亚致死浓度甲维盐胁迫对甜菜夜蛾幼虫解毒酶系活力及其相关基因表达量的影响

为明晰几种重要解毒酶在甜菜夜蛾针对甲维盐抗性形成过程中的可能作用,本文研究分析了甲维盐处理后甜菜夜蛾幼虫体内主要解毒酶活力及其对应基因表达量的变化趋势。结果表明,在甲维盐(剂量为:LC5、LC20、LC50)胁迫72 h后,甜菜夜蛾体内多功能氧化酶(MFO)比活力及Se CYP450表达量均较对照极显著上升(P0.01),且二者均随着处理浓度的增大而先上升后下降。同时,谷胱甘肽S-转移酶(GST)的比活力也呈现出相同的变化趋势。而Se GSTs与Se GSTs1在胁迫后的表达趋势与GST比活力的并不一致,Se GSTs表达量随着处理浓度的上升而极显著升高(P0.01),而Se GSTs1则随着处理浓度的上升而下降。在3个亚致死浓度甲维盐处理下,酯酶(EST)比活力均被显著抑制(P0.05),同样的趋势也反映在Se Car E表达量的显著变化上(P0.05)。此外,MFO、EST的比活力变化趋势与其对应基因Se CYP450、Se Car E表达谱之间存在极显著相关性(P0.01);而GST活力只与Se GSTs表达量具有极显著相关性(P0.01),与Se GSTs1表达量之间则不存在显著相关性。因此,MFO、GST及其相关基因Se CYP450、Se GSTs、Se GSTs1有可能参与到甜菜夜蛾对甲维盐抗药性的演化过程中。     

大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达

利用PCR方法，从肠出血性大肠杆菌O157：H7的基因组DNA中，分别扩增出Stx1B和Stx2B亚基的结构基因片段，然后再通过PCR将这2个片段连接起来，并定向克隆到表达质粒pET28a的Nco1和EcoR 1位点之间，构建了重组表达质粒pMB1。将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中，对重组菌株BL21(pMB1)用IPTG进行诱导表达，并对最佳诱导时间进行了探索。SDS-PAGE电泳检测结果表明。重组菌株表达出了16300的目的蛋白Stx2B-L-Stx1B；经薄层扫描分析表明，表达量约占菌体总蛋白的68．4％，且目的蛋白为包涵体表达，表达量约占细菌沉淀的84．6％。研究还表明，未用IPTG诱导的BL21(pMB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明，在3～7h的诱导时间内，目的蛋白的表达量没有明显变化。     

猪链球菌2型荚膜多糖cps2J基因的克隆与原核表达

利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达.SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80 ku的可溶性目的蛋白MBP-cps2J,约占菌体蛋白总量的13.5%.表达蛋白用Amylose树脂层析柱纯化,将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔制备抗血清,经ELISA和协同凝集试验检测,其与SS2呈特异性阳性反应.     

出血性大肠杆菌感染疫苗的研究进展

介绍了国内外出血性大肠杆菌感染疫苗的研究概况，包括Stx类毒素疫苗、亚单位疫苗、结合疫苗、减毒活菌苗及一些新型疫苗研究的技术发展和最新成果。其中Stx类毒素疫苗肠外注射免疫在兔子和猪中已经显示具有保护效果；利用弱毒霍乱弧菌或沙门氏菌载体表达Stx的减毒活菌苗免疫小鼠能产生中和肠毒素的血清抗体；此外还发展了多种以特异性多糖为基础制备的结合疫苗；近年来通过构建真核细胞质粒pStx2B和pStx2△A发展的DNA疫苗，诱导小鼠产生了抗Stx2体液免疫反应。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7噬菌体的分离纯化

分离纯化了抑制肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E coli,EHEC）0157：H7的噬菌体,并对其进行效价测定。将宿主菌EHEC0157：H7培养制成悬液后与污水样品37℃共培养16h,将培养物离心、过滤除菌后得到该菌的噬菌体原液。噬菌体原液采用双层琼脂平板法进行5次纯化,得到直径相同的噬菌斑。纯化后噬菌体的效价达到12×10^pfu。电镜观察表明,该噬菌体呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,该噬菌体属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。     

EHEC O157:H7 stx基因缺失突变株的构建及其特性

针对肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7的stx基因，通过PCR扩增出缺失了183bp的s灯基因片段，将其克隆到自杀性戢体pCVD442中，然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442：：△stx从大肠杆菌SMIO转到O157：H7中，利用抗性标记和PCR方法筛选出O157：H7 stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实，该突变株不能产生完整的Stx。动物试验表明，与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在EHEC O157感染中所起的作用和研制O157的基因工程减毒活菌苗奠定了基础。     

基于Burgers模型的MDF连续平压质量控制计算方法研究

针对中密度纤维板(MDF)在加工及应用中存在鼓泡分层等问题,提出一种基于粘弹体理论的MDF质量控制工艺。通过研究粘弹体Burgers模型的本构方程和蠕变方程,得到蠕变柔量表达式;依据量纲齐次原则建立板坯拉压刚度—蠕变柔量模型;分别对伺服机构、液压加载系统进行分析,在系统模型计算中引入板坯拉压刚度和液压刚度耦合因子,得到带压力负反馈液压位置伺服控制系统模型,并在该模型基础上对具有粘弹特性的板坯热压控制系统进行仿真。实验结果表明,该模型能有效提高被控对象模型的精度,通过合理设计控制器,有效抑制了板坯粘弹性所带来的不良影响。     

猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析

构建猪链球菌2型（Streptococcus suis serotypc 2）强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增AsrtC5片段,该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列,但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s：：△srtC5,并将其电转化导入ZY458菌株,通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附试验和体内的家兔攻毒试验证明△srtC5突变体比较野毒株,其细胞黏附能力和对家兔的致病性都显著降低。     

EHECO157∶H7stx基因缺失突变株的构建及其特性

针对肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O1 5 7∶H7的 stx基因 ,通过 PCR扩增出缺失了 1 83bp的 stx基因片段 ,将其克隆到自杀性载体 p CVD4 4 2中 ,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒 p CVD4 4 2∷Δstx从大肠杆菌 SM1 0转到 O1 5 7∶ H7中 ,利用抗性标记和 PCR方法筛选出 O1 5 7∶ H7stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实 ,该突变株不能产生完整的 Stx。动物试验表明 ,与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在 EHEC O1 5 7感染中所起的作用和研制 O1 5 7的基因工程减毒活菌苗奠定了基础     

基于量子点免疫层析的布鲁菌抗体诊断卡研制

布鲁菌是一种重要的人兽共患传染病,进行快速、简便、特异性的现场检测产品研发在动物布鲁菌病的预防及养殖场净化程序中具有重要作用。本研究采用免疫层析技术,将标记量子点微球的布鲁菌LPS作为包被抗原喷于样品结合垫和未标记的布鲁菌LPS喷于检测线,制备可用于检测动物布鲁菌抗体的量子点免疫层析检测卡。结果显示,量子点免疫层析检测卡同大肠埃希菌O157:H7、小肠结肠炎耶尔森菌O9等病原菌抗体不发生交叉反应,具有较高敏感性,可进行临床动物布鲁菌病的血清学筛查。