猫阴部神经传入传出成分在脊髓内的定位分布—HRP逆行及跨越神经节追踪研究

向猫阴部神经及其分支注入HRP溶液,观察并分析了逆行和跨节追踪的结果。 1.证实阴部神经为含躯体传出、传入,内脏传出、传入纤维的混合神经,其内脏性传出、传入成分仅存在于阴茎背神经中。 2.逆行标记细胞出现于L_7—S_3前角Onuf核和S_(1-3)的中间带外侧核。本文结果表明,Onuf核是支配盆底横纹肌的运动核,但它和其它前角运动核在细胞形态和活性物质的分布上都明显不同。特别是它的一部分神经元的树突形成树突束到达中间带外侧核。本文结合排尿、排便功能从形态学上较详细地讨论了Onuf核和中间带外侧核的关系。 3.本文证明阴部神经领域的内脏初级传入(来自阴茎背神经)和躯体初级传入纤维都向骶髓后连合核区有浓密的投射。结合以往的工作讨论了盆腔脏器、外生殖器的内脏传入和坐骨神经、阴部神经的躯体传入在骶髓后连合核区汇聚的现象及机能意义,推测这种汇聚可能是产生牵涉痛和针刺镇痛机制的形态学基础。     

Construction of cosmid contigs and high-resolution restriction mapping of the Huntington disease region of human chromosome 4

The gene responsible for Huntington disease (HD) has been localizedto a 2.2 million base pair (Mbp) region between the loci D4S10and D4S98 on the short arm of human chromosome 4. As part ofa strategy originally designed to clone the gene based on itschromosomal location, we and others previously identified overlappingyeast artificial chromosome (YAC) clones covering most of thisregion. While these YAC clones were useful for initially obtaininglong-range clone continuity, a number of features of the YACsindicated that smaller clones are generally more useful in thesubsequent steps of the positional cloning strategy. In thispaper, we use these YAC clones to generate sets of overlappingcosmid clones covering most of the HD region. We Isolated alarge number of cosmids by screening a chromosome 4-specificcosmld library with labeled DNA from a minimal overlapping setof YAC clones. These cosmid clones were further analyzed byrestriction mapping and hybridization experiments, leading tothe assembly of 185 cosmids Into eleven contigs covering morethan 1.65 Mbp and to a fine-structure restriction map of theregion. Nine of these contigs cover 90 percent of the 1.7 Mbpsubregion between loci D4S125 and D4S98 where the HD gene isnow known to lie. The detailed restriction map and the cosmidclones should facilitate the identification and localizationof cDNAs and polymorphic markers, and they provide reagentsfor large scale DNA sequencing of this region of the human genome.Our results suggest that this strategy should be generally usefulfor converting YAC clones into cosmid contigs and generatinghigh-resolution restriction maps of genomioc regions of interest.     

Simultaneous measurements of temperature and pH in vivo using NMR in conjunction with TmDOTP5-

NMR techniques for temperature and pH measurements have attracted increasing interest in recent years, motivated in part by the growing importance of medical hyperthermia for the treatment of cancer. The chemical shifts of thulium 1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7, 10-tetrakis(methylene phosphonate) (TmDOTP5-) have been studied as a function of temperature and pH. The results demonstrate that TmDOTP5- resonance shifts are highly sensitive to temperature (approximately 1.0 ppm/degrees C) and pH (approximately 3.2 ppm/pH unit) at clinically relevant field strengths. A new method is presented which utilizes two magnetically non-equivalent protons in TmDOTP5- for simultaneous NMR measurements of both temperature and pH. The difference in the chemical shift values of pairs of 1H resonances provides a temperature sensitivity of about 1.6 ppm/ degrees C. The technique is demonstrated in live rats undergoing ultrasound-induced hyperthermia therapy.     

血小板衍生生长因子致大鼠血管的收缩作用

目的：观察血小板衍生生长因子-BB (PDGF-BB) 对大鼠主动脉血管环的收缩作用。 方法： 采用离体灌流SD大鼠胸主动脉血管环标本，观察不同浓度的PDGF-BB对其收缩作用，与去甲肾上腺素对比，并观察异搏定、吲哚美辛、酚妥拉明和普萘洛尔等药物对PDGF-BB缩血管作用的影响。 结果： PDGF-BB对大鼠胸主动脉有明显的收缩作用，阈浓度为2×10-10 mol/L，且呈现出浓度效应关系；与去甲肾上腺素相比，PDGF-BB对血管的收缩幅度低于去甲肾上腺素，但其收缩血管的活性高于去甲肾上腺素。吲哚美辛、酚妥拉明对PDGF-BB的收缩血管反应无明显影响，异搏定及普萘洛尔可明显抑制PDGF-BB的收缩血管反应。 结论： PDGF-BB对大鼠胸主动脉有明显的收缩作用，且呈现浓度效应关系，异搏定及普萘洛尔可抑制PDGF-BB的收缩反应。     

纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析

目的：探讨从结核杆菌多肽抗原(Mtb-Ag)纯化的多肽(C主肽)对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法：采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC，培养10天时经流式细胞仪检测细胞表型；另外以γδT细胞活化标志分子CD69的表达为指标，分析C主肽对已被Mtb-Ag激活扩增13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果：结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应；当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时，可使其显著表达CD69分子，同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论：结核杆菌C主肽可能是Mtb-Ag发挥特异性激活人γδT细胞的有效成分。     

肾细胞癌中抑癌基因PTEN的表达及生物学意义

目的 :研究抑癌基因PTEN在肾细胞癌的表达及其生物学意义。方法 :应用免疫组织化学S P法检测 5例正常肾组织、18例癌旁肾组织和 40例肾细胞癌组织中抑癌基因PTEN的表达。结果 :5例正常肾组织和 18例癌旁肾组织均有较强的PTEN蛋白的表达 ,二者PTEN蛋白的表达强度、阳性细胞的分布形式无差异。抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达不同于正常肾组织和癌旁肾组织 ,12 5 %的肾细胞癌呈PTEN蛋白阴性 ;17 5 %的肾细胞癌PTEN蛋白呈弱阳性 ;70 %的肾细胞癌PTEN蛋白呈阳性或强阳性 ,与癌旁组织PTEN蛋白的染色强度无差异。PTEN蛋白阴性的肾细胞癌 ,肾门淋巴结转移率为80 % ;PTEN蛋白阳性的肾细胞癌 ,肾门淋巴结转移率为 2 0 %。PTEN蛋白阴性肾细胞癌的肾门淋巴结转移率与PTEN阳性肾细胞癌的肾门淋巴结转移率比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :肾细胞癌中存在着抑癌基因PTEN的表达缺失和异常 ;抑癌基因PTEN的表达异常可能与肾细胞癌的发生、发展有关 ,抑癌基因PTEN是肾细胞癌的一种新的相关基因。     

含人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1重组腺病毒的构建与体外表达

从人肝癌组织中提取总RNA，RT—PCR合成hTIMP-1的全长cDNA，克隆到腺病毒载体AdEasy系统的穿梭质粒pAdTraek—CMV上，与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183受体菌中进行同源重组，成功构建含hTIMP-1全长eDNA的重组腺病毒载体，经293细胞的包装、扩增，生成含hTIMP-1基因的重组腺病毒AdhTIMP-1并实现体外表达，为进一步研究肝癌浸润和转移机理以及肝癌的基因治疗提供实验基础。     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4～ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9～ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。     

NF-κB在人肝细胞肝癌中的表达及与HBV X蛋白的关系

目的：研究核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒（HBV ）X蛋白的关系。方法；用免疫组织化学S－P法，检测52例人肝细胞肝癌组织中核转录因子NF－-κB及HBV X蛋白的表达；用脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染入人肝癌细胞系HCC－9204，检测肝癌细胞内核转录因子NF－-κB的表达。结果：52例人肝细胞肝癌组织均有核转录因子NF－-κB的广泛表达，并且在11例HBV X蛋白阳性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于细胞胞质和胞核，而在41例HBV X蛋白阴性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于肝癌细胞的胞质。将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染 入人肝癌细胞系HCC－9204，并在稳定表达X蛋白 的肝癌细胞，核转录因子NF－-κB定位于其胞质和胞核，而未进行基因转染的亲体细胞，核转录因子NF－-κB仅定位于细胞质，细胞核无核转录因子NF－-κB的表达。结论：核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中广泛表达，人肝细胞肝癌中存在着核转录因子NF－-κB的异常激活，并且核转录因子NF－-κB的异常激活与HBV X蛋白有关，X蛋白激活核转录因子NF－-κB， 使其从细胞转位于细胞核，这可能在HBV相关的人原发性肝癌肝癌的发生中起一定作用。     

黄体生成素释放激素免疫反应神经元在环鸽脑中分布的研究

应用免疫组织化学方法，研究了环鸽（Ｓｔｒｅｐｔｏｐｅｌｉａｒｉｓｏｒｉａ）脑中ＬＨＲＨ－ＩＲ细胞的分布。结果表明：黄体生成素释放激素（ＬＨＲＨ）免疫阳性细胞主要分布在前连合（ＣＡ）背内侧和腹内侧、下丘脑外侧核（ＬＨｙ）、内侧隔核（ＳＭ）腹内侧、内视前核（ＰＯＭ）区和前视前核（ＰＯＡ）区。ＬＨＲＨ免疫反应细胞分布的中心位于ＰＯＡ。由于下丘脑一些脑区与鸟类控制发声和听觉脑区存在直接神经纤维连系，这些结果为鸟类听觉、发声和内分泌脑区相互作用机理的研究提供了新的形态学依据