犬瘟热病毒贵州株融合蛋白基因原核表达质粒的构建

为了研究犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)完整融合蛋白(F),试验采用PCR方法以pMD18-F质粒为模板,利用特异性引物扩增获得大小为1 989 bp的目的 DNA,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-F。结果表明:目的基因插入位置和阅读框均正确,说明F基因原核表达质粒构建成功;质粒pET32a(+)-F在BL21(DE3)中经诱导表达未获目的蛋白,说明CDV融合蛋白可能不适合在该表达系统中进行完整蛋白的表达。     

基于能值分析的区域循环经济研究——以柴达木盆地为例

运用能值分析的理论与方法,从能值流量、能值经济、资源投入产出、环境压力、综合指数五个方面构建了循环经济能值评价指标体系,分析了柴达木盆地1998-2007年循环经济发展概况,结果表明:柴达木盆地的经济发展主要依赖本地的不可更新资源,属于资源输出型区域。经济发展造成的环境压力越来越大,可持续性也较差,但潜力较大。因此只有合理开发和利用当地的不可更新资源,提高资源的循环利用水平,才能更好地促进柴达木盆地循环经济的发展。     

犬瘟热病毒H基因原核表达质粒的构建

为H蛋白进一步表达作为诊断用抗原、建立特异的犬瘟热病毒(CDV)抗体检测方法及CDV的预防奠定基础,以已构建含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-H质粒为模板,利用合成的特异性引物进行PCR扩增,得到1824bp的目的DNA片段,将所得H基因克隆至经相同双酶切处理后的pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32...     

贵州白香猪的白细胞介素2基因的克隆及其序列分析

为获得贵州白香猪白细胞介素2基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪白细胞介素2(IL-2)基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序。结果表明:贵州白香猪IL-2基因ORF长为465bp,可编码154个氨基酸,其中前20个氨基酸为信号肽,后134个氨基酸为成熟肽,具有一个潜在的N-糖基化位点;贵州白香猪除与FJ543109(99.4%)、Neijiang(98.7%)、JN851821(98.7%)、AB194099(98.5%)氨基酸一致性相对较低外,与其他猪源IL-2的一致性均为100%,而与其他种属动物的IL-2基因氨基酸一致性则较低,为11.9%～75%。     

中国日光温室结构优化研究现状及发展趋势

日光温室是中国设施农业的重要组成部分。日光温室的结构设计不仅影响内部环境因子和生产效益,而且对温室建造、生产成本及其结构稳定性和耐用性有直接影响。综述了地域和气候约束条件下日光温室主要结构优化设计的研究现状,如跨度、脊高、采光屋面角、采光屋面形状、墙体结构和后屋面结构等,为不同地区日光温室建造提供参考信息。同时,探讨了其计算机辅助结构分析研究状况,并分析了今后的发展趋势和待研究的问题。     

脉冲强光对烤鳗的杀菌效果及感官品质的影响

为了在烤鳗加工中应用脉冲强光杀菌技术，试验分析了脉冲强光杀灭烤鳗表面染菌的效果，以及杀菌对烤鳗感官品质影响的情况。结果表明：脉冲强光可以有效的杀灭烤鳗表面染菌，闪照15 s，烤鳗表面大肠杆菌的杀菌率为99.99%；经过25 s的处理，烤鳗的感官品质（颜色、气味、质地、味道）没有显著变化；过氧化值、 酸价变化率都不超过0.35%。脉冲强光对烤鳗贮藏品质影响也较小，经过30 s的闪照，贮藏期间烤鳗感官品质没有显著影响，过氧化值、 酸价变化率不超过0.80%，变化幅度均低于0.50%。杀菌的工艺因素中，闪照时间对烤鳗杀菌效果和过氧化值、酸价变化率的影响最显著。     

番茄溃疡病一步法快速检测技术研究

对番茄细菌性溃疡病菌进行种子带菌的模拟检测试验.对用菌液处理过的种子进行简单抽提和纯化,不经过DNA提取而以抽提和纯化的病原菌为模板直接进行一步法PCR检测,对纯菌液Direct-PCR 最低检出限为2 600个细菌/ml,而Nested-PCR最低检出限可达到13个细菌/ml;对种子提取液,Direct-PCR不能检出,而Nested-PCR最低检出限可达到3×105个细菌/ml.一步法Nested-PCR可在12 h内对番茄种子携带的番茄溃疡病菌进行准确的定性鉴定.并且方法方便快速,成本低,灵敏度高,适用于种子携带番茄溃疡病菌的快速鉴定.     

UASB工艺处理啤酒厂废水的生产性试验研究

本文述了容积为2000m~3的生产性UASB反应器常温条件下处理啤酒废水的启动运行过程。当反应器稳定运行时,容积负荷可达6～8kgCOD/(m~3·d),水力停留时间为6～7小时,COD去除率达85％左右,出水COD小于500mg/L。本试验成功地实现了UASB反应器内厌氧污泥颗粒化。培养颗粒污泥的关键技术是提供良好的营养条件、维持适当的进水碱度和适时调整水力负荷。     

边缘无浆体MSP5基因序列分析及其融合蛋白的纯化

参照已发表的主要表面蛋白5（MSP5）基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版。采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM—TEasy载体,并进行测序分析,结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5基因的序列同源性达98．6％,编码氨基酸的同源性为99％,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5a宿主茵中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达。表达产物的分子质量为45ku。Western blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。通过裂解、洗涤、变性、复性等方法对包涵体蛋白进行处理,获得的纯化产物浓度为1mg／mL。     

微小牛蜱Bm86基因的克隆与原核表达

根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97%和95.6%.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88 Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39%,表达量约为1.08 mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.