马传染性贫血病毒免疫学研究进展

马传染性贫血病病毒(equine infctious anemiavirus EIAV)导致马持续性感染和反复病毒血症,与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)同属反转录病毒科慢病毒属,二者有很多相似的特性[2].EIAV是遗传结构最简单的慢病毒,其感染的潜伏期只有几天至几周,而且在EIAV感染过程中新的抗原变异株的出现与疾病的反复发作相关,这使EIAV有可能作为研究HIV-1分子致病机理及免疫机制的动物模型[3].     

表达H3N2亚型猪流感病毒HA的重组伪狂犬病病毒对仔猪的免疫效力评价

利用猪流感病毒(Swineinfluenza virus,SIV)与伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)血清学阴性的4周龄断奶仔猪,对此前构建的表达SIVA/Swine/Inner Mogolian/547/2001(H3N2)血凝素(HA)基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-HA)进行了免疫效力评价。按每头105.0PFU rPRV-HA肌肉注射断奶仔猪(n=12),同时设Bartha-K61免疫对照组(n=5)和非免疫攻毒对照组(n=5)。免疫后35d用2×105.0TCID50的SIVA/Swine/Heilongjiang/74/2000(H3N2)进行强毒攻击。rPRV-HA免疫组免疫后7d均可检测到高滴度针对SIV的血凝抑制(HI)抗体,而所有对照组小猪仅在攻毒后7d才开始产生针对SIV的HI抗体;rPRV-HA免疫组在病理学保护方面明显优于对照组,支气管和肺泡冲洗液病毒分离结果显示,攻毒后7d rPRV-HA免疫组没有检测到病毒,而两个对照组可检测到病毒。以上试验结果表明,rPRV-HA免疫猪对同亚型SIV的攻击具有很好的保护作用。     

乙型脑炎疫苗研究现状及展望

乙型脑炎简称乙脑 ,是由日本脑炎病毒 (Ｊａｐａｎｅｓｅｅｎ ｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓ ,ＪＥＶ)引起的一种急性传染性人畜共患病。此病首次于 1935年在日本马群中发生大流行 ,1937年日本学者证明其病原与当地人流行性脑炎病毒相同。随后 ,乙脑在我国、南亚、东南亚等地陆续发生。几十年来 ,乙脑流行给我国及周边国家造成了巨大的经济损失。Ｓｉｒａｐｒａｐａｓｉｒｉ等开展了实施乙脑疫苗免疫程序的风险投入和效益分析[1] 。我国未进行过乙脑感染的经济调查分析 ,猪群及其它动物流行病学、经济损失、免疫状况及防制现状均有待调查…     

猪流感的再认识

猪流感是由流感病毒引起猪的急性呼吸道传染病。本文评述了猪流 进化、种间传播、公共卫生意义,认为猪流感在人流感和禽流感之间发挥着关键性作用,堪作研究人流感的动物模型和流感大流行的预警信号,建议重亲高猪流感。     

重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病最小免疫剂量的测定

伪狂犬病(Pseudorab ies PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的,可导致多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑髓炎为主要症状的急性传染病。猪是该病毒的中间宿主和传染源,感染后可引起妊娠母猪发生严重的繁殖障碍造成死胎、流产和木乃伊胎,患病仔猪表现为神经症状和呼吸道病,多以死亡告终。在规模化、集约化、现代化高密度养猪地区,PRV可在猪群间不断传播,是危害我国养猪业的一个重要传染病。用疫苗进行免疫接种是预防、甚至消灭伪狂犬病的根本措施。目前伪狂犬病疫苗在我国应用最多的是Bartha-K 61株,该疫苗是20世纪60年代匈牙利Bartha等人将野毒株用鸡胚成纤维细胞反复传代而获得的一个人工致弱疫苗株,该毒株呈现gE基-因缺失表型,其毒力大大减弱,免疫原性很好,是世界上公认的优良疫苗株。我们以Bartha-K61株为载体构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5),但GP5基因的插入是否会改变伪狂犬病病毒Bartha-K61株对伪狂犬病的免疫保护效力?为此本研究通过测定重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病的最小免疫剂量,评价rPRV-GP5对伪狂犬病的保护效力。24只5~6月龄PRV阴性健康绵羊随机分成6组,每组4只,其中1组为生理盐水对照组,其余5组分别后腿肌注重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)冻干疫苗(病毒含量为5×106.0TCID50/mL)5×104.0TCID50/只、5×103.0TCID50/只、5×102.0TCID50/只、5×101.0TCID50/只和5TCID50/只,免疫后15 d每只绵羊肌注伪狂犬病毒猪源强毒S株1000 LD50。结果表明:对照组和5TCID50/只组的全部绵羊攻毒后4~5 d均出现典型伪狂犬病症状并死亡,5×101.0TCID50/只组4只绵羊中有2只发病并死亡,其余各组全部保护。结论:重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对绵羊最小免疫剂量为100 TCID50/只,GP5基因的插入没有影响伪狂犬弱毒疫苗Bartha-K61株的免疫原性。     

