兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank公布的兔出血热病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus,RHDV)序列,设计了3条引物,对引物组合进行了筛选,优化PCR体系各反应条件,测定该方法的敏感性与特异性,并进行临床应用对比试验。结果显示,筛选出的引物组合能够特异性扩增331 bp产物,Mg2+浓度1.0~1.5 mmol/L时扩增效果最好,退火温度在50℃~60℃之间扩增无差异性。该方法可以扩增102拷贝以上的模板,对兔轮状病毒与水泡性口炎病毒检测结果均为阴性;临床应用对比实验显示,与HA检测相比,该方法检出阳性率由66.7%提升至77.8%。本研究建立的RT-PCR诊断方法具有特异、灵敏、快速等特点,能够用于该病的临床检测,为防控该病提供了技术保障。     

吉林地区规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的血清学检测

本试验应用ELISA法对吉林地区8个猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)未免疫猪场和9个PRRS免疫猪场的后备母猪、生产母猪和5~10周龄的断奶仔猪3个猪群进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测,结果表明:吉林地区8个PRRS未免疫猪场均受有PRRSV感染,猪场抗体阳性率为100%,猪群抗体阳性率在50%~75%之间,平均阳性率为62.26%;吉林地区9个PRRS免疫猪场猪群PRRSV抗体阳性率在70%~100.00%之间,平均阳性率为87.78%。PRRS未免疫猪场与PRRS免疫猪场猪群抗体平均阳性率相比,差异极显著(P<0.01)。     

PRRSV JL／07／SW毒株GP5基因克隆与原核表达

根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332毒株核苷酸序列,设计了扩增PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因的1对引物,利用RT-PCR方法,从PRRSV JL/07/SW毒株的细胞培养物中成功的扩增出GP5基因,其中GP5基因全长603 bp,与国际PRRSV美洲型VR-2332毒株的GP5基因序列同源率为89.2%;随后,将该基因与原核表达载体pGEX-4T-1连接,转化到宿主菌BL21中进行表达.结果证实PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因成功地进行了原核表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的22.8%.     

利用RNAi技术靶向新城疫病毒P基因抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制

构建了针对新城疫病毒NDV NA-1株P基因的RNAi质粒;转染质粒36 h后接种NDV,通过对病毒滴度测定、实时荧光定量PCR和细胞病变结果分析,表明其能抑制NDV在CEF中的复制和增殖.本试验为进一步研究NDV复制机理和抗病毒治疗提供了技术基础.     

PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW M基因克隆与原核表达

根据PRRSV VR-2332毒株核苷酸序列,设计针对M基因的特异引物,以PRRSV JL/07/SW毒株细胞培养物为模板,利用RT-PCR方法,成功扩增出M基因,将该基因与原核表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达.测序结果表明:M基因全长525 bp,编码175个氨基酸,经同源性比较及进化树分析该毒株属于美洲型.表达产物经SDS-PAGE及Western blot结果证实;PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因成功地进行了原核表达,分子量约为43 000,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的19.8%.     

流感病毒与细胞受体相互作用的复杂性

细胞受体是流感病毒感染、复制与传播的生物学基础.病毒血凝素基因的差异和细胞上不同类型的受体是影响病毒受体结合特性的两个重要因素.了解这两个因素有助于人们进一步认识流感的病原学、感染机制、流行病学等内容,对于流感的监测、疫苗研制和公共卫生学都将有借鉴意义.论文就流感病毒基因特点、细胞受体类型差异及二者相互作用的复杂性进行综述.     

新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性 …

参考国外发表的新城疫病毒（ＮＤＶ）的ＨＮ基因序列设计了１对特异性引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ对ＮＤＶ昌黎株（野毒）的ＨＮ基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序。扩增出的ＨＮ基因核苷酸长度为１ ７４２ｂｐ，编码５７１个氨基酸，序列中有６个糖基化位点，１３个半胱氨酸残基，与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源怀在８８．５％～９２．９％，推导的氨基酸序列同源性在９０．０％～９４．２％之间。     

新城疫病毒（青岛株）F蛋白基因的克隆和序列分析

参考新城疫病毒（NDV）长春株的F基因序列设计了1以特异性引物，应用RT－PCR对NDV青岛株（野毒）的F基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序，扩出的F基因核苷酸长度为792bp，编码261个氨基酸，包括完整的F2片段和部分F1片段，裂解位点区（112－117aa）氨基酸序列为Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe，与国外发表的强毒株序列相符，正明青岛株为强毒株，根据该基因推导的所基酸序列，与国内外发表的NDVF蛋白氨基酸序列相比，同源性为88．1％－94．3％。