哮喘小鼠气道上皮杯状细胞增生模型

目的建立一种新的小鼠气道上皮杯状细胞增生和粘液高分泌模型。方法用卵白蛋白加氢氧化铝凝胶皮下注射致敏小鼠,d 10腹腔注射重复致敏1次,然后从第1次致敏后d 15~21每天用卵白蛋白雾化吸入攻击1次。检测AB-PAS染色的支气管上皮杯状细胞数目,HE染色的肺组织嗜酸性粒细胞浸润和支气管灌洗液中的炎症细胞数目,并用已知有效药物和未知受试药物验证此模型。结果卵白蛋白致敏和攻击的小鼠呈现明显的支气管上皮杯状细胞增生,管腔内黏液增多,肺组织嗜酸性粒细胞浸润和支气管灌洗液中的炎症细胞数目增加,这些病理改变可被地塞米松和小鼠IL-12质粒抑制。结论这一模型有助于筛选抗黏膜高分泌的新药和研究气道黏膜高分泌的病理机制。     

吡拉米司特在大鼠急性肺损伤模型中降低PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡有关

目的观察PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡在脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤模型(ALI)中相互关系,探讨选择性磷酸二酯酶4抑制剂吡拉米司特(piclamilast)对ALI的作用及机制。方法脂多糖(LPS)诱导大鼠ALI模型,设对照组、模型组、吡拉米司特组(1、3、10mg.kg-1)和地塞米松组(1mg.kg-1),常规细胞形态学检测肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中中性粒细胞的浸润情况,比色法测定BALF中超氧阴离子自由基(O2.)和中性粒细胞髓过氧化酶(MPO),ELISA法检测肺组织中TNF-α和IL-10含量,高效液相(HPLC)法测定肺组织中PDE4活性。结果①吡拉米司特(1、3、10mg.kg-1)灌胃给予能够抑制BAL中MPO、O2.的增加,改善LPS诱导的大鼠ALI模型BALF中的炎症细胞聚集和肺水肿程度,②吡拉米司特可抑制LPS诱导的大鼠ALI肺组织TNF-α上升(P<0.05～0.01),并能明显提高LPS引起的大鼠ALI肺组织IL-10分泌下降,③大鼠ALI模型肺组织中PDE4活性明显上升(P<0.01),吡拉米司特预处理可抑制PDE4活性的上升,而且其对PDE4活性抑制性变化与TNF-α/IL-10比值的变化基本一致。地塞米松1mg.kg-1也能降低TNF-α和升高IL-10水平,调节TNF-α/IL-10平衡关系,但DXM不能抑制PDE4活性的升高。结论TNF-α/IL-10可能是ALI病理生理学的一对重要的平衡性细胞因子。吡拉米司特可能通过抑制PDE4活性,调节TNF-α/IL-10平衡改善LPS诱导的大鼠ALI。     

咯利普兰对大鼠哮喘模型肺组织磷酸二酯酶及IL-4的影响

目的为阐明大鼠哮喘模型肺组织cAMP-PDE活性升高的相关原因和意义,研究了咯利普兰(rolipram,Rol)对大鼠哮喘模型的肺功能、肺组织中磷酸二酯酶(PDE)活性和IL-4含量的影响。方法采用卵白蛋白致敏后重复抗原攻击制备哮喘模型,测定肺功能,肺组织cAMP-PDE活性、PDE4的活性和IL-4含量,分类计数外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞。结果哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE及PDE4活性与正常对照组相比均升高(P<0·05),致敏后重复抗原攻击的哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE活性中PDE4活性比例较高,约占70%。Rol剂量依赖性增加哮喘大鼠肺顺应性,降低肺阻力,抑制增加的哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE和PDE4活性,降低肺组织IL-4含量。以Rol(1mg·kg-1,po)作用最明显。哮喘大鼠的肺组织cAMP-PDE和PDE4活性与IL-4存在相关性(P<0·05)。此外,Rol还能明显抑制哮喘大鼠BALF中和外周血炎症细胞数目,明显抑制BALF中多形核细胞及血中EOS的比例(P<0·05)。结论致敏后重复抗原攻击的哮喘大鼠肺功能明显恶化,肺组织IL-4含量、cAMP-PDE活性明显升高,其中cAMP-PDE活性中以PDE4为主,且cAMP-PDE活性、PDE4活性与肺组织中IL-4密切相关。Rol能有效抑制哮喘大鼠肺组织cAMP-PDE及PDE4活性的升高,降低IL-4含量,改善肺功能。     

