基因序列分析确诊大熊猫的犬瘟热病毒感染

直接从死亡大熊猫肝脏提取细胞总 Ｒ Ｎ Ａ,经反转录后用犬瘟热病毒的 １ 对引物扩增出了约 ３２０ ｂｐ 的片段。此产物经纯化、序列分析表明,其片段 ２ 个引物间长度为 ２８１ ｂｐ,与预计片段大小相同。此毒株在核苷酸和氨基酸水平与北京犬等 ４ 个野毒株、哈尔滨犬野毒株、某疫苗弱毒株、 Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ 弱毒株和海豹瘟热病毒 ２ 型毒 株的 同源 性分 别为 ９２２％ 和 ９８９％ 、９２５％ 和 ９８９％ 、９１５％ 和 ９４６％ 、９２９％ 和 ９８９％ 、９８２％ 和 １００％ 。这样就进一步确定了大熊猫的犬瘟热病毒感染。     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定(英文)

[Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb). [Method] The McAb against CDV, designated as CE3, was purified with protein G and labeled with FITC through agitation method. After purification and identification, the optimal working concentration of FITC-labeled CE3 was determined. Then 61 clinical samples of suspected canine distemper were detected by direct immunofluorescence assay. [Result] The absorption test, blocking test and specificity test showed that the labeled antibody had high specificity and sensitivity, but didn't have cross reaction with canine parvovirus (CPV), canine parainfluenza virus (CPIV), canine adenovirus (CAV) and rabies virus (RV). The optimal working concentration was 1∶80. The positive rate of clinical suspected samples was 48%. [Conclusion] The direct immunofluorescence assay developed in this study was rapid, specific and convenient, and had great significance for the early diagnosis of canine distemper.     

犬瘟热病毒小熊猫株(LP)的动物感染试验

将从死亡小熊猫肝脏病料中分离到ＣＤＶ ＬＰ株第９代ＭＤＣＫ细胞培养毒,按不同剂量各接种７只２～３月龄的健康幼犬,接种犬全部发病。于接种后７天时各捕杀２只犬进行检测,电镜检查、ＣＤＶ ＲＴ－ＰＣＲ、ＣＤＶ的分离及中和试验结果均为阳性,说明接种犬发生了ＣＤＶ感染。结合接种犬出现的临床症状及病理解剖学变化结果进行的分析表明,ＣＤＶ ＬＰ株是一株强毒,并且具有很强的免疫原性。人工感染犬试验结果表明某动物园     

犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用

根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。     

宠物源人兽共患病防控战略研究

近年来,宠物越来越受到人们的关注,同时带来的人兽共患病问题也接踵而至。本文分析了宠物源人兽共患病的病原情况和防控现状,阐明了我国宠物源人兽共患病防控仍然面临巨大挑战,提出了加速提高宠物医疗技术水平、加快宠物药品的研制与注册等建议,对于防控宠物源人兽共患病有一定的借鉴意义。     

马立克氏病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

以马立克氏病毒814株(MDV-814)作为免疫用抗原,建立了2个MDV特异性单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株—4A6、3D7。鉴定结果表明;两株细胞所分泌的McAb均为IgM类免疫球蛋白,具有MDVⅠ型病毒特异性,无中和反应特性和沉淀反应特性。利用两种McAb对国内标准强毒MDV-京1株进行鉴定,肯定其为MDV-Ⅰ型毒株。     

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株（CCVDXMV）纤突蛋白（S）、膜蛋白（M）和核蛋白（N）基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切，回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞，通过RT—PCR法进行转录水平的检测，并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36h后就可检测到目的基因的转录；在转染72h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明，3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答，这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。     

桂林老虎猫瘟热病毒的分离鉴定

我们在作猫细小病毒分子流行病学调查过程中,从桂林送棼的考虑粪便中分离出１株虎细小病毒,并对其进行了系统鉴定,经形态学理化学血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学,证明为一株猫瘟热病毒（猫泛白细胞减少症病毒）的强毒。     

犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究

用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒，经形态学，理化学，生物学和分子病毒学等鉴定，结果这10株病毒均能在F81细胞上生长，产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变；病毒粒子呈立体对称，直径为20～24nm，无囊膜，抗氯仿，耐酸，耐热，能被5-IUDR抑制，可凝集猪、马、猫的红细胞，不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞，HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制，用犬细小病毒（CPV）特异性引物对10株病毒进行PCR扩增，结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp），用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验，结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降，在攻毒后4～14d粪便PCR检查阳性，其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡，其余接种犬没有出现明显的临床症状，但血清抗体均升高（大于5倍），而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化，粪便PCR检测阴性，表明所分离毒株能够感染犬，鉴定结果证明，CPV在我国犬群中仍广泛存在。     

通过病毒分离鉴定和基因检测首次发现虎流感

应用F81猫肾传代细胞，从高热、拒食和间有神经症状的死亡率病科中分离获得1株病毒，经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定，证明为流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物，对分离病毒及该虎病科进行RT－PCR扩增和序列分析，结果从分离病毒和虎病科中均扩增出与理论值大小相符的464bp基因片段；其序列与A、B、C3型流感病毒相比较，同源性分别为84．9％、35．0％、24．8％。由此说明，所分离病毒为A型流感病毒，命名为/蘧／哈尔滨（中国）／01／2002。用此分离病毒静脉接种于3月龄家猫3号，均出现与病虎相似的临床症状，其中1号耐过，2只死亡。死亡猫剖检变化与死虎相似，主要是呈肺炎病变，并可从病科中回收到所接种病毒。从此分离病毒为HA抗原，进行虎与猫血清的HI抗体检测，结果康复虎血清比其病初血清、康复猫血清比其接种前血清HI抗体均增高4倍以上，表明该病毒具有致病性，是引起该虎与试验猫发病甚至死亡的病原。