小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备

目的：原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清.方法：参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签（EST）序列进行拼接,预测mlrp cDNA序列.用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体.以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用Western blot鉴定抗体的特异性.结果：预测的mlrp cDNA的长度为1 905 bp.将克隆获得的1 554 bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mLRP融合蛋白.以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清.结论：mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础.     

锰诱导PC12细胞凋亡与p-38MAPKs的关系

目的　以鼠嗜铬神经瘤细胞 (PC12 )为模型 ,筛选锰对神经细胞增殖抑制作用的时间及剂量 ,观察细胞形态学、细胞周期和生化指标改变与丝裂原活化蛋白激酶 (p38MAPKs)活化表达间的关系。方法　用 2 0 0 ,4 0 0 ,6 0 0 ,80 0μmol/LMnCl2 的培养液 ,分别作用对数生长期PC12细胞 1,2 ,3,4d后 ,用噻唑蓝比色 (MTT)筛选锰的细胞毒性剂量 ;流式细胞仪检测细胞周期分布 ;透射电镜观察细胞形态学变化 ;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl2 对PC12细胞基因组DNA的影响。蛋白印迹 (western -blot)法检测 p -p38。结果　MTT实验结果显示 ,2 0 0～ 80 0 μmol/LMnCl2 作用 1,2 ,3,4d对PC12有显著的抑制作用 ,呈剂量和时间依赖趋势 ,6 0 0 μmol/LMnCl2 作用 4d对PC12的抑制率可达 5 0 %以上。流式细胞仪检测实验表明 :6 0 0 μmol/LMnCl2 作用 4d将PC12细胞周期阻滞在S期 ,诱导细胞凋亡 ,与电镜结果一致 ,同样条件下细胞DNA碎片化。Western -blot实验显示 6 0 0 μmol/LMnCl2 作用 1,2 ,3,4dp -p38逐渐升高 ,3d时较对照组增加 6 6倍 (n =3,P <0 0 5 ) ,2 0 0 ,4 0 0 ,6 0 0 μmol/LMnCl2 作用 4d时 ,磷酸化蛋白 38(p - p38)也逐渐升高 ,4 0 0 μmol/LMnCl2 作用 4d时较对照组升高 4 7倍 (n =3,P <0 0 5 )。结论　锰通过MEK3/     

锰对PC12细胞的增殖抑制及其Erk1/2活化表达

目的　探讨锰在细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路Erk1/2活化表达的作用及其相互之间的关系 ,研究其对基底神经节损伤作用的机制。方法　取对数生长期PC12细胞 ,用含 2 0 0、40 0、60 0、80 0 μmol/LMnCl2 的培养液 ,分别作用 1、2、3、4d ,噻唑蓝 (MTT)比色试验、平板集落形成实验和台盼蓝拒法筛选锰的细胞毒性剂量 ;免疫印记法 (Western blot)检测磷酸化Erk1/2 (p Erk2 )水平。结果　MTT和平板克隆形成实验检测结果显示 2 0 0～ 80 0 μmol/LMnCl2 作用 1、2、3、4d均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量和时间依赖效应关系 ,而且 60 0 μmol/LMnCl2 作用 4d对PC12的抑制率可达 5 0 %以上。Western blot结果显示 60 0 μmol/LMnCl2 作用 1、2、3、4d可见p Erk2逐渐降低 ,其中作用 2d时较对照明降低了 75 % (n =3 ,P <0 0 5 ) ,2 0 0、40 0、60 0 μmol/LMnCl2 分别作用 4d时 ,p Erk2亦逐渐降低 ,当 40 0 μmol/LMnCl2 作用 4d时较对照明降低了 78% (n =3 ,P <0 0 1)。结论　使用Erk通路MEK1/2特异性阻制剂PD980 5 9实验结果表明 :锰可能通过MEK1/2磷酸化下游的Erk1/2 ,下调p Erk。锰对PC12细胞的毒性作用可能是通过关闭胞外信号调节激酶(ERK)通路引发细胞增殖抑制     

兔应力性骨折发生过程中钙磷锌元素的改变

目的 :以骨闪烁显像法 (ECT)为诊断依据 ,建立兔应力性骨折 (stressfracture ,SF)实验模型 ,探讨SF发生过程中钙、磷、锌元素的变化。方法 :8只兔作为实验组 ,6只作为对照组。实验组使其在模拟实验装置内产生跑跳运动 ,有效跑跳次数约 30 0次 /d。 1周训练 6d ,共 6周。训练结束 ,宰杀 ,取血清、肝脏、骨骼肌组织测定钙、磷、锌元素。结果 :①血清中Ca、P、血清骨钙素、降钙素、甲状旁腺素运动组与对照组无显著差异 ,血清Zn在运动后呈明显升高 ;②骨骼肌组织Ca和Zn运动组较对照组均明显升高 ,肝脏组织的Ca和Zn均无明显变化。结论 :提示在SF发生过程中 ,元素钙和锌可能在SF发生过程中起一定作用。     