大鼠急性肺损伤模型肺组织中磷酸二酯酶4活性的变化

目的观察磷酸二酯酶4(PDE4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和炎症细胞浸润在急性肺损伤过程中的变化规律,以及它们之间的相关性。方法脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI),高效液相法(HPLC)测定肺组织PDE4活性、ELISA法检测TNF-α含量,常规细胞形态学检测中性粒细胞在支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中的浸润变化。结果气道内滴入LPS,1 h后肺组织中PDE4活性开始增加,6 h达到峰值,与对照组相比(P<0.01),24 h后开始回落。支气管肺泡灌洗液(BALF)的白细胞总数和中性粒细胞数的变化与PDE4活性变化相关(r=0.83,P<0.05),2 h后开始增加,6 h达到峰值,48 h后回落接近滴入LPS前。肺组织匀浆的TNF-α含量在LPS滴入后迅速上升,2 h达到峰值,24 h后开始回落,其上升先于前两者。在LPS滴入6 h测定抗超氧阴离子自由基(O.2)和中性粒细胞髓过氧化酶(MPO)水平也明显上升。给予PDE4抑制剂RP73-401(piclamilast)后,肺组织中PDE4活性与TNF-α含量均下降,肺部炎症也得到改善,与损伤后6 h相比差异有显著性(P<0.01)。结论气道内滴入LPS后肺组织中PDE4活性迅速上升,并与TNF-α上升有一定的相关性,运用PDE4抑制剂后,二者水平均明显降低。PDE4和TNF-α升高可能诱导中性粒细胞聚集和过氧化反应的因素,提示PDE4抑制剂可能是一个治疗ALI的重要靶点。     

地西泮与咪达唑仑对离体大鼠子宫平滑肌收缩功能的影响

目的比较苯二氮艹卓类药物(BDZ)地西泮和咪达唑仑对孕和未孕大鼠子宫平滑肌收缩的影响是否不同。方法分离、制备孕和未孕SD大鼠子宫平滑肌条,采用累积给药法在浴槽内加入地西泮和咪达唑仑0.01~300μmol.L-1,MedLab生物信号采集系统记录给药前后子宫平滑肌收缩幅度和频率。结果地西泮和咪达唑仑对孕和未孕大鼠子宫平滑肌的收缩幅度均呈浓度依赖性抑制,且咪达唑仑的抑制作用明显较地西泮强。对于未孕大鼠,地西泮和咪达唑仑抑制子宫平滑肌收缩的IC50分别为280.6和1.1μmol.L-1。对于孕大鼠,地西泮与咪达唑仑抑制子宫平滑肌收缩的IC50分别为52.2和28.2μmol.L-1。地西泮对子宫平滑肌收缩频率的影响较小,而咪达唑仑在高浓度时能完全抑制子宫平滑肌的收缩。结论咪达唑仑对未孕及孕大鼠子宫平滑肌收缩幅度和频率的抑制作用强于地西泮,尤其是对未孕大鼠子宫平滑肌,为临床选择BDZ药物用于分娩提供了实验依据。     

肺泡上皮细胞在肺纤维化中的作用及机制研究进展

肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)是肺组织的结构细胞,在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)发生和发展的过程中起着重要的作用。AEC损伤和凋亡是促进和引起肺纤维增生的原因之一,但并不是PF的必需因素,完整的AEC转染TGF-β1基因后也能诱导PF的发生。体外研究发现,AEC在TGF-β1的诱导下可以向间质细胞转化,但其在PF中所起的作用及分子机制还有待进一步阐明。因此,AEC在PF中的作用与上述因素及其它细胞尤其是成纤维细胞之间的相互作用有关。     

