内源性一氧化碳对变应性鼻炎豚鼠诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 制备豚鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)动物模型,研究在AR豚鼠模型中内源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响.方法 24只豚鼠以随机数字表法分为4组,每组6只.第1组以生理盐水处理作为正常对照组,第2(AR组)、3、4组以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏,制成AR动物模型,第3、4组再分别以血红素氧合酶1(hemeoxygenase 1,HO-1)诱导剂氯化血红素和抑制剂锌原卟啉干预处理,分别作为HO诱导组和HO抑制组,分别测定各组豚鼠血浆中碳氧血红蛋白(carboxyhemoglobin,COHb)的百分含量(用来代表血浆中CO含量),并采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定鼻黏膜中HO-1和iNOS的相对表达量.结果 第2、3、4组豚鼠AR造模成功.血浆COHb含量(x-±s,以下同)第2组(2.27%±1.13%)高于第1组(1.08%±0.24%),差异有统计学意义(q=4.10,P＜0.01);第3组(3.17%±0.68%)高于第2组,差异有统计学意义(q=3.12,P＜0.05).鼻黏膜中HO-1、iNOS的相对表达量(x-±s,以下同)第2组[分别为(7.80±1.60)×10~(-3)和(5.81±0.05)×10~(-3)]高于第1组[分别为(1.96±0.71)×10~(-3)和(0.97±0.05)×10~(-3)],差异有统计学意义(q值分别为5.52、7.21,P值均＜0.01),第3组[分别为(11.89±4.78)×10~(-3)和(7.42±0.70)×10~(-3)]高于第2组,差异有统计学意义(q值分别为3.86、2.22,P值均＜0.05),第4组[分别为(3.82±0.98)×10~(-3)和(2.34±0.04)×10~(-3)]低于第2组,差异有统计学意义(q值分别为3.76、5.18,P值均＜0.05).结论 内源性CO在AR中影响iNOS的表达.     

人组织型激肽释放酶6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

Objective To approach the relationship between the expression of hK6 in ovarian neoplasm and clinicopathological variables and prognosis in ovarian cancer patients for finding a new tumor marker of the ovarian cancer. Methods The expression of hK6 was detected by immunohistochemistry in 19 cases of benign, 11 cases of borderline and 45 cases of malignant ovarian neoplasms and statistically analyzed whether its expression correlate with clinicopathological variables and prognosis in patients with ovarian cancer. Results The expression of hK6 in ovarian cancer tissues (60.0%) was significantly higher than that in the benign (15.8%) and borderline (27.3%) ovarian neoplasm tissues (P < 0.01). The expression of hK6 in higher-grade ovarian cancer tissues (68.4%) was higher than that in low-grade ones (14.3%, P<0.05). The expression of hK6 in late-stage (stage Ⅲ ,76.7%) was significantly higher than that in early-stage (stage Ⅰ or Ⅱ ,26.7%, P < 0.01). The expression of hK6 was significantly higher in patients with lymph node metastasis (77.8%) than that in patients without (33.3% ,P<0.01). The expression of hK6 in the cancer tissues in the patients died, or with reeeurence or metastasis within 3 years after surgery was higher (75.0%) than that in the patients with stable disease (42.9%, P < 0. 05). Conclusion The expression of hK6 in ovarian cancer was higher than that in benign and borderline ovarian neoplasms. The expression of hK6 is higher in the ovarian cancer of late stage, higher-grade, with lymph node metastasis and is associated with a poorer prognosis, hK6 may become a new markers in prediction of prognosis of the patients with ovarian tumors.     

Tiam1表达与大肠癌外周血微转移的关系

目的〓〖HTK〗探讨Tiam1与大肠癌外周血微转移的关系。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用实时荧光定量逆转录PCR方法检测51例大肠癌患者外周血微转移标志物CK20 mRNA的表达以及Tiam1在大肠癌组织及距肿瘤边缘5～10cm的正常粘膜组织中的表达,应用SPSS11.5统计软件分析Tiam1 mRNA表达水平与大肠癌临床表现及病理特征的相关性。〖HTW〗结果〓〖HTK〗51例中18例（35.29%）检测到外周血微转移。Tiam1 mRNA在有外周血微转移的大肠癌组织及无外周血微转移的大肠癌组织中表达分别为（72.11±2.38）×10-4、（15.78±5.01）×10-4, 差异有统计学意义（P＜0.05）。大肠癌Tiam1 mRNA的表量与患者的性别、年龄、原发部位、肿瘤直径、外周血CEA值无相关关系（P>0.05）, 但与肿瘤外周血微转移、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期相关（P<0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗Tiam1与大肠癌外周血微转移、组织分化、淋巴结转移密切相关,检测Tiam1 mRNA含量有助于判断大肠癌的侵袭和转移,尤其是外周血微转移。     

