轻型和重型手足口病临床和实验室特征分析

目的 研究2008年深圳市轻型和重型手足口病临床特点和实验室特征.方法 将深圳市东湖医院和儿童医院共145例手足口病住院患者作为研究对象,其中轻型124例,重型21例.收集患者临床和一般实验室资料,急性期与恢复期连续粪便和血标本,通过RT-PER检测EV71病毒核酸,分离和培养EV71肠道病毒,其中2例死亡患者行病理组织学检测.结果 与轻型患者比较,重型患者白细胞计数、血糖显著升高,但年龄显著降低,粪便中轻型和重型患者EV71基因检出率分别为35%与67%,重型患者EV71检出率显著高于轻型患者,从9例患者粪便中分离培养出肠道病毒,其中1例为死亡患者粪便标本.2例患者死于神经源性肺水肿和脑干脑炎.结论 EV71是重型患者和死亡患者的最主要病原体,神经源性肺水肿和脑干脑炎是EV71型手足口病的最主要死亡原因,对年龄小于4岁,高热、皮疹稀疏和高血糖的EV71型手足口病患者应警惕向重型发展.     

采用绿色荧光蛋白腺病毒载体表达HBsAgCTL优势表位肽MHC单链三聚体

目的 采用携带GFP报告基因腺病毒载体表达HBsAg细胞毒性T细胞(CIL)表位MHC单链三聚体,为增强HBV特异性免疫提供新方法.方法 构建小鼠MHC Ⅰ类分子(H-2Ld)限制的HBsAg优势CTL表位肽与MHCⅠ类分子重链(Ld)和β2M链(β2-microglobulin,β2微球蛋白)的单链三聚体(HBsAg-SCT).并将HBsAg-SCT亚克隆到GFP标记腺病毒载体,以HBsAg和OVA-SCT作为对照,转染293A细胞,包装产生携带HBsAs-SCT,HBsAg和OVA-SCT的重组腺病毒.结果 经双酶切和克隆测序鉴定,HBsAg-SCT能成功克隆到编码GFP标记的腺病毒载体,通过荧光显微镜观察到转染的293A细胞含有绿色荧光素蛋白.通过Western Blot进一步证实表达的重组蛋白HBsAg-SCT能与抗-腿抗体发生反应.结论 编码HBsAg-SCT的荧光蛋白腺病毒载体成功构建,并能在293A细胞中完整包装成重组腺病毒颗粒.     

应用MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异

目的 建立基于MALDI-TOF-MS技术的高通量检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的临床检测方法 .方法 应用MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物,按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样,MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据,判读基因变异位点.批量检测、分析138例HBV耐药包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦单药耐药及多重耐药的慢性乙型肝炎患者血清标本.并对MALDI-TOF-MS所检测的HBV基因变异位点所在区域进行DNA测序,与MALDI-TOF-MS检测结果 对比、分析.结果 建立了基于MALDI-TOF-MS技术的HBV基因突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.能一次获得138份标本的HBV基因突变临床检测结果 .MALDI-TOF-MS技术和DNA测序同时检测的33份标本中,有10份检测结果 不一致,其中有2份MALDI-TOF-MS技术未检测到,有1例出现2个检测位点不一致.结论 MALDI-TOF-MS技术灵敏度高、准确度高,可高通量、快速检测HBV基因变异,适用于HBV临床诊治及监测.     

金标免疫色谱试剂在结核病诊断中的意义

本文采用新一代侧流免疫色谱检测试剂(ACCU—CHEKTBKit)检测患者血清中特异性结核抗体,评价和分析该试剂在结核病诊断中的意义?研究对象:104例活动性肺结核患者为我院1999年收治的住院病人,根据临床表现?体征?胸部X线及CT检查?细菌学检查确诊,按1998年8月全国结核病分类研讨会所定的分类标准分为5类?50例非结核患者为我院社区体检健康者?收集上述患者的痰液,进行经典抗酸染色(Ziehl-Neelsen)查抗酸菌及结核菌培养?结核抗体的检测严格按照ACCU—CHEKTBKit(MillenniumBio-technologyInc.产品)操作,整个过程约需10～20分钟?     

结核性淋巴结炎组织中Fas/FasL的检测

资料表明,Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞凋亡在肺结核病的发生过程中具有很重要的作用［１,２］。我们采用免疫组化方法检测了３５例结核性淋巴结炎组织Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达情况,并对其意义进行探讨。材料和方法３５例石蜡包埋的结核性淋巴结炎病理组织和２０例淋巴结正常组织来自深圳市东湖医院和深圳市红十字会医院病理科。免疫组化检测石蜡组织中Ｆａｓ和ＦａｓＬ参照二抗试剂盒（ＥｎＶｉｓｉｏｎｍＴＭＴｗｏ－ＳｔｅｐＫｉｔ,丹麦Ｄａｋｏ公司产品）说明操作,一抗（Ａｎｔｉ－Ｆａｓ及Ａｎｔｉ－Ｆａｓ－Ｌ）为美国ＳａｎｔａＣ…     