隐孔菌发酵物对离体中性粒细胞释放白三烯B4和C4及D4的抑制作用

目的 :探讨隐孔菌发酵物 (Cryptoporus volvatus ferment substance,CVFS)对中性粒细胞释放白三烯的影响。方法 :给大鼠腹腔注射糖原诱导中性粒细胞聚集 ,16 h后收集腹腔灌洗液 ,分离中性粒细胞 ,以 calciumionophore A2 3187刺激离体中性粒细胞释放白三烯 ,再用 HPLC法测定中性粒细胞中白三烯 (L T) B4、LTC4和LTD4的含量。结果 :CVFS 0 .2 5、1、4 mg· L-1呈浓度依赖抑制中性粒细胞释放 L TB4、LTC4和 LTD4,对 L TB4抑制率分别为 2 7.4 %、5 4.2 %和 78.8% ;对 LTC4抑制率分别为 6 5 .1%、74 .3和 79.0 % ;对 LTD4抑制率分别为5 5 .6 %、6 0 .9%和 72 .8%。与生理盐水对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :CVFS抑制中性粒细胞释放LTB4、L TC4和 L TD4可能是其抗炎平喘作用机制之一。     

来氟米特对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:研究来氟米特活性代谢物A771726对肝星状细胞(HSC)增殖和胶原合成的影响.方法:用链蛋白酶和胶原酶原位肝灌注、Nycodenz密度离心法分离大鼠HSC和Kupffer细胞,制备Kupffer培养上清液(KCCM),并以不同浓度、不同培养时间的CCl4损伤的KCCM作为刺激因素观察了A771726对HSC增殖(3H-TdR掺入法)和胶原合成(3H-Pro掺入法)的影响.ELISA法测定KCCM内TGF-β、TNF-α和IL-1含量.结果:HSC和Kupffer细胞得到较好的分离.CCl4损伤的KCCM显著增加HSC增殖和胶原合成,并且稀释度为1:2的KCCM在培养7 d时,对HSC增殖和胶原合成的刺激作用明显.A771726(0.001～10 μmol/L)对CCl4损伤的KCCM刺激HSC增殖和胶原合成有不同程度的抑制作用,并且A771726(0.001～10 μmol/L)明显抑制CCl4损伤KCCM内升高的TGF-β、TNF-α和IL-1水平.结论:CCl4损伤的KCCM可明显刺激HSC增殖和胶原合成,而A771726对此有明显的抑制作用,并且与其抑制致HSC激活的因子如TGF-β、TNF-α和IL-1分泌有关.     

咯利普兰逆转豚鼠离体气管对沙丁胺醇的耐受性

本研究目的旨在观察ＰＤＥＩＶ抑制剂咯利普兰对沙丁胺醇（ＳＢ）耐受性的影响。用豚鼠离体气管标本，预先接触ＳＢ１μｍｏｌ·Ｌ－１，１ｈ可使ＳＢ对抗乙酰甲胆碱气管收缩作用的剂量反应曲线右移５倍，最大松弛率下降３０％，形成ＳＢ气管松弛作用的耐受性。磷酸二酯酶（ＰＤＥ）ＩＶ抑制剂咯利普兰能翻转ＳＢ气管松弛作用的耐受性，但ＰＤＥＩＩ抑制剂氰胍哒嗪则不能。虽然蛋白合成抑制剂环己酰亚胺对ＳＢ耐受性无预防作用，但上述结果仍提示ＳＢ气管松弛作用的耐受性可能与ＰＤＥＩＶ活性的增高有关。     

麻黄碱与总皂苷对豚鼠气管平滑肌松弛的协同作用

目的　探讨麻黄碱与总皂苷在平喘作用方面有无协同作用。方法　将麻黄碱与总皂苷分成麻黄碱 +总皂苷组、总皂苷组和麻黄碱组进行离体豚鼠气管平滑肌松弛作用强度比较。结果　麻黄碱 +总皂苷组直接松弛豚鼠离体气管平滑肌的作用强度是麻黄碱组的 3 5倍 (P <0 0 5 ) ,总皂苷组无作用 (P >0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷组对氨甲酰胆碱(carbamylcholine,CCH)引起气管平滑肌收缩反应的解痉强度与麻黄碱组相同 ,但两者都比总皂苷组强 (P <0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷、麻黄碱和总皂苷组预先处理气管平滑肌均呈浓度依赖抑制CCH收缩反应 ,三者之间的作用强度无差异。结论　总皂苷对麻黄碱在直接松弛气管平滑肌和抑制CCH引起的气管平滑肌收缩方面具有明显的协同作用 ,但在解痉方面的协同作用不明显