HLA-Gα1结构域Met76和Gln79在KIR2DL4特异性识别中的作用研究

目的 探讨HLA-G α1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用.方法 采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgGFc段的可溶性融合蛋白;利用“桥式”PCR和“点突变”方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met76和Gln79的密码子突变为Ala76,79（HLA-mG）,通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAⅠ分子阴性的K562细胞上表达.流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Met76、Gln79残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用.结果 Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白.FACS结果表明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体在K562细胞上高表达.Met76、Gln79突变为Ala76,79后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别.结论 HLA-Gα1结构域中Met76和Gln79可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点.     

非经典MHC Ⅰ类分子与免疫调节

<正> 从线虫到人类,在病原体识别、信号转导途径及效应机制等方面均高度相似,这些防御机制有着共同的进化起源。至今研究过的脊椎动物中,都存在结构与功能相似的主要组织相容性复合体(MHC),即一组紧密连锁的高度多态性基因组成的染色体区域,其产物表达在不同细胞表面。人类MHC,又称白细胞抗原(HLA)系统,位于第6号染色体短臂(6p21.31),跨度3.6 Mb,是免疫功能相关基因最集中、基因密度最高、多态性最丰富、与疾病关联最密切的一个区域,一直是免疫学和遗传     

黑色素瘤细胞OCM-1A中DNA甲基化对HLA-G分子表达的影响

目的探讨黑色素瘤细胞OCM-1A中表观遗传因素DNA甲基化对HLA-G分子表达的影响.方法利用DNA甲基化抑制剂5-aza-2＇-deoxycytidine（ADC）处理HLA-G阴性黑色素瘤细胞OCM-1A,检测经不同浓度、不同时间的ADC处理后HLA-G基因及蛋白表达的变化.序列测定分析ADC处理前后HLA-G基因启动子区220bp片段的甲基化水平,RT-PCR检测HLA-GmRNA水平的变化,Western blot检测细胞HLA-G分子合成总量以及FACS检测细胞表面HLA-G分子的表达水平.结果HLA-G阴性黑色素瘤细胞OCM-1A经ADC处理后,HLA-G基因启动子区的CpG甲基化程度明显降低,诱导HLA-G基因转录,HLA-G分子获得表达.HLA-G基因及蛋白的表达水平与处理时间相关,随着处理时间的延长,HLA-G表达量上升.结论OCM-1A细胞中,HLA-G基因的表达调控受DNA甲基化影响,ADC对HLA-G的表达调控具有时相性.     

HLA-G与母胎免疫耐受

HLA-G属于非经典的HLA-GⅠ类抗原,其分子组织分布范围窄,生理状态下主要分布在母胎界面的绒毛外细胞滋养层上,在母胎免疫耐受方面发挥重要作用。本文对与生殖有关的HLA-G表达,妊娠及妊娠并发症中HLA-G在母胎界面的免疫耐受调节研究进展做如下综述。     

血清载脂蛋白A-1检测在HBV相关肝癌中的临床价值

目的 探讨血清载脂蛋白A-1（Apo A-1）检测在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝癌中的临床价值。方法 选取2010年1月~2014年12月笔者医院慢性HBV感染患者362例,包括88例慢性乙型肝炎（以下简称慢乙肝）、94例乙肝肝硬化、18例乙肝肝癌（无肝硬化基础）和162例乙肝肝硬化合并肝癌,另选取45例健康体检者作为正常对照组,检测所有入选者的血清Apo A-1、AFP和其他实验室指标,对检测结果进行统计学处理。结果 血清Apo A-1和AFP水平在所有组别中的总体差异均有统计学意义（F=29.86,χ²=112.53,P均=0.000）。随着疾病进展,血清Apo A-1水平逐步明显下降（P均 < 0.05）,但正常对照组与乙肝肝癌组（无肝硬化基础）、慢乙肝组与乙肝肝硬化合并肝癌组、肝硬化与乙肝肝硬化合并肝癌组的Apo A-1水平差异均无统计学意义（P均 > 0.05）。Child-Pugh评分A、B、C级肝癌患者血清Apo A-1水平之间的比较,差异均有统计学意义（P均 < 0.05）。肝癌患者Child-Pugh评分A级患者显著高于相对应的肝硬化患者（t=-3.02,P=0.003）,而B、C级患者之间的血清Apo A-1水平比较,差异无统计学意义（t=0.52、1.19,P=0.610、0.240）。TNM分期Ⅰ+Ⅱ肝癌患者血清Apo A-1水平显著高于TNM分期Ⅲ+Ⅳ肝癌患者（t=3.85,P=0.000）。结论 HBV相关肝癌患者血清Apo A-1水平与是否合并肝硬化、Child-Pugh评分及TNM分期相关,肝功能储备情况和机体的应激反应等多个因素影响血清Apo A-1的表达。     

