骨髓干细胞移植对实验性大鼠急性心肌梗死的影响*

【目的】通过同种异体大鼠骨髓干细胞（BMSCs）移植，观察其对实验性大鼠急性心肌梗死面积的影响。【方法】清洁级Wistar雄性大鼠无菌分离骨髓干细胞；将36只同种雄性大鼠随机分为模型组、对照组和细胞移植组。结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型。细胞移植组在心肌梗死周边分阴点注射BMSCs细胞悬液，对照组心肌梗死区周边注射等容积BMSCs完全培养液。通过心肌组织硝基阴氮唑蓝（N-BT）染色，血中血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平检测，观察BMSCs移植对上述各指标的影响。【结果】细胞移植组能减少心肌梗死面积，降低血中CK、LDH、MDA水平，提高血中SOD水平。【结论】BMSCs移植对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致的急性心肌梗死具有保护作用。     

5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化

目的:目前在5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化领域中,对用于诱导的细胞代次选择不一。实验选择第2,9代骨髓间充质干细胞,观察比较经5-氮胞苷体外诱导后其各自向心肌细胞分化过程中心肌特异性肌钙蛋白cTnT和早期分化基因的表达。方法:实验于2005-07/2007-07在天津中医药大学病理三级实验室完成。①实验方法:清洁级Wistar雄性大鼠,脱颈处死后取双侧股骨、胫骨,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞进行原代培养。去掉原代细胞瓶内的培养液,D-Hank’s液冲洗去除血清,胰蛋白酶 乙二胺四乙酸消化,制备单细胞悬液,按1∶3传代。用10μmol/L的5-氮胞苷分别诱导第2,9代骨髓间充质干细胞,诱导4周,并设立未加诱导剂的阴性对照。②实验评估:倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况及形态变化;免疫组织细胞化学法检测心肌特异性肌钙蛋白cTnT的表达,胞浆出现棕黄色颗粒状物质为阳性;嵌合荧光法检测心肌早期基因NKx2.5、GATA-4、Desmin、α-actin的相对表达量。结果:①细胞形态学观察:5-氮胞苷诱导前细胞生长较快,诱导后死亡细胞较多且生长较慢。诱导后2,3,4周,第9代骨髓间充质干细胞无论在形态和细胞活力方面均优于第2代。②心肌特异性肌钙蛋白cTnT的表达:5-氮胞苷诱导4周后,第9代骨髓间充质干细胞心肌特异性肌钙蛋白cTnT阳性表达率明显高于第2代(22.42±9.97),(11.22±5.62)%,P<0.05,阴性对照无阳性表达。③心肌早期基因的表达:反转录-聚合酶链反应结果显示,5-氮胞苷诱导4周后,第9代骨髓间充质干细胞心肌早期基因NKx2.5、GATA-4、Desmin、α-actin的相对表达量均明显高于第2代(P<0.05)。结论:经5-氮胞苷诱导后,骨髓间充质干细胞表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT及4种心肌早期基因,证实其能够向心肌细胞分化,且传至第9代时向心肌细胞分化的能力要强于第2代。     

缺血性脑损伤大鼠脑组织病理形态改变及丹酚酸B的干预作用

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织病理改变及丹酚酸B的保护作用。方法 健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、丹酚酸B中剂量组和丹酚酸B高剂量组,每组8只。前两组蒸馏水灌胃,后两组丹酚酸B 96 mg/kg和192 mg/kg灌胃,1次/d,连续7 d。末次给药后1 h除假手术组外其他3组大鼠线栓法制备大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h。实验结束时HE染色观察大鼠脑组织病理形态,并检测缺血面积,TUNEL法检测凋亡细胞,计算细胞凋亡指数。结果 与假手术组比,模型组大鼠损伤侧脑组织出现灶状缺血区,组织结构紊乱,间质水肿,神经元变性、坏死,细胞凋亡指数增加。与模型组比较,丹酚酸B中、高剂量组脑组织缺血区结构紊乱及间质水肿减轻,坏死细胞明显减少,细胞变性程度减轻,缺血面积分别减小12%和14%（P<0.01）,细胞凋亡指数分别下降16.0%和17.3%（P<0.01）,但无剂量依赖关系。结论 丹酚酸B对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织形态具有保护作用。     

