果子狸细小病毒的分离与鉴定

用F81细胞从河南送检的患有肠炎的果子狸粪便样品中分离出一株病毒，经形态学、理化学、生物学和分子病毒学实验鉴定是一株CPV-2a的突变株。此毒株在F81细胞上生长，能产生CPV感染的特征性细胞病变，细胞肿胀、变圆、破碎、脱落；病毒粒子二十面体立体对称，直径为20～24nm；无囊膜，能抵抗氯仿的处理，耐酸，耐热，但能被5-IUDR抑制。可凝集猪红细胞，不凝集鸡、豚鼠、大鼠、兔、人“O”型红细胞，能被抗CPV抗体所抑制。设计特异性细小病毒引物扩增VP2基因的两个片段，并进行测序，分析结果表明，该毒株是在CPV-2a的基础上其VP2的第297位氨基酸发生A→S突变，第300位氨基酸发生G→S突变，第301位氨基酸发生T→A突变。该毒株暂定名为PV／GZL/H／1／02。该病毒能感染犬。     

小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列的克隆及序列分析

本研究对军事兽医研究所病毒二室分离驯化后的小熊猫源犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)基因组进行全序列测定,并对其基因组特征及H基因遗传稳定性进行比较分析。根据GenBank公布的犬瘟热病毒全长基因组序列设计合成17对特异性引物,以小熊猫源犬瘟热病毒总RNA为模板,RT-PCR进行分段扩增,并克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经测序、拼接获得全长cDNA序列。结果显示,小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列与GenBank登录号分别为AF014953、AY445077、AY542312、AY466011、AY386316、AF164967、EU716337、EU726268、AY443350、AB474397、GU138403和AY649446的12个不同毒株全基因序列的同源性分别为86.6%、92.4%、92.5%、92.5%、94.3%、96.3%、95.9%、87.1%、94.5%、92.3%、87.4%和94.6%,与标准强毒株A75/17株(AF164967)的亲缘关系最近,全基因同源性达96.3%,但与疫苗株Onderstepoort(AF014953)亲缘关系相对较远,同源性为86.6%。小熊猫源犬瘟热病毒H基因与其他不同地区具有代表性的30株CDV进化树分析显示,小熊猫源犬瘟热病毒属于Asia Ⅰ型,H蛋白中309－311位氨基酸残基所形成的潜在糖基化位点,为疫苗株没有而野毒株所共有的,并且可能与病毒的免疫原性有关。因此,致弱的小熊猫源CDV在预防免疫的针对性上可能强于已有的疫苗株。     

犬细小病毒核酸疫苗制备及免疫试验

以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定。对6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空载体质粒及生理盐水,8周接种1次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制抗体效价,第2次免疫后即可检测到较高的血清效价。在第3次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及第14天时采血,测定血清的血凝抑制抗体效价。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击,而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。证明所构建的核酸疫苗(pIRESVP1)能使犬免受犬细小病毒强毒的感染。     

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

应用猫肾传代细胞(FK),采用同步接毒的方法,从8份狮、虎、豹病料中分得6株病毒,经与标准病毒作交叉免疫电镜等系统鉴定,证明与猫泛白细胞减少症病毒的特性基本相符,从而首次证实在我国动物园狮、虎、豹等猫科动物中存在猫泛白细胞减少症。     

警犬冠状病毒性肠炎诊疗报告

1987年1月某警犬繁殖训练地,暴发了一起以出血性肠炎为主要症状的疫病。5窝25头1.5至4月龄小犬,先后有24头发病,发病率为96％。经抢救治疗,结果仍死亡11头。本病经病原检验,确诊为犬冠状病毒性肠炎。 发生与流行情况 该基地共有种犬9头,训练工作犬2头、其他犬6头。1986年秋产仔5窝25头,均为德国牧羊犬和杂交犬,分窝隔离饲养,体质发育良好,并均按免疫程序接种了犬细小病毒弱毒苗和犬瘟热苗。12月24日从旧犬舍搬入新犬舍,由开放式饲     

5株H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析和豚鼠间传播能力的评估

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在哺乳动物间的传播能力,本研究以豚鼠为模型评价了5株H9N2亚型AIV在豚鼠体内的复制能力和水平传播能力,并分析了5株病毒血凝素(HA)蛋白的分子特征。结果表明,5株病毒均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体特征(Lys226),2株病毒具有禽样受体特征(Gln226),而A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)株在该位点的氨基酸残基为苯丙氨酸(Phe226)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征。个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。感染试验表明,5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制。并且在鼻甲骨处复制稳定,平均病毒滴度为2.01 Log EID50/mL～4.5 Log EID50/mL。传播试验表明,所有病毒株的人工接种豚鼠的鼻洗液中均能够检测到病毒,最长排毒期为接毒后第8 d,而接触组豚鼠鼻洗液中未检测到病毒。本研究表明,5株H9N2亚型AIV均属于CK/Beijing谱系,部分病毒株的HA蛋白已具备人样受体结合特征,并且关键氨基酸位点(226位)处出现新的突变。5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制并通过上呼吸道排毒,但不能在豚鼠间同群传播。     

感染性犬2型腺病毒全基因组克隆及鉴定

以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hind 和 Bst B 双酶切 p Poly2 - UD,回收含载体和部分 U、D的大片段并与 CAV- 2 DNA共转化感受态 E.coli Sure TM,经菌体内同源重组 ,获得含有 CAV- 2全基因组序列的重组质粒 p Poly2 - CAV- 2。后者以 Cla 和 Asc 双酶切 ,释放 CAV- 2全基因组 ,通过脂质体介导转染 MDCK细胞 ,盲传 3代后重复转染 1次 ,4d后 ,出现腺病毒典型病变。细胞上清血凝效价为 1∶ 6 40 ,并可被 CAV- 2抗血清有效抑制。以上结果表明 ,本研究获得了具有感染性的CAV- 2全基因组重组质粒 ,为以 CAV- 2作为重组疫苗载体的系列研究奠定了重要基础。     

犬肺巨噬细胞的制备及其对不同毒力犬瘟热病毒的敏感性

犬肺巨噬细胞（ＤＬＭ）是犬瘟热病毒允许性细胞系统．本文报道了制备高纯度、高活性ＤＬＭ的方法．通过本方法制备的巨噬细胞培养物纯度达９９％以上，活细胞数占９１％．１只２～６周龄小犬的肺可制备５×６７～９×１０７细胞．病毒的敏感性试验表明，ＤＬＭ不但能支持犬温热强毒增殖，而且还能支持犬瘟热弱毒的增殖且其感染力无明显差异．因此可以得出结论：犬瘟热病毒对大和水貂的毒力并不总是与该病毒在ＤＬＭ上的感染和复制能力相一致的。     

犬冠状病毒BEI灭活苗的制备与免疫试验

烷化剂类灭活剂是一类含烷基分子去一个氢原子 ( Cn H2 n 1)化合物 ,它能与另一种化合物作用 ,将烷基引入形成烷基取代物 ,根据其结构可分为氮芥类、乙烯亚胺类和磺酸脂类。这类化合物的化学性质活泼 ,其灭活机制主要在于烷化 DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤 ,引起单链断裂、双螺旋键交联 ,妨碍RNA的合成 ,从而抑制细胞分裂。另外 ,也可与微生物的酶系统和核酸蛋白起作用 ,干扰核酸的代谢 ,因此 ,这类灭活剂能破坏病毒的核酸 ,使其完全丧失感染力 ,但并不损害其蛋白质衣壳 ,得以保留其保护性抗原 ,故是制备灭活病毒疫苗较好的灭活剂。据报道…