稳定表达T7RNA聚合酶PK-15细胞系的建立

为构建稳定表达T7 RNA聚合酶(RNAP)的猪肾细胞系(PK-15),本研究采用PCR方法,以E.coli BL21(DE3)细菌基因组为模板扩增T7 RNAP基因,将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-T7.采用脂质体将pLXSN-T7转染至PT67细胞中,经G418筛选培养获得重组逆转录病毒rMLV-T7,将其接种于PK-15细胞进行G418加压筛选和纯化;应用PCR、间接免疫荧光试验及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的重组表达质粒(pET-RED)进行瞬时表达,检测T7 RNAP的表达及活性,结果表明筛选所得的细胞系PK/T7的不同代次均具有转录活性.本研究建立稳定表达T7 RNAP的细胞系PK/T7,为实现细胞内T7启动的转录和猪源RNA病毒等的反向遗传操作提供了有效的方法.     

用于检测猪血清中猪生殖—呼吸道综合征病毒抗体的一种…

为了提高检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染猪抗体的血清中和试验（ＳＮ）的敏感性，对不同条件进行了评价和改进，通过在病毒稀释液中添加２０％新鲜猪血清及使用派生于ＭＡ－１０４细胞系的一种受纳细胞克隆（ＭＡＲＣ－１４５），可自始至终获得较高的ＳＮ抗体效价，用于评估ＳＮ试验的待检血清来自两组３周龄，经鼻内感染ＰＲＲＳＶ（ＭＮ－１ｂ株）的猪。用此改良法，在接种后９～１１天首次检出ＳＮ抗体，且于接     

外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略

甲醇酵母Pichia pastoris表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统，在其乙醇氧化酶基因启动子的控制下，某些外源基因的表达量可达克／升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统，但有许多因素影响外源基因在其中的表达，包括外源基因的拷贝数及其整合到酵母染色体的位置和方式、mRNA的5′和3′端非翻译区、转录起始密码子的上下文、外源基因A＋T的组成与转录和翻译的阻断、密码子的偏爱性、信号肽序列的特性、产物的稳定性、宿主菌的生理特性、培养基成份和培养条件等。在应用该表达系统过程中，这些因素均需予以考虑。本文就这些因素作了概述和讨论，有利于提高外源基因在该系统中的表达水平。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养,加入适当的保护剂制成冻干疫苗.取3批冻干疫苗,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种14日龄和50日龄SPF鸡,接种剂量为5 × 106PFU,接种后3天出现局部反应,5天局部肿胀达到最大,接种鸡无其它全身反应,精神、食欲以及发育等均不受影响,说明重组病毒对试验鸡是安全的.取其中的200003批疫苗,用生理盐水作210-2～210-5稀释后,翅内侧无血管处皮下接种40日龄SPF鸡,免疫后4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株,结果表明,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力,在接种剂量为210-2～210-40.1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应,当接种剂量为210-50.2ml/鸡时可以使部分试验鸡(5/15)产生局部反应,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为210-40.1ml(相当于1000PFU).攻毒试验结果进一步证明,当接种剂量为210-40.1ml(相当于1000 PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒102株的攻击,降低鸡群的发病率和病死率.这些结果说明,疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性,疫苗对接种鸡的局部作用反应了疫苗的免疫效力,我们研制的重组疫苗的最小免疫剂量为1000 PFU,这就为我们进一步考察疫苗的免疫效力试验奠定了基础.