肺腺癌EGFR基因19、21号外显子突变分析

目的 探讨肺腺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因19、21号外显子突变特点及其临床意义.方法 对肺腺癌手术组织提取DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)和直接测序法检测EGFR基因19号与21号外显子突变状态,分析与临床病理参数之间的相关性.结果 在54例被测肺腺癌肿瘤中,发现29例患者存在EGFR基因突变,占53.7％ (29/54).其中,19号外显子突变13例(24.1％),均为缺失突变;21号外显子突变病例为16例(29.6％),均为L858R点突变.高、中分化肿瘤的EGFR突变率均达60％以上,明显高于低分化肿瘤突变率44％.结论 肺腺癌存在较高频率的EGFR基因突变,在高、中分化肿瘤的突变率有高于低分化肿瘤的趋势.     

综合性护理对老年睡眠障碍患者的效果分析

目的：分析综合性护理对老年睡眠障碍患者的效果。方法：选取2021年1月—2022年6月于我院治疗的老年睡眠障碍患者93例,按照信封法分为对照组46例和观察组47例,对照组采用常规护理方法,观察组采用综合性护理方法。对比两组睡眠质量、睡眠改善疗效、生活质量、焦虑及抑郁程度、护理满意度。结果：干预后,观察组PSQI各维度评分及总分均低于对照组,睡眠改善总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预前两组的生活质量(生理、心理、环境及社会关系)4个维度评分、焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分比较差异无统计学意义(P>0.05),干预后两组生活质量各维度评分均高于干预前,且观察组评分高于对照组,而SAS与SDS量表评分均下降,且观察组评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。护理后观察组患者的护理总满意度明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：综合性护理能更好地帮助老年睡眠障碍患者改善睡眠质量和生活质量,减轻焦虑及抑郁程度,具有较高的护理满意度。     

AHNAK2蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的： 探讨AHNAK2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达情况及其对预后判断的意义。方法：应用组织微阵列免疫组织化学技术(TMA-IHC)研究129例食管鳞状细胞癌中AHNAK2蛋白的表达情况及其与临床病理指标之间的相关性。结果：AHNAK2蛋白在食管鳞癌组织中的表达率显著高于癌旁组织(P = 0.023),不表达、弱表达、中度表达和强表达的肿瘤比例分别为24.8% (32/129)、28.7%(37/129)、17.0%(22/129)和29.5%(38/129),且随着分化程度的升高,该蛋白的表达率也随之增高(P = 0.004)。Kaplan-Meier生存分析显示,AHNAK2蛋白表达阴性患者术后生存时间短于表达阳性的患者(P = 0.027)。通过多因素回归分析发现,AHNAK2蛋白是一个独立预后因素(P = 0.018,HR = 0.461,95% CI：0.243～0.877)。结论：AHNAK2蛋白在食管鳞癌中表达上调,且与分化程度相关,有可能作为食管鳞癌预后判断的分子标志物。     

可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立

目的： 建立可条件性诱导PLK1-shRNA稳定表达的食管癌细胞株,为深入研究PLK1在食管癌发生发展中的作用及分子机制提供细胞模型。方法：合成PLK1-shRNA寡核苷酸,退火后连接到慢病毒表达载体pLKO-Tet-On并转化至感受态细胞Stbl3,利用菌落PCR和测序分析鉴定阳性重组子。用pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清,感染食管癌细胞KYSE510,利用嘌呤霉素筛选可诱导PLK1-shRNA稳定表达的细胞株。采用qRT-PCR和Western blot检测强力霉素(Dox)诱导PLK1-shRNA表达的效率。结果：菌落PCR和测序分析结果显示,pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒中PLK1-shRNA的序列及插入位点正确。包装、收获病毒并感染KYSE510细胞后,筛选获得了具有嘌呤霉素抗性的稳定细胞株KYSE510-shPLK1-Tet-On。qRT-PCR和Western blot的检测结果显示,0.1 μg/mL Dox即可显著下调KYSE510-shPLK1-Tet-On细胞中PLK1的表达。结论：成功构建了诱导型PLK1-shRNA慢病毒表达载体,并筛选获得了可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株,为进一步探讨PLK1异常表达与食管癌发生发展的关系提供了理想的细胞模型。     

p-mTOR蛋白在结直肠癌组织中的表达及患者预后判断中的价值

目的：检测p-mTOR（Ser2448，活化形式的mTOR）蛋白在结直肠癌中的表达变化并评价其用于判断患者预后的价值。方法：采用组织芯片-免疫组织化学染色技术，检测441例结直肠癌及其配对癌旁正常组织中p-mTOR的表达，收集患者至少5年的随访信息，并分析其表达水平与临床病理指标及患者预后的相关性。结果：免疫组织化学染色结果显示p-mTOR在癌旁正常结直肠上皮细胞中阳性表达率为4%（17/441），而在结直肠癌组织中阳性表达率为58%（254/441），两者间差异显著（P < 0.01）。统计分析结果显示，在结直肠癌组织中，p-mTOR的表达水平与肿瘤分级、淋巴结转移、远处转移及病理分期显著正相关（P均 < 0.05）。同时，p-mTOR的表达水平与结直肠癌患者的预后显著相关（P均 < 0.05），p-mTOR高表达患者的无病生存期和总生存期分别为52和60个月，明显短于p-mTOR低表达患者的71和70个月。Cox多因素分析结果显示p-mTOR表达水平为结直肠癌患者的独立预后因素。结论：p-mTOR在结直肠癌组织中表达上调，其高表达与结直肠癌患者预后不良相关，有可能作为预测结直肠癌患者术后死亡及复发转移风险的候选分子标志物。     