艾滋病患者HAART治疗前后CD4+T细胞表面某些归巢分子和辅助受体表达变化分析

目的 探讨艾滋病(AIDS)患者高效抗逆转录病毒治疗(HAART)治疗前后CD4+T细胞表面CD49d、CCR9、CD62L和CCR5表达的变化情况.方法 采用流式细胞术检测42例艾滋病患者和18例HIV阴性健康对照的外周血CD4+T细胞表面CIM9d、CD62L、CCR9和CCR5的表达,并对CD4+CCR9+和CD4+CCR5+T细胞进一步进行CD45RO表型分析,采用BD FACSDiva软件分析计算各组细胞表达的百分率.结果 艾滋病患者尚未开始HAART治疗组(pre-HAART组)外周血CD4+细胞计数明显低于HAART治疗组(HAART组)(P<0.01);pre-HAART组外周血单个核细胞(PBMC)中CD3+CD4+,CD4+CCR9+,CD4+ CCR5+T细胞的百分率均明显低于HAART组(P<0.01),pre-HAART组CD4+CD49d+,CD4+CD62L+,CIM+CCR9+CD45RO+,CD4+CCR9+CD45RO-,CD4+CCR5+CD45RO+,CD4+CCR5+CD45RO-T细胞的百分率显著低于HAART组(P<0.001);HAART组PBMC中CD3+CD4+,CD4+CD62L+,CD4+CCB5+T细胞的百分率均显著低于HIV阴性对照(HIV-neg组)(P<0.001);pre-HAART组以上各组细胞群的百分率均显著低于HIV-neg组(P<0.05).结论 AIDS患者外周血CD4+T细胞表面肠道归巢分子CD49d、CCR9,淋巴结归巢分子CD62L,辅助受体CCR5异常改变,但HAART可以逆转以上部分病理变化.肠道归巢分子CD49d、CCR9和淋巴结归巢分子CD62L可作为艾滋病疾病进展和评价机体HAART后免疫重建情况的指标.     

流式检测CD_(161)在肺结核患者外周血中的表达水平及其临床意义

目的研究CD_(161)在肺结核患者(PTB)外周血中的表达水平及其临床意义。方法通过流式细胞仪检测103例潜伏性结核感染患者(LTBI)和154例PTB患者外周血CD_3~+CD_(161)~+、CD_4~+CD_(161)~+和CD_8~+CD_(161)~+T细胞的表达水平,比较其在LTBI与PTB间差异;分析外周血CD_3~+CD_(161)~+、CD_4~+CD_(161)~+和CD_8~+CD_(161)~+T细胞的表达水平分别与白细胞总数、淋巴细胞(百分比和绝对值)、单核细胞(百分比和绝对值)的相关性。结果 PTB患者外周血CD_3~+CD_(161)~+、CD_4~+CD_(161)~+和CD_8~+CD_(161)~+T细胞的表达水平均显著低于LTBI患者(P0.0001);PTB患者外周血CD_3~+CD_(161)~+和CD_8~+CD_(161)~+T细胞的表达水平和白细胞总数、单核细胞绝对值呈负相关(P0.05);PTB患者外周血CD_4~+CD_(161)~+T细胞的表达水平和淋巴细胞绝对值呈负相关,而LTBI患者外周血CD_4~+CD_(161)~+T细胞的表达水平和淋巴细胞绝对值呈正相关(P0.05)。结论本结果显示CD_(161)能区分PTB和LTBI,可作为早期区分PTB和LTBI的分子标志。     

肺结核患者外周血记忆性T细胞及B细胞亚群的检测分析

目的探讨肺结核患者外周血记忆性T及B细胞亚群的表达水平。方法采用流式细胞仪检测肺结核患者（TB）、潜伏感染者（LTBI）、健康人（HD）外周血记忆性T、B细胞亚群水平及B细胞表达水平;利用Elispot技术检测外周血单个核细胞（PBMC）结核菌抗原特异性IFN-r分泌水平。结果流式结果显示,TB及LTB1的CD4＊及CD8＊中心记忆性T细胞（Tcm）显著增多,以CD4＊尤为显著;相反,效应记忆性T细胞（Tem）减少。TB记忆性B细胞均低于HD和LTBI（P〈0．01）;而在HD与LTBI及TB这三组CD19＆细胞占淋巴细胞比例中都有明显差异（P〈0．01;P〈0．001）。CD4’／CD8’Tcm与IFN-γ ELISPOT结果成正相关。结论肺结核患者外周血中存在着记忆性T及B细胞亚群的紊乱,中心记忆性T细胞增多,效应记忆性T细胞减少,记忆性T、B细胞的数量及免疫状态与结核菌感染的不同转归有关,记忆性T、B细胞在结核病发病机制中发挥着重要作用。     

HBcAg与前S1抗原部分基因的融合表达及其抗原性分析

我国是慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)高发区 ,虽然目前有多种抗ＨＢＶ药物用于ＣＨＢ的临床治疗 ,但疗效不尽人意 ,且价格昂贵。寻找治疗ＣＨＢ和慢性乙型肝炎病毒携带者的有效方法仍是当前急需解决的问题。研究表明 ,ＨＢＶ核心抗原和前Ｓ1抗原在ＨＢＶ感染清除方面具有重要的作用[1 4 ] 。本实验将ＨＢＶ核心抗原与前Ｓ1抗原部分基因融合表达 ,并对其抗原性进行分析。材料和方法一、表达载体和菌株表达载体 ｐＥＴ 11ｄ和工程菌ＢＬ2 1为Ｎｏｖａｇｅｎ公司产品。二、试剂Ｋｌｅｎｏｗ酶、Ｔ4ＤＮＡ连接酶为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品 ,内切酶Ｂａｍ…     

隐孢子虫对小鼠树突状细胞功能的影响

目的探索隐孢子虫对小鼠树突状细胞功能的影响。方法采用磁珠分离小鼠的树突状细胞，将树突状细胞与活体隐孢子虫一起培养，用流式细胞仪观察树突状细胞表面标记的变化，并进一步观察树突状细胞产生各种细胞因子的情况。结果活体隐孢子虫能直接感染小鼠树突状细胞，并使其细胞表面高表达CD40、CD80、CD86，同时产生大量的IL-6、IL-12及TNF-α等细胞因子。结论树突状细胞参与了隐孢子虫宿主免疫过程，并在宿主对虫体的免疫反应中起重要作用。