新城疫病毒弱毒骨架表达强毒F基因的重组病毒生物学特性研究

为了解目前中国新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）优势基因VIId型的毒力机制,应用反向遗传技术将我国优势流行基因VIId型强毒株I4的F基因替换弱毒LX的F基因,获得表达NDV强毒株I4F基因的重组病毒NDV/LX-If。测定重组病毒的致病指数和组织分布,结果发现,重组病毒NDV/LX-If毒力比骨架病毒有了显著的提高。NDV/LX-If的鸡胚平均致死时间（mean death time,MDT）为56 h,雏鸡脑内接种致病指数（intracebral pathogenicity index,ICPI）为1.49,属于中等毒力,毒力比亲本病毒毒力低,但都能使自然途径感染的鸡100%死亡,同时获得了亲本毒株的组织嗜性。可见,新城疫病毒F基因是毒力和组织嗜性的主要决定因素,但是其它基因对新城疫病毒的毒力也可以产生影响。     

肉鸡产业链主要抗药性菌株的分离鉴定与抗药性分析

为分析肉鸡产业链各环节主要抗药性菌株的流行状况,保证食源性公共卫生安全,本试验采集肉鸡养殖、屠宰及加工各环节的样本108份,通过6种不同含药物培养基初步筛选抗药性菌株,经VITEK2自动微生物鉴定和自动药敏检测,并与微量肉汤稀释法药敏试验进行比较。结果表明,从肉鸡产业链各环节共鉴定获得664株细菌,其中前三位的优势细菌为大肠杆菌375株(56.5%)、肺炎克雷伯菌110株(16.6%)和奇异变形杆菌79株(11.9%)。微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌对阿莫西林/克拉维酸、多西环素抗药率都在90%以上,对环丙沙星和丁胺卡那霉素抗药率在34.6%~87.0%之间,对美罗培南敏感。三种抗药菌显示多重抗药性特征,集中在三、四重抗药水平。VITEK2自动药敏试验结果显示,大肠杆菌对氨苄西林、头孢唑啉抗药率分别是98.3%、92.6%;全部对厄他培南、亚胺培南敏感。肺炎克雷伯菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦抗药率分别是97.3%、89.1%;大部分对厄他培南和亚胺培南敏感,肺炎克雷伯菌的抗药性水平普遍稍高于大肠杆菌,二者呈正相关性。微量肉汤稀释法和VITEK2自动药敏试验两种方法重叠使用了环丙沙星和丁胺卡那霉素,检测结果差异不显著。肉鸡产业链各环节大肠杆菌的抗药性显著高于EUCAST数据库的结果,建议相关部门应加强细菌抗药性监测,并逐步降低抗药性,保障食品安全和公共卫生。     

噬菌体降低铜绿假单胞菌所致腐蛋的效果

铜绿假单胞菌是孵化过程中造成腐蛋的主要病原菌,拟尝试用裂解性噬菌体防治。选用腐蛋中筛选的铜绿假单胞菌PA-MH12,以此为宿主从河水中筛选到1株裂解性噬菌体MH12-Q,对其进行了生物学特性研究,体外进行了对铜绿假单胞菌所致腐蛋的防控效果试验。结果显示：噬菌体MH12-Q属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,效价可达到10¹³pfu·mL^-1,完全裂解效价（CLC）为10¹⁰pfu·mL^-1,最适生长温度为37℃,pH稳定性好,最适pH为6~8,且其在pH4~10的效价都能维持在较高的水平。最佳感染复数（OMOI）为0.001,感染宿主的潜伏期为30 min,爆发期为70 min。噬菌体MH12-Q可使高浓度铜绿假单胞菌的感染率从70%降低到40%。铜绿假单胞菌噬菌体MH12-Q的生物学性质适合生产应用,对孵化场腐蛋具有较好的防控作用,能够提高感染铜绿假单胞菌的鸡胚成活率。     