p62蛋白在食管鳞癌细胞中核浆易位的机制研究

目的：探讨p62蛋白在食管鳞癌细胞中核浆易位的影响因素及其可能机制。方法：采用核输出抑制剂KPT330处理食管鳞癌细胞KYSE70、KYSE150和KYSE510后,利用免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜分别观察抑制剂处理前后食管鳞癌细胞中p62蛋白的定位情况。利用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）磷酸化蛋白质组技术鉴定食管鳞癌细胞中p62蛋白的磷酸化位点。定点突变技术用于构建p62不同磷酸化状态的突变体。通过免疫共沉淀实验（Co-IP）、邻位连接实验（PLA）分析p62与GSK-3β的相互作用情况。结果：使用核输出抑制处理后,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察发现,p62积聚在细胞核中。质谱鉴定结果显示,食管鳞癌细胞中p62蛋白存在T269/S272/S328/S332这4个位点的磷酸化,进一步发现T269/S272位点磷酸化、且同时S328/S332去磷酸化可使胞浆中的p62转移至细胞核中。Co-IP和PLA实验结果显示,p62与GSK-3β存在直接的相互作用。结论：食管鳞癌细胞中p62的核浆易位与其S328/S332磷酸化状态相关,且可能受GSK-3β激酶调控。     

79例中国人结直肠癌 APC 基因突变分析

目的：研究中国人结直肠癌中 APC 基因的突变频率及分布特点。方法应用聚合酶链反应（ PCR ）产物直接测序法,对79例中国结直肠癌患者肿瘤标本中 APC 基因突变密集区（ MCR ）中的突变进行检测,并对该基因突变与相关临床病理参数之间的关系进行分析。结果在79例肿瘤标本中检出 APC 基因的总突变率为31.6％（25／79）。点突变频率为20.3％（16／79）,其中有12例无义突变及4例错义突变;另有11％（9／79）的突变是由缺失或插入导致的移码突变。12例无义突变及9例移码突变导致截短突变（27％）,占总突变率的84％。 APC 基因突变表现为区域密集,密码子1281-1352和1411-1465为突变频率较高的2个区段,其突变率分别为16.5％和15.2％。突变频率较高的位点为密码子1450、1421、1306和1286。统计分析结果显示,癌组织中 APC 基因突变与患者的年龄、性别、肿瘤位置、浸润深度、淋巴结转移情况、分期、大体分型和组织分化程度无关。结论中国人结直肠癌中存在较高频率的 APC 基因突变,截短突变为其主要突变类型。同时,本研究在 APC 基因的 MCR 中发现2个突变热点区及4个潜在突变热点。     

食管鳞癌中SERPINB5表达降低的作用机制及其临床意义

目的：探索SERPINB5在食管鳞癌中的表达变化、作用机制及其临床意义。方法：利用癌症基因组图谱（TCGA）和基因表达库（GEO）数据库的RNA表达数据、以及临床标本的Western blot分析,研究食管鳞癌组织中SERPINB5的mRNA和蛋白表达情况,并分析其表达水平与临床病理指标的相关性;通过细胞增殖和克隆形成实验,设置亲本组、空载组和SERPINB5过表达组,在体外检测SERPINB5对食管癌细胞增殖的影响;通过裸鼠移植瘤实验,设置空载组和SERPINB5过表达组,在体内检测SERPINB5对食管鳞癌细胞成瘤能力的影响;利用Western blot检测该分子调控的下游通路及关键分子;进一步利用靶向抑制实验,探讨SERPINB5对食管鳞癌治疗的可能意义。结果：与正常食管上皮相比,食管鳞癌组织中SERPINB5的mRNA和蛋白水平均明显降低（P<0.01）,且其mRNA低表达与肿瘤低分化（P=0.004）和较晚的分期（P=0.037）显著相关。体外及体内实验结果显示,与对照组比较,SERPINB5过表达可显著降低食管鳞癌细胞的增殖和集落形成、以及裸鼠成瘤能力（P<0.05）。分子水平检测表明,过表达SERPINB5显著降低AKT和mTOR的磷酸化水平。通过靶向抑制实验,观察到SERPINB5过表达可显著增强食管鳞癌细胞对Aurora A抑制剂Alisertib和mTOR抑制剂Everolimus的敏感性（P<0.01）。结论：SERPINB5在食管鳞癌中的表达降低,提高SERPINB5的表达水平,尤其是与Aurora A或mTOR抑制剂的联合使用,可作为食管鳞癌潜在的治疗策略。