HLA-G与T细胞

人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)属于非经典的HLAⅠ类分子,是机体内一种重要的免疫耐受分子。T细胞是细胞免疫的主要效应细胞,在机体维持免疫稳态中发挥重要作用。近来研究发现,HLA-G对T细胞的免疫调节功能一方面依赖于T细胞上抑制性受体直接发挥免疫抑制作用,另一方面通过诱导或"胞啃"机制产生调节性T细胞(Treg)、HLA-G+T细胞间接参与机体免疫耐受。本文就HLA-G对T细胞调节功能的研究进展作一综述。     

人类白细胞抗原-G与母胎耐受

妊娠过程中 ,带有父源性人类白细胞抗原 (ＨＬＡ)的胎儿 ,直接接触富含免疫活性细胞的母体蜕膜 ,理应受到母体免疫系统识别 ,产生以细胞免疫为主的免疫应答而遭到母体的排斥。但事实相反 ,母体对胎儿形成免疫耐受 ,大多数胎儿在母体子宫内安然生长近 10个月 ,直至分娩。母胎耐受现象的维持涉及诸多因素 ,如胎盘ＨＬＡ的表达、辅助性Ｔ淋巴细胞 (Ｔｈ)Ｔｈ1/Ｔｈ2 平衡、ＣＤ95及其配体的相互作用、各种细胞因子和整合素的作用等。其中ＨＬＡ Ｇ诱导母胎耐受是目前关注的热点[1] 。ＨＬＡ Ｇ通过多种途径诱导母胎耐受 ,阐明ＨＬＡ Ｇ在母胎耐…     

人类白细胞抗原G与肿瘤的发生、诊断和治疗

人类白细胞抗原G(HLA-G)是机体内一个重要的免疫调节分子,近年来,HLA-G与肿瘤免疫的关系得到广泛研究.最初的研究集中在HLA-G在肿瘤组织上的诱导性表达频率,如今已深入到HLA-G分子表达与肿瘤发生发展、预后、诊断以及基于HLA-G为靶点的肿瘤生物免疫治疗等方面.本文就HLA-G在上述相关领域的研究进展做一综述.     

临床肿瘤治疗药物相关基因的研究进展

肿瘤化学药物治疗已经在临床上得以广泛应用,但患者对各类治疗药物的敏感性和不良反应存在明显个体差异,药物相关基因指导下的临床肿瘤药物的个体化治疗是肿瘤治疗最重要的发展方向之一。本文主要介绍了5个与临床抗肿瘤药物疗效及毒性相关的基因：二氢嘧啶脱氢酶（DPD）基因突变与5-氟尿嘧啶（5-Fu）的毒性反应;表皮生长因子受体（EGFR）突变与非小细胞肺癌（NSCLC）中吉非替尼、特罗凯的疗效;核苷酸切除修复酶1（ERCC1）基因多态性与铂类化合物疗效;UDP葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）的遗传变异与羟基喜树碱的毒性反应;胸腺酸合成酶（TS）基因多态性与5-Fu的敏感性,探讨如何预测肿瘤治疗药物的敏感性及不良反应,以指导临床个体化用药。     

KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析

目的 克隆KIR2DL4 cDNA，并使其在NK-92细胞上获得稳定表达，分析KIR2DL4分子对NK-92细胞功能的调节作用。方法 采用RT-PCR方法，从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4 cDNA，将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4-pLNCX表达载体，将重组质粒转入NK-92细胞，利用单克隆抗体#33进行FACS检测，观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达。ELISA检测KIR2DL4对IFN-γ分泌的影响，同时根据LDH的释放实验，分析KIR2DL4分子对NK-92细胞毒功能的调节。结果：KIR2DL4分子在经KIR2DL4-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达，且不影响其他受体在：NK-92细胞上的表达水平。KIR2DL4分子能够部分限制：NK-92细胞对HLA-G阳性靶细胞的杀伤作用，交联KIR2DL4分子能够诱导IFN-γ的分泌。结论 成功构建了KIR2DL4-pLNCX逆转录病毒表达载体，并使KIR2DL4分子在NK-92细胞上获得功能性的高表达。