急性冠状动脉综合征合并2型糖尿病患者血浆过氧化物酶体增殖物激活受体γ与冠状动脉病变严重程度及斑块稳定性的相关性研究

目的探讨血浆过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）对急性冠状动脉综合征（ACS）合并2型糖尿病（T2DM）患者冠状动脉病变程度及斑块稳定性的影响。方法选取确诊的ACS患者102例,其中合并2型糖尿病52例（51.0%,ACS＋T2DM组）,单纯ACS患者50例（49.0%,ACS组）。选取正常对照30例（对照组）。行冠状动脉造影术（CAG）并应用Gensini积分系统进行冠状动脉狭窄程度评估;所有患者抽取静脉血应用ELISA检测血浆PPARγ、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平,并进行相关性分析。结果 ACS＋T2DM组Gensini积分显著大于ACS组（P〈0.05）。与对照组相比,ACS＋T2DM组、ACS组血浆PPARγ水平下降,MMP-9浓度显著升高,ACS＋T2DM组PPARγ下降、MMP-9升高更明显,组间比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）。ACS＋T2DM组PPARγ浓度与Gensini积分（r=-0.416,P〈0.05）、MMP-9浓度（r=-0.503,P〈0.05）均呈负相关趋势。结论合并2型糖尿病能够加剧ACS患者冠状动脉病变及斑块不稳定程度,PPARγ可能在其中起保护作用。     

乳腺癌组织KLK7 mRNA的表达及其与临床病理特征的关系

目的建立人KLK7mRNA荧光定量检测方法,对正常乳腺组织和癌组织KLK7 mRNA进行定量,分析其表达与部分临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除的组织中KLK7基因mRNA的表达量,并分析KLK7 mRNA的表达量与年龄、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）等临床病理特征的关系。结果KLK7 mRNA在乳腺正常组织相对表达水平为0．091±0．139,在乳腺癌组织中的相对表达水平为0．107±0．122,无统计学意义（P〉0．05）。但KLK7 mRNA在有淋巴结转移的患者乳腺癌组织中的表达水平高于未转移组（P〈0．05）;在Ⅲ-Ⅳ期患者乳腺癌组织中高于Ⅰ．Ⅱ期患者（P〈0．05）;ER（＋）阳性乳腺癌组织明显低于ER（-）乳腺癌组织（P〈0．05）。KLK7 mRNA表达水平与患者年龄、组织病理分类以及孕激素受体状态无相关性（P〉0．05）。结论乳腺癌组织KLK7 mRNA表达与TNM分期、ER状态及肿瘤转移情况有关。     

组织激肽释放酶6基因在人卵巢癌细胞中的表达与调控研究

目的 探讨雌激素对其受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶6(KLK6)基因mRNA和蛋白表达的调控.方法 取对数生长期的HO8910细胞,在试验组分别加10-10、10-9、10-8、10-7mol/L的17-β雌二醇(17-βE2),对照组加无水乙醇,培养72 h.用实时荧光定量逆转录PCR检测各试验组和对照组中KLK6 mRNA表达.用流式细胞术检测KLK6编码的组织激肽释放酶6(hK6)蛋白表达.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测细胞增殖活力及增殖周期的变化.结果 17-βE2作用72 h后,各试验组(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)HO8910细胞KLK6mRNA水平(3.83±0.41、4.14±0.49、6.26±0.38、7.28±1.82)和蛋白水平(10.62±0.35、10.89±0.12、11.88±0.28、12.07±0.15)均高于乙醇对照组(P＜0.01).经MTT检测各试验组HO8910细胞光吸收度A值(0.771±0.015、0.849 ±0.022、0.858±0.016、0.895±0.031),与乙醇对照组(0.459±0.064)相比明显增加(P＜0.01),细胞增殖活力明显增强;同时,经流式细胞技术检测,各试验组与乙醇对照组相比,其HO8910细胞G0/G1期百分率(67.72%、66.98%、66.31%、65.19%)呈下降趋势,S期(17.70%、18.27%、18.55%、19.11%)和G2/M期百分率(14.58%、14.75%、15.14%、15.70%)呈上升趋势.结论 17-βE2对KLK6 mRNA和蛋白的表达具有上调作用,同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖.     

