低剂量阿霉素富集肾上腺皮质癌干细胞的实验研究

目的:探讨肾上腺皮质癌干细胞的有效富集模式和其可能的表面标志物.方法:构建裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的动物模型,富集人肾上腺皮质癌细胞系SW-13的干细胞,并进行富集效率检测("悬浮球"形成试验;平板克隆形成实验).流式细胞术检测肿瘤标志物组合CD184+CD338+,研究SW-13干细胞可能的表面标志物.结果:裸鼠皮下移植瘤成瘤率为100%.空白对照组及各代SW-13裸鼠皮下移植瘤细胞的"悬浮球"形成率、平板克隆形成率比较差异均有统计学意义(P<0.05),富集第2代细胞>第1代细胞>空白对照组.流式细胞术检测富集第2代细胞的CD184+CD338+表达率较第1代细胞与空白对照组增高(P<0.05).结论:裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的富集模式,可有效富集肾上腺皮质癌SW-13干细胞样细胞.CD184+CD338+可作为肾上腺皮质癌SW-13干细胞的候选标志物组合.     

白细胞介素1β在胰岛β细胞损伤中的角色及其作用机制

胰岛β细胞功能损伤和或数量减少是导致糖尿病的主要原因,直接引起胰岛素分泌绝对或者相对不足,出现高血糖状态.糖尿病的发生和发展与炎症反应密切相关,细胞因子的过度生成或调节紊乱损伤胰岛β细胞功能.在这个过程中,白细胞介素1β(IL-1β)通过NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)等通路诱导β细胞凋亡,参与糖尿病的发病和发展.     

实验教学示范中心建设的研究与实践

以实验教学改革为先导,以综合能力、创新能力培养为目标,结合广西医科大学实验生理科学实验中心在创建省级实验教学示范中心中的实践,全面阐述了师资队伍、教学教改以及实验室软、硬环境等各方面建设的经验和成效。     

倒千里光碱对肝大部分切除小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

背景:目前大多数应用倒千里光碱造成肝损伤模型都是以大鼠为实验对象,有研究报道倒千里光碱并不能抑制小鼠肝细胞增殖,也有报道倒千里光碱对小鼠的肝细胞具有增殖抑制作用.目的:观察单纯肝脏大部分切除及其联合应用倒千里光碱致小白鼠对肝损伤后再生修复的影响.方法:40只C57BL/6J小鼠随机数字表法分为2组,每组20只.倒千里光碱/肝脏部分切除组:腹腔注射倒千里光碱溶液70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后肝脏2/3切除.肝脏部分切除组:腹腔注射生理盐水70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后行肝脏2/3切除.观察术后14 d肝脏大体结构恢复情况;苏木精-伊红染色观察术后第3,7天肝细胞损伤情况;BrdU染色观察术后第3天成熟肝细胞增殖情况;CK19和C-kit免疫组织化学方法观察术后第3,7,14天肝脏卵圆细胞增生情况.结果与结论:肝脏部分切除组14 d肝大体结构基本恢复正常,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝脏大小没有明显的恢复.苏木精-伊红染色可见倒千里光碱/肝脏部分切除组明显的肝细胞变性改变;BrdU染色肝脏部分切除组术后第3天有明显肝细胞增殖,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝细胞增殖很少.CK19和C-kit免疫组织化学结果显示倒千里光碱/肝脏部分切除组术后第3天开始肝脏主要通过肝卵圆细胞增生并逐渐向肝细胞和小胆管分化,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤.提示倒千里光碱可抑制小鼠肝脏损伤后肝细胞增殖再生.建立倒千里光碱/肝脏部分切除小鼠模型可诱导肝脏卵圆干细胞增生.     

牛磺酸对锰染毒大鼠纹状体活性钙调素含量的影响

目的利用锰染毒大鼠模型,探讨不同剂量牛磺酸对不同剂量锰染毒大鼠纹状体活性钙调素(CaM)含量的影响。方法选取SD健康雄性大鼠,随机分为对照组、锰染毒组(10、15、20 mg/kg 3个剂量组)和干预组(按正交实验设计分9个组)。干预时间结束后,比较各实验组大鼠纹状体活性钙调素含量的变化。结果10 mg/kg锰染毒组的活性CaM含量比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),各锰染毒组随着染毒剂量的加大,活性CaM含量呈下降趋势。干预组中的牛磺酸剂量为150、200 mg/kg时,对10 mg/kg锰染毒大鼠纹状体活性CaM含量有调节作用,差异有统计学意义(P<0.01)。结论锰可影响大鼠纹状体活性钙调素含量,且其影响与锰染毒剂量有关。     

