应用

犬细小病毒病感染是由犬细小病毒（cPv）引起犬只死亡的最重要传染病之一,目前诊断该病的方法主要是胶体金快速检测试板法,虽然检测方法较简便快速,但其敏感性较差。通过对NCBI网站GenBank发表的CPV-2基因组序列的分析,选择该病毒VP2基因保守序列设计引物,通过对阳性病料扩增及扩增产物测序,与NCBI发表的相关基因对比,同源性在99．8％-100％,成功建立了特异性、灵敏度高的PCR方法,最低只需2．5PgDNA模板。在对28例可疑CPV病例检测中,本方法检出25例阳性、3例阴性,阳性率为89．28％;胶体金检测板检测出20例阳性、8例阴性,阳性率为71．42％,证实PCR方法比胶体金检测更敏感。     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

1株鸭源巴氏杆菌强毒株的分离鉴定

对江西省某养鸭场送检的病死鸭进行病理剖检、细菌分离,经生化鉴定确定病原为多杀性巴氏杆菌。该分离菌株对头孢氨苄、头孢曲松、头孢唑啉、甲氧嘧啶、复方新诺明和氯霉素高度敏感;对大观霉素、卡那霉素等中度敏感;对头孢噻肟、四环素、林可霉素和诺氟沙星低度敏感;对阿莫西林、青霉素、氨苄西林和头孢吡肟不敏感。将分离菌株人工感染鸡、鸭、兔和小白鼠,感染后24 h内死亡率为100%,死亡动物均分离到与原分离菌株形态特征、培养特性一致的细菌,结果表明该分离菌株为多杀性巴氏杆菌强毒株。     

雏鸭肝炎病毒江西株的分离与初步鉴定

鸭病毒肝炎 (DVH)在世界主要养鸭地区均有爆发 ,我国包括江西省在内的很多省份也时有发生。为了调查研究江西地区雏鸭病毒肝炎发生情况和病原血清型 ,作者将江西农业大学实验室收集的我省部分地区鸭肝炎病料制备生理盐水悬液 ,通过鸡胚接种分离到三株 (FCD、QYPD、ZSD)病毒。经动物试验显示 ,3个病毒分离株的致死率分别达到 :6 9.2 % ,80 .0 % ,73.3%。经过观察临床表现、剖检变化、血清被动保护试验 ,初步确诊所采集的病料均为鸭肝炎病毒。经和鸭胚中和试验证明 ,该病毒的血清型为I型     

非洲猪瘟病毒p72重组蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

为了建立一种快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,试验利用GenBank中ASFV的p72基因(登录号为MK128995.1)序列构建原核重组表达质粒pGEX-6P-1-p72和真核重组表达质粒pCAGGS-myc-p72,通过大肠杆菌原核表达系统获得p72重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠,获得阳性杂交瘤细胞,通过Western-blot和间接免疫荧光鉴定筛选单克隆细胞株,并用单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定各单克隆抗体的亚型。通过对p72兔源多克隆抗体包被浓度及纯化的3株单克隆抗体稀释度进行优化,初步建立检测ASFV的双抗体夹心ELISA方法,并用该方法测试纯化的3株单克隆抗体分别与p72兔源多克隆抗体两两组合后所能检测的p72重组蛋白的灵敏度。结果表明：p72重组蛋白大小为99 ku;以纯化的原核表达的p72重组蛋白作为抗原免疫3只小鼠,抗体效价均大于1∶10 000;经细胞融合、克隆和筛选共获得5株阳性杂交瘤细胞,将其分泌的单克隆抗体分别命名为2C4C8、2C4B8、5C11F11、5C11D12、7D10C9,5株单克隆抗体与真核...     

鸡源 Bursin-ScFv 噬菌体展示文库的构建及初步筛选

本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链.以cDNA第一链为模板,根据来航鸡 IgG 抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增.在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp).通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库.并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库.用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集.经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产.     

乳酸粪肠球菌对锦江黄牛免疫功能及粪便菌群的影响

试验选取18头体质量270 kg左右的锦江黄牛,随机分为对照组和试验组,每组9头牛,试验组日粮中添加200 mg/kg的乳酸粪肠球菌,对照组不添加,研究乳酸粪肠球菌对锦江黄牛免疫功能及粪便菌群的影响。预试10 d,正试60 d。结果表明:正试期第30天,免疫球蛋白G(Ig G)含量试验组比对照组增加11.57%(P0.05);白细胞介素1(IL-1)含量试验组减少26.38%(P0.05);肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量试验组比对照增加1.68%(P0.05);第60天,Ig G含量试验组比对照组增加4.94%(P0.05);IL-1含量试验组比对照组减少6.24%(P0.05);TNF-α含量试验组比对照组增加20.03%(P0.05)。正试期第30天,大肠杆菌试验组比对照组降低38.00%(P0.05);乳酸杆菌试验组比对照组增加1897.6%(P0.05);第60天,大肠杆菌试验组比对照组降低26.96%(P0.05);乳酸杆菌试验组比对照组增加86.20%(P0.01)。结果表明:乳酸粪肠球菌复合菌在一定程度上可以增强锦江黄牛的免疫功能,但效果不显著(P0.05);乳酸粪肠球菌复合菌可以提高动物肠道中优势菌群的数量,改善锦江黄牛肠道内环境。     

副猪嗜血杆菌江西株的分离鉴定及生物学特性研究

为调查江西省副猪嗜血杆菌的感染情况,从而为江西副猪嗜血杆菌病的防冶提供基础.从江西省32个规模化养猪场的80份表现纤维素性炎症的病料中分离得到了20株革兰氏阴性杆菌,经细菌形态、生化反应及PCR鉴定.结果表明分离菌为副猪嗜血杆菌,16S rRNA序列与NCBI上公布的序列同源性在97％左右.生物学特性研究表明,该菌只能...     

鸭致病性大肠杆菌病的诊疗

鸭致病性大肠杆菌病的诊疗邬向东，湛南辉（江西农业大学畜牧兽医学院，南昌３３００４５）１９９３年１０～１１月，南昌市郊区某村养鸭专业户的三棚鸭群发生一种输卵管卵巢炎、腹膜炎、产蛋量下降为特征的疾病，发病率高达９０％，死亡率不高，而因产蛋量下降显著，造成...     

鹅的鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌混合感染

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)可引起家鸭、火鸡和多种禽类的急性或慢性传染病,主要致2～3周龄小鸭的传染性浆膜炎.环境条件差或并发感染可加重死亡,给养鸭业造成极大的损失.一般来说,除鸭外,火鸡、鹅、雉鸡、鹌鹑以及鸡亦可感染发病,但少见.