核转录因子κB对羊缺血预适应心肌细胞凋亡的影响

2003年1月至2004年3月,本研究对特异性核转录因子кB(NFκB)抑制剂脯氨酸二硫氨基甲酸酯(ProDTC)对缺血预适应(IPC)心脏保护效应的影响进行观察,并从细胞凋亡角度探讨NFκB在IPC中的作用。材料与方法1.动物分组:健康山羊18只(第二军医大学实验动物中心提供)均为雄性,体质量(29±3)kg,分为缺血再灌注(IR)组、IPC组及IPC+ProDTC组,每组6只。(1)IR组:建立体外循环,行体外循环1h后阻断上、下腔静脉,主动脉阻断后经主动脉根部灌注冷晶体停搏液使心脏停搏并间断顺灌行心肌保护,主动脉阻断60min后开放主动脉,心脏恢复血液灌注(再灌注)…     

红细胞免疫粘附肿瘤细胞电镜观察

红细胞在一定实验条件下可以免疫粘附肿瘤细胞,形成花环状。我们先将肿瘤细胞配成1×10~6/ml浓度,然后与等体积正常人混合新鲜血清在37℃条件下作用30min,取出后用生理盐水洗涤1遍,重新配成1×10~6/ml浓度待用。另取正常人红细胞,经生理盐水洗3遍后,配成1×10~8/ml浓度待用,将2ml处理后待用的肿瘤细胞悬液与1 ml红细胞悬液混合,置37℃条件下作用30min,取出后送电镜常规制片,观察结果。我     

肿瘤相关基因hyrdC基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带hyrdC基因的高滴度重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制做准备。方法以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增hyrdC基因，构建腺病毒重组质粒pShutth—CMV—hyrdC，线性化后采用电穿孔法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化BJ5183感受态大肠杆菌，挑选重组质粒将其转染293细胞，获得高滴度重组腺病毒Ad—hyrdC。结果成功地制备了高滴度携带hyrdC基因的重组腺病毒。结论采用AdEasy腺病毒载体系统能够构建携带hyrdC基因的重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制奠定了基础。     

肿瘤相关基因hyrdC基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带hyrdC基因的高滴度重组腺病毒,为进一步研究hyrdC基因的功能及机制做准备.方法以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增hyrdC基因,构建腺病毒重组质粒pShuttle-CMV-hyrdC,线性化后采用电穿孔法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化BJ5183感受态大肠杆菌,挑选重组质粒将其转染293细胞,获得高滴度重组腺病毒Ad-hyrdC.结果成功地制备了高滴度携带hyrdC基因的重组腺病毒.结论采用AdEasy腺病毒载体系统能够构建携带hyrdC基因的重组腺病毒,为进一步研究hyrdC基因的功能及机制奠定了基础.     

Experimental study on the induction of bone marrow stromal cells differentiating into cardiomyocyte-like cells with cardiomyocytes in vitro

Objective：To investigate the feasibility of bone marrow stromal cells （BMSCs） differenti ating into cardiomyocyte like cells in heterogeneous cardiomyocytes microenvironment in vitro. Methods： Mouse GFP-BMSCs were isolated by centrifugation through a Ficoll step gradient and purified by plating culture and depletion of the non-adherent cells. Neonatal rat cardiomyocytes （CMs） were isolated by enzymatic dissociation from hearts of 1-to 2-day old Sprague-Dawley （SD） rats and differentially plated to remove fibroblasts. Mouse GFP-BMSCs were cocuhured with neonatal rat CMs through direct and indirect contact, respectively. Cardiomyogenic differentiation of BMSCs was evaluated by immunostaining with an- ti-a-actin monoclonal antibody and observing synchronous contraction with adjacent CMs by phase contrast microphotography. Results： On day 7 of cocuhure, GFP-BMSCs （CMs ： BMSCs：4 ： 1）attached to nonfluorescent contracting cells （rat-derived CMs） showed myotube-like formation and started to contract synchronously with adjacent cardiomyocytes. About 10% of the fluorescent GFP-BMSCs were cardiomyocyte-like cells as determined by cell morphology and positive actin staining. Conclusion;Direct cell to-cell interaction with CMs is crucial for cardiomyogenic differentiation of BMSCs in heterogeneous CMs microenvironment in vitro. This provides a novel inducing pathway for directional differentiation of cardiovascular tissue engineering seed cells.     

