锌对微波过氧化损伤的防护作用的实验研究

目的 :探讨微量元素锌对微波致视网膜神经节细胞的脂质过氧化损伤的防护作用 ,为进一步研究微波损伤机理及其防护提供一定的实验依据。方法 :体外培养猪视网膜神经节细胞 ,按微波辐照时间分为对照组、3 0 min组、6 0 min组 (辐照强度为 3 0 m W· cm-2 ) ,以及各辐照时间加锌组 ,2 4 5 0 MHz微波理疗机于微波屏蔽室内辐照 1 h,辐照后观察细胞形态 ,收集细胞 ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)含量 ,测定细胞内锌含量。结果 :微波辐照后 ,细胞有聚集现象 ,部分细胞轴突消失 ,细胞 MDA含量明显增高 ,SOD降低 ,细胞内锌含量降低 ;加锌各组光镜下细胞形态变化不明显 ,MDA含量有所恢复 ,SOD含量增高 ,细胞内锌含量显著增高。结论 :微波可引起视网膜神经节细胞脂质过氧化损伤 ,锌可提高细胞的抗氧化能力 ,在一定程度上减轻微波对视网膜神经节细胞的过氧化损伤     

瘦素的代谢调控作用研究进展

各种代谢相关疾病是严重影响人类健康的重要公共卫生问题。深入探讨这些疾病的分子机制并在此基础上探索有效的防护措施具有重要意义。瘦素在代谢调控中发挥着重要的作用,同时也与肥胖等多种代谢性疾病有关。本文对瘦素参与代谢调控的研究进展作一综述,对其临床应用前景也进行了总结。     

二价金属转运体1参与脉络丛上皮细胞铅吸收的机制

目的研究二价金属转运体1(DMT1)参与脉络丛上皮细胞系Z310细胞铅转运的机制。方法采用原子吸收分光光度法检测Z310细胞铅吸收的时间效应。免疫荧光法观察DMT1在Z310细胞内的表达。采用siRNA干涉DMT1表达,荧光实时定量PCR检测DMT1的表达水平。原子吸收分光光度法检测DMT1 siRNA干涉对细胞铅吸收影响。结果醋酸铅暴露后,Z310细胞铅吸收量呈时间-依赖性增高;DMT1在Z310细胞中有较丰富的表达,主要在胞质中呈较均匀的分布。与阴性对照组相比,siRNA干涉后,Z310细胞DMT1 mRNA表达水平下降了74.8%。DMT1siRNA干涉后细胞铅吸收量减少了52.3%(P0.01)。结论在脉络丛上皮细胞吸收铅的过程中,DMT1起到重要的转运作用。     

孕期铅暴露对生长发育期大鼠肾功能及Claudin-2的影响

目的 通过建立孕期染铅模型检测出生后SD仔鼠肾功能的改变及紧密连接蛋白Claudin-2的改变,阐明孕期铅暴露对SD仔鼠肾功能的影响.方法 SD孕鼠通过饮用50 mg/L,100 mg/L醋酸铅（PbC4H6O4＆#183;3H2O）的方法建立模型.仔鼠出生后6周检测血液中肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和胱抑素C（CYS-C）水平的变化,肾组织形态及Claudin-2的改变,探讨孕期铅暴露对SD仔鼠肾功能的影响.结果 血铅结果显示,低剂量组仔鼠血铅水平（146.28±15.10 μg/L）与高剂量组仔鼠血铅水平（188.03±18.58μg/L）较对照组明显升高,差异有统计学意义（F=5.22,P＜0.01）,且低剂量组与高剂量组之间,差异有统计学意义（F=5.53,P＜0.05）,说明模型建立成功.染铅SD仔鼠血肌酐（9.31±1.98 μmol/L,F=5.89,P＜0.01）,尿素氮（89.73±14.45 mmol/L,F=5.01,P＜0.01）和CYS-C（0.37±0.04mg/L,F=6.96,P＜0.01）水平升高,病理结果显示：染铅组仔鼠肾小球轻度肿大,伴炎性细胞浸润;部分肾小管上皮细胞变形、坏死,部分管腔内有管型.免疫荧光结果显示,染铅组仔鼠Claudin-2表达下降,连续性被破坏.结论 孕期铅暴露能引起生长发育期大鼠的肾功能不全,并且铅暴露可以降低肾小管Claudin-2的表达.     

脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化

目的在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质。方法PCR扩增HlrgcDNA编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导。表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%。表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯。加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞。结论在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础。     

维生素D及其类似物抗肿瘤作用机制

维生素D具有明显抗肿瘤细胞生长作用,其作用机制复杂.现综述维生素D及其类似物在细胞周期、细胞分化、生长因子、抑制肿瘤转移侵袭及血管生成中的作用,为探讨其抗肿瘤机制和临床应用提供基础.     

锰对多巴胺能神经细胞SN4741生长及细胞周期分布的影响

目的：研究锰（Manganese,Mn）对多巴胺能神经瘤细胞SN4741生长与细胞周期分布的影响，为进一步探讨锰损伤神经细胞的机制提供参考资料，方法：取对数生长期神经细胞株SN4741，使用含有200、400、600、800μmol/L MnCl2的培养液，分别作用1、2、4、6d后，用噻唑蓝（MTT）比色试验和平板集落形成实验检测细胞的存活和生长，筛选锰的细胞毒性剂量。流式细胞仪检测细胞周期分布。结果：MTT和平板克隆形成实验检测结果显示200－800μmol/L的Mn作用2、4、6d均对SN4741细胞株生长有显著的抑制作用，且呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明，锰可将SN4741细胞生长周期阻滞在S期。结论：锰对神经瘤细胞SN4741增殖上有显著的抑制作用，将细胞阻滞在S期，结果为进一步探讨锰的神经细胞毒作用机制提供实验基础。     

谷胱甘肽在微波辐射致hTERT-RPE1细胞基因转录中的作用

目的 :对人视网膜色素上皮 (hTERT RPE1 )细胞和添加 5 0 μmol·L -1 谷胱甘肽 (GSH)培养 2 4h后的hTERT RPE1细胞进行 2 4 5 0MHz,1 0mW·cm -2 的微波辐射 ,并就有关细胞应激和凋亡基因的转录水平进行比较研究 .方法 :应用基因芯片技术对微波辐射hTERT RPE1细胞和添加GSH(5 0 μmol·L -1 ,2 4h)的hTERT RPE1的mRNA进行检测 .结果 :在 97条有关应激和凋亡的目的基因中发现 :与未添加GSH的hTERT RPE1细胞相比 ,添加GSH的细胞有 1 1条基因转录下调 ,其中与应激相关的基因M 31 1 6 6表现出明显下调 (1 1倍 ) ,与细胞增殖相关的基因AB0 1 4 5 0 9,AF 0 5 36 4 1 ,NM 0 1 2 1 77,AF 0 0 1 4 97和AF 1 1 7386转录下调 ,与细胞蛋白质翻译、折叠和加工有关的基因NM 0 0 1 4 1 8,AJ2 5 0 91 5及U36 336转录下调 ,与细胞内信号传导代谢有关的基因U32 5 1 9,AF 1 1 7386等转录下调 ;只有基因W5 2 72 1转录上调 .结论 :GSH (5 0 μmol·L -1 ,2 4h)可显著降低hTERT RPE1细胞急性期反应蛋白转录 ,使细胞蛋白质合成、翻译和细胞生长增殖等基因转录下调 ,并同时使调节信号通道和周期蛋白丰度的相关基因转录下调     

次声对大鼠肾脏单胺氧化酶、GSH-Px、SOD活性和MDA含量的影响

0　引言次声是振动频率在 0 0 0 1～ 2 0Ｈｚ的特殊弹性波 ,是一种由各种物体振动而产生 ,广泛存在于各种环境中 .凡有噪声 ,有振动的场合 ,都有次声的产生 .次声在一些军事性质的活动中也普遍存在 .这些低颇噪声污染环境 ,危害人类健康 .从 2 0世纪 6 0年代起 ,各国学者对次声以及生物学效应进行了较多的研究 .我国在这方面也做了一定的研究[1 6 ] ,对脑、眼、耳、心、肝、肺等均有报告 ,但对肾脏的研究报道甚少 .本实验对次声应急大鼠肾脏的生物学效应进行了研究 .以便更进一步研究次声对人类危害的机制 ,对制订预防措施提供依据 .1　材…     

小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备

目的：原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清.方法：参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签（EST）序列进行拼接,预测mlrp cDNA序列.用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体.以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用Western blot鉴定抗体的特异性.结果：预测的mlrp cDNA的长度为1 905 bp.将克隆获得的1 554 bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mLRP融合蛋白.以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清.结论：mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础.