外周血T细胞及双阴性T细胞在结直肠癌患者中的变化及临床意义

为探讨外周血T细胞及双阴性T细胞(double-negative T cell,DNT)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者中的变化及临床意义,收集93例初次就诊的CRC患者(其中55例行CRC根治术)外周血,同时收集54例体检中心健康者的外周血.采用FACS检测T细胞亚群及DNT比例,分析CR...     

人组织激肽释放酶6的原核表达载体的构建及表达

目的：构建人组织激肽释放酶6原核表达系统。方法：采用RT-PCR技术从人乳腺癌组织中扩增出KLK6基因片段,克隆至原核表达载体pET28b中,经酶切和序列测定后,转化至E.coli BL21,IPTG进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化,其纯化产物进行SDS-PAGE和Western-blot检测。结果：pET28b-KLK6原核表达载体构建成功,经IPTG诱导高效表达hK6蛋白,纯化后获得大量高纯度蛋白。结论：成功构建了KLK6的原核表达系统并在E.coli BL21中高效表达,获得高纯度的hK6融合蛋白。     

Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨Wnt5a基因对人肝癌细胞MHCC97L生物学行为的影响。方法脂质体法介导Wnt5a表达及阴性对照质粒转染MHCC97L细胞;RT-PCR及Western blot法检测质粒DNA片段插入和Wnt5a蛋白的表达;借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期和划痕试验对转染细胞的生物学活性进行检测。结果 pcDNA3.1组细胞生长速度明显快于Wnt5a表达组细胞;pcDNA3.1组细胞克隆形成率明显高于Wnt5a表达组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Wnt5a表达能抑制细胞由G1期→S期的进程;划痕试验显示,Wnt5a表达组较阴性对照组细胞迁移速度明显减慢,当加入Wnt5a抗体阻遏信号通路时,细胞迁移速度加快。结论 Wnt5a可抑制人肝癌细胞MHCC97L的增殖和迁移能力,在肿瘤生长过程中发挥肿瘤抑制基因样作用。     

冠心病PCI患者CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抵抗及预后关系

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者CYP2C19基因*2、*3位点单核苷酸多态性与氯吡格雷抵抗(CR)的关系及对接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的CHD患者短期预后的影响。方法入选济南军区总医院280例行PCI的CHD患者,通过焦磷酸测序技术,检测其CYP2C19*2,*3单核苷酸多态性;通过血栓弹力图(TEG),检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集抑制率,分析CR与基因型的关系。经全变量多因素logistic回归分析氯吡格雷抵抗的危险因素。并随访患者6个月心脏不良事件(MACE)的发生。结果患者总CR发生率为45%,CYP2C19*2,*3位点突变杂合组CR(59.4%)和CYP2C19*2,*3突变纯合组(83.3%),显著高于CYP2C19野生组患者(17.4%)(P<0.01);CYP2C19野生组患者NCR发生率(82.6%)显著高于杂合突变组(67%)、纯合突变组患者(16.7%)(P<0.01)。纯合突变组ADP抑制率(22.34±11.03%)显著低于杂合突变组(32.63±17.45%)及野生组(47.00±19.77%)(P<0.01)。多因素logistic回归分析显示野生基因型(OR=0.053,P<0.01)及HDL(OR=0.143)(P<0.01)是CHD患者CR的保护性因素,纯合突变型组(OR=6.197,P<0.01)是CHD患者CR的危险因素。术后6个月随访,总MACE发生率为11.36%,纯合突变型患者MACE事件发生率(36.36%)显著高于杂合突变型(12.17%)及野生型(10.96%)患者(P<0.01)。结论 CYP2C19*2,*3位点突变杂合组和突变纯合组CR发生率显著高于野生组患者,CYP2C19基因野生型、HDL是CHD患者发生CR的保护性因素,CYP2C19基因纯合突变型为CR的危险因素;突变型CHD患者PCI术后MACE事件显著增高。