心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型MMP-2、TIMP-2表达的影响

[目的]探讨心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。[方法]通过喂养高脂饲料和主动脉球囊内皮拉伤术复制动脉粥样硬化易损斑块模型,实验分为模型组,假手术组,心脑血脉宁组,历时15周。处死后,取腹主动脉行苏木精-伊红(HE)染色,观察镜下病变,计数斑块破裂数,免疫组化方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白含量。[结果]1)HE观察:假手术组镜下形态结构完整,模型组斑块中心可见大量脂核,斑块表面覆盖纤维帽,在斑块肩部可见残存泡沫细胞和大炎细胞浸润。心脑血脉宁组介于两者之间。2)免疫组化结果:与假手术组相比,模型组MMP-2、TIMP-2蛋白含量明显升高,差异有显著性(P0.01);心脑血脉宁组MMP-2与模型组比较表达降低,差异有显著性(P0.01),而TIMP-2含量与模型组相比有降低趋势,但无统计学差异(P0.05);心脑血脉宁组能够有效降低两者比值,与模型组相比差异有显著性(P0.01)。[结论]心脑血脉宁干预家兔动脉粥样硬化易损斑块模型,能减少斑块破裂,其机制可能与降低斑块MMP-2含量以及调节MMP-2与TIMP-2比值有关。     

心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型MMP-2、TIMP-2表达的影响

[目的]探讨心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。[方法]通过喂养高脂饲料和主动脉球囊内皮拉伤术复制动脉粥样硬化易损斑块模型,实验分为模型组,假手术组,心脑血脉宁组,历时15周。处死后,取腹主动脉行苏木精-伊红(HE)染色,观察镜下病变,计数斑块破裂数,免疫组化方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白含量。[结果]1)HE观察:假手术组镜下形态结构完整,模型组斑块中心可见大量脂核,斑块表面覆盖纤维帽,在斑块肩部可见残存泡沫细胞和大炎细胞浸润。心脑血脉宁组介于两者之间。2)免疫组化结果:与假手术组相比,模型组MMP-2、TIMP-2蛋白含量明显升高,差异有显著性(P<0.01);心脑血脉宁组MMP-2与模型组比较表达降低,差异有显著性(P<0.01),而TIMP-2含量与模型组相比有降低趋势,但无统计学差异(P>0.05);心脑血脉宁组能够有效降低两者比值,与模型组相比差异有显著性(P<0.01)。[结论]心脑血脉宁干预家兔动脉粥样硬化易损斑块模型,能减少斑块破裂,其机制可能与降低斑块MMP-2含量以及调节MMP-2与TIMP-2比值有关。     

电针对糖尿病肌萎缩大鼠骨骼肌及血糖的影响

目的:探究电针对糖尿病肌萎缩大鼠骨骼肌及血糖的作用。方法:从40只SD大鼠中随机选取10只作为对照组,不进行任何干预;其余30只采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg制备糖尿病(DM)模型,再运用右后肢血管结扎术制备肌萎缩模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和电针组,各10只(排除造模不成功及死亡大鼠10只)。选取右侧"胰俞""肾俞""足三里"及"三阴交"对电针组大鼠进行电针(疏密波,2 Hz/15 Hz)干预,每次20 min,每日1次,持续3周。电针干预前后,目内眦取血并采用"葡萄糖氧化酶-过氧化物酶"法检测各组大鼠空腹血糖水平,ELISA法检测血清胰岛素含量;干预结束后,HE染色法观察各组大鼠右后肢缺血骨骼肌肌肉形态,实时定量PCR(real-time PCR)法检测右后肢缺血骨骼肌肌肉组织中骨骼肌特异性泛素连接酶E3——肌肉萎缩盒F(MAFbx)及肌肉环状指-1(Mu RF1),叉头框转录因子O3a(FOXO3a)m RNA的表达。结果:干预前,模型组与电针组大鼠体质量均低于对照组(P<0.01);干预后,对照组大鼠体质量升高,模型组和电针组大鼠体质量均降低(P&...     

诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的 观察乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB 、5-氮胞苷(5-aza)及SalB联合5-aza体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制.方法 分离培养及鉴定大鼠MSCs,培养乳鼠心肌细胞,收集条件培养液对其进行分组诱导:①SalB(终浓度为250 μg/L),②5-aza组(终浓度为10 μg/L),③SalB联合5-aza组(终浓度分别为250 μg/L与10 μmol/L),④乳鼠心肌细胞条件培养液,⑤未加诱导剂的阴性对照组.选取MSCs进行诱导,诱导周期为4 w.倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况及形态变化,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)表达,实时荧光定量RT-PCR法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4 mRNA的相对表达量.结果 细胞形态学显示,诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示,诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT,与5-aza组相比,SalB组和条件培养液两组蛋白表达较低,SalB联合5-aza组蛋白表达升高;实时荧光定量RT-PCR结果显示除阴性对照组外,其他四组表达心肌分化早期基因,SalB联合5-aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他三组.结论 SalB联合5-aza诱导MSCs表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT;上调心肌早期基因NKX2.5、GATA-4mRNA的表达,证实其能够向心肌细胞分化能力;条件培养液不能上调心肌细胞的早期基因和蛋白,不能诱导其分化.     

呋塞米联合血管活性药物在心肾综合征中应用效果的系统评价

目的系统评价呋塞米联合血管活性药物在心肾综合征中的应用效果。方法计算机检索PubMed、Embase、CENTRAL、Web of Science、CBM、CNKI和万方数据库中关于呋塞米联合其他药物治疗心肾综合征的随机对照试验。依据纳入排除标准选取文献,采用RevMan5.3软件进行meta分析。结果共纳入10个随机对照实验,包括934例心肾综合征患者,观察组给予的药物干预为低剂量呋塞米联合低剂量多巴胺以及其他治疗心衰的药物。Meta分析结果显示,观察组治疗方案能降低Ⅰ、Ⅱ型心肾综合征患者血肌酐量[MD=-36.00,95%CI(-39.75,-32.24),P0.05],增加Ⅱ型心肾综合征患者左心室射血分数值[MD=5.47,95%CI(4.69,6.25),P0.05],增加Ⅱ型心肾综合征患者6 min步行距离[MD=36.22,95%CI(29.24,43.20),P0.05],有较好的临床疗效[RR=1.27,95%CI(1.08,1.49),P0.05]。结论低剂量呋塞米联合多巴胺治疗能有效改善心功能和肾功能,对Ⅱ型心肾综合征有较好治疗效果,对Ⅰ型心肾综合征有一定效果但证据不足,对Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型心肾综合征效果尚不能确定,有待进一步验证。     

RP-HPLC法同时测定芫花中芹菜素、羟基芫花素、芫花素的含量

目的 对芫花中芹菜素(Ⅰ)、3'-羟基芫花素(Ⅱ)和芫花素(Ⅲ)3种黄酮苷元进行含量测定.方法 采用反相高效液相色谱法,使用大连依利特Hypersn C18柱250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(60:40),流速1.0 mL·min-1,检测波长340nm,柱温25℃.结果 化合物Ⅰ～Ⅲ的线性范围(n=6)依次为0.1～5.0μg(r=0.9999).0.1～1.0 μg(r=0.9999),0.1～5.0μg(r=0.9999).化合物Ⅰ～Ⅲ平均回收率(n=6)分别为99.6%、102.8%,100.2%;RsD分别为1.8%、1.5%,1.1%.结论 本方法可准确地同时测定芫花中3个黄酮苷元的含量,方法精密度高、简便、快速.     

丹酚酸B对ApoE基因敲除糖尿病小鼠动脉粥样硬化的防治作用

目的 观察丹酚酸B(SB)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)糖尿病小鼠的动脉粥样硬化在预防和治疗两方面的作用.方法 选取50只8周龄雌性ApoE-/-小鼠,腹腔注射链脲佐菌素200 mg/kg联合高脂饲料喂养12w,将血糖水平＞11.1 mmol/L的40只小鼠随机分为模型组、SB高剂量组、SB低剂量组与洛伐他汀组.8 w后,采用全自动生化分析仪检测空腹血糖(FPG)及血脂水平;主动脉冰冻切片行苏丹Ⅲ染色后,对各个切面的动脉粥样硬化斑块进行Image-Pro Plus 6.0图像分析,测量斑块面积并计算校正斑块面积.结果 SB高剂量组及洛伐他汀组与模型组比较FPG和总胆固醇(TC)水平明显降低;SBW低剂量组和SB高剂量组与模型组比较血清甘油三酯(TG)水平明显降低;治疗组与模型组比较血清低密度脂蛋白(LDL)水平明显降低;治疗组与模型组比较斑块面积明显降低;尤以SB高剂量组与模型组显著.结论 SB能够降低ApoE-/-糖尿病小鼠血糖和血脂水平,预防并减轻动脉粥样硬化斑块的形成.