基于石墨烯电化学免疫传感器检测牛病毒性腹泻病毒

构建一种新型电化学免疫传感器用于检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV),为BVDV提供一种新型快速的检测方法。利用甲壳胺(Chi)修饰石墨烯(G)并负载金纳米粒子(AuNP),得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子(G-Chi-AuNP)纳米复合物用于修饰金电极,然后固定抗BVDV NS3蛋白单克隆抗体,构建BVDV电化学免疫传感器。所构建的电化学免疫传感器对BVDV的检测敏感度为10~(1.2) TCID_(50),特异性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛分支杆菌(MB)、牛冠状病毒(BCV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。研究建立的BVDV电化学免疫传感器具有特异性好和灵敏度高的优点,在BVDV快速检测领域具有良好的应用前景。     

关于开展农机跨区作业工作的几点思考

农村经济的发展和农业劳务市场化、商品化的推进,使农机服务具备了按照市场需求优化资源配置的条件。农机跨区作业已席卷我国大江南北,成为社会关注的热点。它既满足了市场需求,减轻了农民的劳动强度,又节约了农业成本,大大提高了农民的经济效益。1.深刻认识农机跨区作业工作的重大意义(1)大大加快了农业机械化进程。农机跨区作业是实现农机服务走向专业化、社会化、市场化的重大突破,是实现农机增效、农民增收的有效途径,调动了农民投资农机、发展生产的积极性。长期的生产实践,让农民真切地领悟到农业的根本出路在于机械化。同时,一些企业、基层     

利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究

[目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。     

霜冻果园后期管理意见

2002年4月24日晚，烟台市自西向东出现-4～-2℃的低温霜冻。如此低温已远远超出了果树幼果能承受的极端最低温度，导致苹果、梨、……     

烟台市苹果产业发展意见

随着农业结构的不断调整，我市苹果生产有了较快的发展。据统计，到2005年底，全市苹果面积15．7万hm^2，产量266万t；已建成气调库、冷风库523座，库容量158万t；洗果、打蜡、烘干自动生产线28条，果汁加工生产线58条，年加工鲜果能力192万t；苹果罐头、果干、果脯等加工企业54家，年加工鲜果能力16万t。出口苹果30万t左右。苹果总收入53.2亿元，占果品总收入的83％，占农业总收入的16％，农业人口人均1093元，占农民全年总收入的24％，安置从业人员150万人，成为农业和农村经济中的支柱性产业。     

禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达

本研究参照GenBank中编码禽源热休克蛋白HSP70、HSP40和核糖体蛋白RL4等的基因序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR扩增HSP70、HSP40和RPL4基因,经双酶切后克隆到真核表达载体pEF1α-Myc,得到重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40和pEF1α-Myc-RPL4;将构建好的重组质粒,转染HEK293T细胞后,采用间接免疫荧光和Western-blot技术,对目的蛋白进行验证。结果表明,Myc-HSP70、Myc-HSP40和Myc-RPL4融合蛋白在HEK293T细胞内得到了正确表达。本研究为后续禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的功能研究奠定了基础。     

珊瑚藻藻红蛋白α亚基脱辅基蛋白基因克隆与序列分析

藻胆体是红藻的光合作用捕光器官。藻红蛋白位于藻胆体的尖端，在能量传递体系中位于第一环节，是第一级捕光色素，直接吸收和传递光能，对藻体的生理活动有重要影响。藻红蛋白的光吸收区位于蓝绿光区(498-565nm)，可以利用高等植物不能利用的光能。如能通过基因导入而将高等植物的光合作用器加以改造，使其光吸收范围扩大，可大大地促进高等植物的生长发育。     

禽呼肠孤病毒σ3基因在烟草中的表达与鉴定

【目的】研究禽呼肠孤病毒S1基因编码的σ3基因在烟草中的表达及其表达产物的反应原性。【方法】根据Gen Bank中公布的禽呼肠孤毒株S1133的基因序列,设计特异引物扩增σ3基因,构建重组植物表达载体p BI121-σ3,热激法转化农杆菌EHA105感受态细胞,筛选含有重组质粒的p BI121-σ3的阳性工程菌株EHA105。采用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草,卡那霉素筛选获得抗性植株。随后通过σ3基因的特异引物,PCR方法初步筛选获得转σ3基因的烟草植株。进一步对阳性植株通过实时荧光定量PCR方法检测σ3基因在转基因烟草中的拷贝数,以烟草自身单拷贝的内源基因核糖核酸还原酶-RNR2作为内参基因,通过梯度稀释分别构建RNR2及σ3基因的起始模板量和对应CT值的标准曲线,通过检测样品中σ3基因和RNR2基因模板量对数值的比值估算出σ3基因在转基因烟草中的拷贝数。并通过Western-blotting方法对转基因烟草中表达的σ3融合蛋白的反应原性进行分析。【结果】1通过双酶切和测序验证表明σ3基因插入位置、大小和读码框均正确,表明σ3基因已经成功的构建于植物表达载体p BI121的花椰菜花叶病毒(Ca MV)35S启动子的下游,以NOS为终止子,含有卡那霉素抗性标记(NPT II)。其表达的蛋白与下游的绿色荧光蛋白形成融合蛋白,其大小约为61.6 ku;2在转化筛选抗性植株的过程中采用350 mg·L-1的头孢霉素可以很好地抑制农杆菌的污染,100 mg·L-1的硫酸卡那霉素筛选压力能够很好地抑制非转化细胞的生长;3随机选取10株转化烟草进行PCR检测发现8株转化烟草可以扩增到清晰的目的条带约994 bp;4内参基因RNR2的标准曲线为y=-3.5352x+15.143,σ3基因的标准曲线为y=-3.5366x+1.8265,两个标准曲线的相关系数均接近于1。在检测的5株转化烟草中σ3基因的拷贝数均为4,阴性对照没有扩增。5Western-blotting显示σ3融合蛋白在转化烟草中可以正确表达,目的条带大小约为61.6 k D,与预计大小一致;σ3融合蛋白能够与禽呼肠孤病毒的阳性血清发生特异反应,表明该融合蛋白具有良好的反应原性。【结论】成功地构建了植物表达载体p BI121-σ3,筛选获得低拷贝的转σ3基因的烟草,σ3融合蛋白能够在烟草中表达且具有相应的反应原性,为进一步研究σ3基因的功能和利用植物作为生物反应器生产σ3蛋白口服疫苗的研发奠定了基础。     

邦龙TM鱼蛋白有机肥在苹果树上的应用试验

美国邦龙鱼蛋白有机肥是利用现代生化成型技术生产 ,为探讨其在苹果树上的应用效果 ,我们在山东烟台进行了应用试验。试验结果表明 :施用邦龙鱼蛋白有机肥可以促进红富士苹果树树势复壮 ,提高光合强度 ,改善果实品质 ,增加苹果短枝数量 ,建议在生产中推广应用     

关于做好纯农田作业机械注册登记工作的思考

随着国家对农业机械购机补贴力度的持续加大和各项支农惠农政策的出台,广大农民购置农机的积极性越来越高,各种纯农田作业机械进入了农村千家万户.纯农田作业机械的使用,促进了农业生产方式的转变,减轻了农民的劳动强度,促进了粮食增产、农业增效、农民增收.随着这些纯农田作业机械数量的增多,农机监理部门如何做好新时期纯农田作业机械注册登记的管理工作,是目前面临的一项艰巨任务.