永兴水电站无人值班(少人值守)的自动化改造

以永兴一级电站为实例，提出无人值班(少人值守)水电站的基本条件。根据基本条件，对永兴水电站实施基础自动化改造、机组自动化元件改造和计算机监控系统改造。通过改造，提高了电厂运行经济效益、自动化管理水平及安全运行水平。     

细菌强化修复电子废弃物污染农田土壤研究

通过富集、驯化、分离,从清远市电子废弃物拆解区污染土壤中得到四种耐性菌株,经菌落形态、扫描电镜分析以及16S r DNA技术鉴定得出菌株HS-01、JH-02、YB-03、JY-04分别为海水芽孢八叠球菌(Sporosarcina aquimarina)、佐吕间湖生芽孢八叠球菌(Sporosarcina saromensis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。选取非矿山型东南景天(Sedum alfredii)为实验植物,在温室盆栽实验条件下,强化修复模拟的Cd、Cu、Pb污染土壤。结果显示添加细菌JH-02的东南景天地上部重金属提取量相对最高,JY-04次之,均显著高于其他各组(P<0.05);重金属形态分析显示细菌JH-02与JY-04对土壤重金属的活化作用相对最好,可交换态含量明显高于其他两种细菌组与未加菌组(P<0.05)。实验结果表明,JH-02与JY-04这两种细菌可能通过代谢活动产生的分泌物溶解了土壤中重金属,最终促进了东南景天的提取以及根部重金属向茎叶中转移,可达到强化修复的效果,具有一定的应用前景。     

硫氧化菌生物淋滤修复重金属污染研究进展

重金属污染严重威胁着生态环境,如何有效修复重金属污染,已经成为环境工程领域研究热点.传统的修复方法如土壤重金属污染化学淋洗修复法和固化修复法,存在修复效率低及易产生二次污染等缺陷,难以推广.生物淋滤具有修复成本低、环境友好等特点,有较好的规模化推广和应用前景.文章综述了近年来硫氧化菌生物淋滤修复技术的研究进展,分析和总结了硫浓度、硫形态、处理浓度、重金属形态和温度对硫氧化菌生物淋滤修复效率的影响,并且阐述了修复过程中的不足之处,为生物淋滤修复重金属污染的技术发展提供新的方向.     

猪源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定和遗传进化分析

2008年10月~2009年3月采集剖检病死猪喉拭样品41份,从中分离鉴定了2株H9N2亚型猪流感病毒,对其进行部分生物学特性的研究、全基因测序和遗传演化分析,发现血凝素（hemagglutinin,HA）蛋白335~338的裂解位点上,A/Swine/Yangzhou/1/08为RSNR,A/Swine/Taizhou/5/08为RSSR,均为典型低致病性禽流感病毒的特征性序列。2株病毒的HA、神经氨酸酶（neuraminidase,NA）、核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,NP）、非结构蛋白（nonstructural protein,NS）、血清前白蛋白（prealbumin,PA）和多聚酶蛋白（polymerase protein1,PB1）基因均来源于A/Chicken/Shanghai/F/98,基质蛋白（matrix,M）基因与A/Swine/Yangzhou/1/08的PB2基因来源于A/Quai/Hong Kong/G1/97,值得注意的是A/Swine/Taizhou/5/08的PB2基因虽然可能来源于A/Chicken/Shanghai/F/98但与A/environment/Hunan/1-35/2007（H5N1）的高度同源,生物学特性试验也表明A/Swine/Taizhou/5/08比A/Swine/Yangzhou/1/08毒力强。     

基于M基因的新城疫病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对临床样品中新城疫病毒检测的研究

根据新城疫病毒M基因的保守序列,设计合成1对引物和TaqMan探针,以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒zJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法.该方法在106～101拷贝范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中3拷贝·μL-1的病毒核酸,与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性,二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数、阴性数符合率分别为90.0%、99.8%.经临床应用表明:荧光定量PCR的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础.