大鼠经脑内注射染锰后iNOS表达的变化

目的观察大鼠经脑内注射染锰后诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的变化。方法健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,采用脑内注射方法染锰,于损伤后不同时间点取材,用免疫组织化学染色方法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的变化;用免疫组织化学染色和Western blot检测诱导型一氧化氮合酶表达的变化。结果①实验组大鼠染锰后1d,iNOS无明显表达;注射侧黑质与对侧相比,TH免疫反应阳性细胞无明显变化。②实验组大鼠染锰后7d,iNOS免疫反应阳性细胞明显增加;注射侧黑质与对侧相比,TH免疫反应阳性细胞明显减少。③对照组大鼠脑内注射后7d和1d,iNOS均无表达;注射侧黑质与对侧相比,TH免疫反应阳性细胞无明显变化。结论锰中毒可导致多巴胺能神经元的损伤,诱导型一氧化氮合酶可能在其中发挥重要的作用。     

短期饮水中氟化物限量值的实验研究

为制订我军战时杠野营条件下短期饮水中氟化物的限量值提供依据,参考世界卫生组织饮用水水质准则和经济合作与发展组织化学物质毒性试验指南以及外军战时水质标准,进行了水中氟化物亚急性毒理学试验。     

微波辐射对培养的hTERT-RPE1细胞的应激损伤

目的：观察2450MHz微波辐射对培养的hTERT—BPEl细胞的应激损伤。方法：体外培养的人视网膜色素上皮细胞系细胞，分别在强度为10、20、30mW／cm2的微波下辐射1h，辐射后，用光学显微镜和透射电镜观察各组细胞的形态及变化；台盼蓝染色检测细胞存活率；测定细胞内抗氧化物酶SOD和GSH—Px的活性和脂质过氧化产物MDA的含量；另外，继续培养各组细胞，观察微波辐射对细胞增殖的影响。结果：微波辐射后，细胞存活率、细胞内抗氧化物酶SOD、GSH—Px活性与对照组相比显著降低；而过氧化产物MDA含量与对照组相比显著升高，其降低或升高的幅度与微波辐射的强度的大小有关。结论：2450MHz微波辐射可引起培养的hERT—BPEl细胞的应激损伤。     

急性恐惧应激对大鼠激素水平、空间学习记忆行为的影响

目的:观察急性应激对大鼠激素水平、空间学习记忆行为的影响,探讨恐惧应激对机体学习记忆能力的影响及其机制.方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠32只,体质量180～220 g.随机分成对照组(n=16)和应激组(n=16).用足电击 白噪声刺激方式建立急性恐惧应激大鼠模型,并进行空间觅向能力测试,以判断动物记忆储存及提取再现能力.放射免疫法及荧光分光光度法检测血浆和脑组织激素水平.结果:血浆及脑组织去甲肾上腺素、5-羟色胺、皮质醇水平增高,而肾上腺髓质素水平降低(P＜0.01);水迷宫实验结果显示急性恐惧应激后大鼠训练潜伏期(LP)与对照组相比延长(P＜0.05),在限定时间内穿过平台原位置的次数显著减少(P＜0.01).结论:急性恐惧应激可以显著影响大鼠的激素水平,对学习记忆能力造成损伤.     

维生素E对微波辐照后视网膜神经节细胞形态的影响

为探讨微波对体外培养的猪视网膜神经节细胞形态的影响及维生素 E(VE)的防护作用 ,为微波致视网膜损伤的研究提供一定的实验依据。用体外培养猪视网膜神经节细胞方法 ,光镜及电镜观察其形态结构 ,加入不同浓度 VE,用微波理疗机于微波屏蔽室内以 30 m W/ cm2 功率密度辐照 1h,辐照后立即于光镜下观察其形态变化 ,电镜观察其超微结构 ,比较辐照前后及加入 VE(10、2 0和 40 g/ L)后视网膜神经节细胞的变化。结果显示微波辐照后 ,细胞有聚集现象 ,部分细胞轴突消失 ,电镜可见线粒体及内质网肿胀 ,VE各组光镜下细胞形态变化不明显 ,电镜显示线粒体轻度肿胀 ,嵴完整。结果表明微波可引起视网膜神经节细胞形态损伤 ,VE可在一定程度上减轻微波对视网膜神经节细胞的损伤     

硒在预防医学中的应用—国内19年文献分析

1 98 8年以来 ,关于硒与预防医学的研究逐渐受到重视 ,特别是 1 990年以后平均每年的文献量在 1 1 .63篇 ,但文献的地区和作者分布较为分散。从内容上看 ,关于硒对肿瘤的预防作用研究较多 ,硒与克山病的发病研究有 1 1篇 ,还有部分关于硒含量测定技术的文献和硒中毒的研究 ,但总的来说 ,硒与疾病的关系特别是硒在防肿瘤中的作用是近几年研究的重点。