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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。 相似文献
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提取巨型艾美球虫(Eimeria maxima)南通株(NT株)配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析.结果表明,克隆的基因全长为1 791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%.根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达.重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53 000.可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在.以 E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性. 相似文献
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黑龙江是占中国耕地面积最大的省份,是中国最重要的商品粮生产基地和商品粮战略后备基地,近6年来,在惠农政策的鼓励下,粮食生产连续大丰收,总产量由全国第三位升至第二位。但是由于粮食产量多,物流要求高,物流难度大,从而体现出黑龙江粮食物流发展的主要问题:运输手段落后,物流系统不完善,造成运输环节多、成本高,产品流通企业不适应现代物流的需要,产品购销企业设施的配套能力较差,技术落后,不适应现代物流对设备的要求,导致农产品大量积压,农民收入增长缓慢等问题。因此,必须健全物流管理体制、加强统一规划布局、完善物流市场主体、提高物流现代化服务水平、积极培养和引进现代物流人才,从以上方面改革粮食流通体制和创新粮食经营方式,培育黑龙江省粮食比较优势和核心竞争能力。 相似文献
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NAD-malic enzyme(NAD-ME)是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果(Malus ×
domestica Borkh.)叶片为试材,通过同源比对和RT-PCR 技术,克隆获得2 个NAD–苹果酸酶基因
(MdNAD-ME1 和MdNAD-ME2)。其ORF 分别为1 785 bp 和1 818 bp,推测其分别编码595 和605 个氨
基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示,含有5 个保守的氨基酸区域(Ⅰ~Ⅴ),包含2 个功能结构域:
malic 和NAD_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示,MdNAD-ME1 属于α 组双子叶亚组,MdNAD-ME2
属于β 组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示,MdNAD-ME 在被检测的组织中呈组成型表达,且在多种
组织中MdNAD-ME1 表达量高于MdNAD-ME2。在富士苹果果实不同发育阶段,MdNAD-ME1 与MdNAD-ME2
具有不同的表达模式。以上结果表明,克隆得到的MdNAD-ME1 和MdNAD-ME2 属于植物NAD-ME,在
苹果的生长和发育过程中MdNAD-ME1 和MdNAD-ME2 可能起到不同作用。 相似文献
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为探究鸭疫里默氏杆菌对鸡的致病力,试验采集疑似感染鸭疫里默氏杆菌的病死肉种鸡肝脏进行病原的分离培养与纯化、革兰氏染色、生化试验、血清型鉴定、16S rRNA基因测序分析及药敏试验,并将分离菌株在SPF鸡、樱桃谷鸭上进行致病性试验。结果显示:分离到1株血清1型鸭疫里默氏杆菌,该菌株与鸭源、鸡源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的相似性分别为99.24%~99.47%、99.16%~99.31%、99.04%~99.20%;该分离株对恩诺沙星、卡那霉素、头孢噻肟、多黏菌素B和多西环素较为敏感,对SPF鸡致病性较弱,可引起一过性精神沉郁和泡沫粪,对樱桃谷鸭有较强的致病性,可引起死亡和严重的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎。研究表明分离的肉种鸡源RA对鸡致病力相对较弱,结果为临床鸡群感染RA的诊断与防控提供参考。 相似文献
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随着我国社会及经济的不断发展,大学的教育水平发展得更加迅猛。近来现代教育理论已经从传统的学生被动接受转向创造性思维,问题的解决和分析的能力培养上。本文探讨在部分云南农业大学非英语专业一年级学生中用新的多媒体电脑技术——网络探究性学习,培养创造性思维。其目的是创造良好的学习环境,帮助学生构建自己的知识体系,提高学习成绩。根据建构主义理论,教师应设计恰当的学习任务进行以学生为中心的教学。文章论述如何设计和组织网络探究性学习,通过分析研究结果和网络探究性学习问卷调查,显示出它的优势及局限性。最后,得出结论,这种新的教学方法——网络探究性学习在现代教学中有很强的适用性,是一种值得提倡推广的有效的教学手段。 相似文献