乌司他丁在体外循环术后全身炎性反应综合征治疗中的作用

目的 探讨体外循环心脏手术术后早期应用乌司他丁（UTI）对患者全身炎性反应综合征的作用，及对患者早期恢复的影响。方法 体外循环人工心脏瓣膜替换术患者24例．根据是否在术后早期应用UTI随机均衡地分为处理组和对照组，回顾性观察患者全身炎性反应情况、血流动力学、呼吸功能和早期恢复情况。结果 处理组体外循环心脏术后血清细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8浓度显著低于对照组。处理组患者术后心输出量指数（cardiacindex，CI）、每搏量指数（strokeindex，SI）、氧合指数（oxygenindex，OI）均高于对照组；处理组术后呼吸机辅助时间、ICU停留时间均少于对照组，两组总住院时间、总住院费用无差异。结论 体外循环术后早期使用乌司他丁可以有效地缓解术后全身炎性反应，对脏器具有保护作用，有利于患者早期恢复，且不增加患者的经济负担。     

超极化停搏对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察超极化停搏对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)中缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,评价其对心肌的保护作用。方法将75只健康家猫随机均分为3组。应用猫ECC模型。并行循环组:ECC建立后不阻断上、下腔静脉和主动脉,仅并行循环150 min;去极化停搏组:主动脉阻断(ACC)60 min,再灌注60min,心脏停搏液使用去极化高钾St.Thomas液;超极化停搏组:心脏停搏液使用含吡那地尔的低钾St.Thomas液,余处理与去极化停搏组相同。应用Annexin-V/PI联合染色、流式细胞仪检测心肌细胞膜磷脂酰丝氨酸的外翻,比较超极化停搏处理组及去极化停搏组ECC过程中心肌细胞坏死和凋亡的数量。结果去极化停搏组于ACC 60min及再灌注60 min时坏死心肌细胞率分别为(2.727±0.436)%及(5.622±1.389)%;而超极化停搏组分别为(1.514±0.333)%和(3.052±0.403)%。两组ACC 60 min时,均未检出凋亡心肌细胞,但在再灌注60 min时,去极化停搏组和超极化停搏组凋亡细胞率分别达(2.253±0.581)%和(0.875±0.232)%。超极化停搏处理组缺血再灌注期间坏死及凋亡的心肌细胞明显减少。结论超极化停搏不仅能减少ECC缺血再灌注导致的细胞坏死,而且能够抑制再灌注期间发生的细胞凋亡。     

反义VEGF165真核载体的构建

以质粒pcDNA3.1为载体，将血管内皮基因（VEGF）165cDNA片段反向插入得到反义VEGF165真核表达载体，经过酶切电泳和基因测序证实获得的载体插入方向正确，可以进一步用于反义基因表达的实验研究。     

p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性研究

目的探讨p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性。方法取15例新鲜人食管鳞癌组织制成单细胞悬液,分别获取p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞,进行Transwell侵袭试验、耐化疗药物试验及裸鼠成瘤试验。结果15例新鲜人食管鳞癌组织中有7例发现p75NTR表达,其阳性表达率最高为10.37%,p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞在侵袭性、对化疗药物的耐受能力及致瘤能力上差异有统计学意义。结论 p75NTR阳性较p75NTR阴性食管鳞癌细胞具有更强的侵袭性、耐化疗能力及致瘤能力,可能富集人食管鳞癌干细胞。     

心房颤动患者心房肌组织醛固酮水平和CYP11B2基因与心房结构重构研究

目的探讨心房颤动（房颤）患者心房肌组织醛固酮水平和醛固酮合成酶基因CYP11B2mRNA表达与房颤时心房结构重构的关系。方法入选进行人工心脏瓣膜置换术的风湿性心脏瓣膜病患者25例，其中窦性心律者12例，慢性房颤（≥6个月）者13例。上述患者均于术前行经胸超声心动图检查并留取相关资料，于手术时同时取左右心房侧壁组织。用放射免疫法测定心房组织醛固酮水平；用VG染色法对胶原容量分数（CVF）半定量分析；实时荧光定量PCR测定CYP11B2mRNA在心房肌组织中的表达情况。结果与窦性心律组比较，房颤组左心房内径显著扩大（P〈0．01）；心房肌组织醛固酮水平和CVF均明显增加（P均〈0．001）；心房肌组织CYP11B2mRNA表达也明显增加（P〈0．001）；上述指标无论是在窦性心律时还是在房颤时其在左右心房之间差异无统计学意义（P均〉0．05）。CVF和左心房内径显著正相关（r=0．845，P〈0．001）；心房组织醛固酮水平与左心房内径（r=0．814，P〈0．001）和CVF（r=0．885，P〈0．001）均呈明显正相关；CYP11B2mRNA表达量和CVF亦呈明显正相关（r=0．757，P〈0．001）。结论心房颤动时心房结构重构与其组织醛固酮水平增加和CYPI1B2mRNA表达增加有关，醛固酮受体拮抗剂可能在阻止房颤的心房结构重构进程上发挥治疗作用。