芥酸乙醇酰胺的微型有机合成及其抑制BEL-7404细胞作用的研究

目的探讨合成芥酸乙醇酰胺对人肝癌细胞BEL-7404的抑制作用。方法 (1)运用微型有机合成技术,以芥酸、甲醇和乙醇胺为原料、金属钠为催化剂合成芥酸乙醇酰胺,采用硅胶柱层析分离纯化,红外光谱和核磁共振谱确证结构;(2)用芥酸乙醇酰胺作用于BEL-7404,用倒置显微镜镜下观察其对BEL-7404细胞的生长状况的影响,MTT法观察其抑制作用。结果合成出了芥酸乙醇酰胺并确证了其结构;芥酸乙醇酰胺浓度在50.0μg/ml以上时,能很明显的抑制BEL-7404的增殖,抑制率均高于40%,IC50为101.77588μg/ml。结论采用微型合成法能够快速、方便地合成出芥酸乙醇酰胺;芥酸乙醇酰胺对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。     

人血管内皮生长因子基因的克隆及在人成肌细胞中的表达

目的：克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段，构建pCDNA3/VEGF165真核表达载体，观察其在人成肌细胞中的表达。方法：采用逆录聚合酶链式反应（RT－PCR）技术，从人肝癌细胞株SMMC－7721中扩增出血管内皮生长因子VEGF165基因片段，通过DNA重组技术将该基因片段重组于pCDNA3真核表达载体上，构建成pCDNA3/VEGF165重组质粒，分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定，应用脂质体介导的基因转移技术将这一表达载体导入体外培养的人成肌细胞内，并用免疫组化法观察其表达。结果：经酶切电泳分析和DNA测序证实，本实验克隆的基因片段为人VEGF165cDNA，重组质粒pCDNA3/VEGF165转染人成肌细胞后，VEGF表达明显增高。结论：本实验成功地克隆了VEGF165基因，为进一步研究用肌肉细胞内转染VEGF基因的方法来恢复或增强放疗后组织的血管生成能力奠定了基础。     

探索性实验的实践与思考

当前国内的本科医学教育多强调课堂的知识讲授 ,往往难以脱离“满堂灌”的模式 ,而学生就机械的记笔记 ,考试就背笔记 ,使学生缺乏创新思维的教学环境和创新实践的机会。因此 ,以 1999年将生理学、药理学和病生实验课程合并为“实验生理科学”为契机 ,我们提出在实验课中实施探索性实验的教改措施 ,在实验课时让学生自己设计实验、小课题并且亲自实施 ,给学生提供创新思维和创新实践的机会。类似的做法在我院早期也有实施 ,但规模较小 ,此次大规模的在本科教学中开展探索性实验 ,对于教师与学生都是一次有益的尝试。1　探性实验设计思想与实施流程基础医学实验利于培养学生动手能力、观察能力以及逻辑思考和总结能力 ,但以往的实验课多侧重于验证性实验 ,这是理论课教学的基本现象和原理在实验课的重现 ,加之有具体、成熟的实验步骤 ,学生就有类似于“按菜谱做菜的感觉”,往往去追求所谓“标准的实验结果”,即与课本理论一模一样的实验现象和结论 ,更有甚者去编造实验数据 ,这是将实验课作为理论课的附庸的不利后果 ,因此 ,实验课从属地位不利于学生综合素质和创新能力的培养。对实验课的深层次思考 ,就有必要转变实验课的教学观念 ,以改变实验课教学...     

人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞来源的实验研究

目的观察人舌癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤新生血管内皮细胞的来源。方法通过皮下移植人舌癌Tca8113-M1细胞建立人舌癌裸鼠移植肿瘤模型,并于肿瘤生长至直径1cm时切除肿瘤,对移植瘤进行病理组织学观察,利用免疫组织化学方法检测移植瘤内新生血管内皮细胞的来源,抗体为鼠抗人单克隆抗体CD34和大鼠抗小鼠单克隆抗体CD34;并进行微血管密度（microvessel density,MVD）计数及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达检测。结果右腋窝皮下接种人舌癌Tca8113-M1细胞2周后,6只裸鼠的肿瘤直径都达到1cm以上,切片HE染色可见肿瘤组织病理形态为鳞状上皮细胞癌,MVD平均值为10．72±2．12,其中肿瘤新生血管内皮细胞大鼠抗小鼠CD34免疫组化结果是阳性,而鼠抗人CD34阴性。VEGF在6例移植瘤标本中均阳性表达,平均阳性率为（67±5．6）％。结论人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞主要来源于宿主裸鼠,并且可能与肿瘤细胞分泌的VFGE诱导有关。