PTEN反义寡核苷酸对辛伐他汀调控心肌细胞肥大的影响

目的:观察抑癌基因—PTEN的反义寡核苷酸对辛伐他汀调控心肌细胞肥大的影响。方法:应用图像分析系统及[3H]-亮氨酸掺入法分别测定心肌细胞表面积及蛋白合成速率,RT-PCR检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR和West-ern blot法检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果:辛伐他汀 PTEN反义链组心肌细胞表面积、[3H]-亮氨酸掺入率、ANP mRNA水平均明显高于辛伐他汀组(P<0.01),PTEN mRNA及蛋白表达水平明显低于辛伐他汀组(P<0.01)。结论:PTEN反义寡核苷酸能够抑制PTEN表达、部分逆转辛伐他汀对心肌细胞肥大的抑制作用。     

压力负荷高血压大鼠心肌组织TNF-α表达与活性氧的关系

目的： 动态观察压力负荷高血压大鼠心肌组织TNF-α表达变化，并探讨其与活性氧的关系。方法： 采用腹主动脉缩窄法建立压力负荷高血压大鼠模型，应用ELISA动态观察心肌组织内TNF-α蛋白表达变化。采用比色法和天狼猩红染色检测心肌组织胶原含量，应用Fenton原理和细胞色素C还原实验测定心肌内活性氧（ROS）水平和还原型辅酶II （NADPH）氧化酶活性。结果： 腹主动脉缩窄后1w，大鼠血压显著升高。2w后，左室重量指数、心肌组织胶原含量以及胶原容积分数明显升高（P<0.01），随着时间的延长，以上指标进一步升高。压力负荷4w时，大鼠心肌组织内TNF-α蛋白水平明显升高（P<0.01），相关分析显示，心肌组织TNF-α含量与胶原蛋白含量成正相关（R=0.656 P<0.01）。此外，压力负荷1w时，大鼠心肌组织ROS水平和氧化酶活性亦明显升高（P<0.01），并在2w达到最高水平，此后维持在较高水平。给予氮乙酰半胱氨酸（NAC，0.2g/kg/d，ig）干预后，压力负荷大鼠心肌组织内TNF-α蛋白水平明显下降（P<0.01），左室重量指数、心肌组织胶原含量以及胶原容积分数亦明显降低（P<0.01），结论：压力负荷可呈时间依赖性诱导心肌组织内TNF-α表达增加，参与心肌肥厚的发展；心肌组织内ROS水平的升高是压力负荷高血压大鼠心肌组织内TNF-α表达的重要分子机制之一。     

辛伐他汀对鼠心脏成纤维细胞DNA合成的影响

目的探讨辛伐他汀(Sim)对新生SD大鼠心脏成纤维细胞(CFs)DNA合成的影响及甲羟戊酸(MVA)的干预效应。方法采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定DNA合成,观察不同浓度Sim及MVA分别作用不同时间对CFsDNA合成功能的影响。结果 (1)CFs的3H-TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低,其中10-6和10-5mol／L Sim组的3H-TdR掺入率分别为(1175±202．66)、(771±164．86)cpm／2000细胞, 显著低于对照组的(1608±204．32)cpm／2000细胞(均P<0．01);(2)10-5mol／L Sim作用CFs 6、12、18、24、30、36、42、48 h, 随着Sim作用时间的延长,CFs的3H-TdR掺入率呈递减趋势,与时间呈明显的负相关(r=-919,P<0．01);(3)CFs的3H-TdR 掺入率随着MVA干预浓度的增加呈进行性上升,其中10-4、10-3 mol／L MVA 10-5 mol／LSim组3H-TdR掺入率分别为 (1612±308．57)、(1995±353．83)cpm／2000细胞,显著高于对照10-5mol/L Sim组的(771±164．86)cpm／2000细胞(P<0．01); (4)10-3 mol／L MVA分别作用CFs 6-48 h,CFs的3H-TdR掺入率随着MVA作用时间的延长而逐渐增加,呈明显的正相关(r=0．968,P<0．01)。结论 Sim呈浓度-时间依赖方式抑制CFs DNA的合成且可被MVA拮抗,提示Sim可抑制CFs 增殖,延缓心肌纤维化,其作用可能通过MVA途径实现。     

血管紧张素-(1-7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响.方法:分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定CFsⅠ,Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果: ① 0.1 μmol/L AVP作用24 h,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较无血清对照组(0.14±0.01)明显增加(P<0.01);0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后吸光度值逐渐降低,分别为0.22±0.01,0.21±0.01,0.18±0.01和0.16±0.01,均显著低于AVP组(P<0.01).② AVP组CFs的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.44±1.75)较对照组(5.40±0.67和10.82±2.40)明显增高(P<0.01);0.1 μmol/L Ang-(1-7)干预后S期百分率(8.52±0.70)和增殖指数(16.24±2.04)较AVP组降低(P<0.01).③ AVP刺激后CFs的Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别较对照组明显增高(P<0.01);给予0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后,胶原表达水平浓度依赖性的下降,均显著低于AVP组(P<0.05).结论: Ang-(1-7)具有抑制CFs增殖和胶原合成的作用.     

脂多糖诱导大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α表达时活性氧调控的作用

目的 探讨在脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达过程中活性氧(ROS)的作用及其信号分子机制.方法 以体外培养的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌细胞为实验模型,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α mRNA和蛋白表达水平;细胞内ROS水平采用ROS敏感的荧光探针二氯荧光素二乙酸(DCF-DA)测定.采用蛋白免疫印迹法测定心肌细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)亚型p38 MAPK的磷酸化水平来反映其活性.结果 (1)LPS组心肌细胞TNF-αmRNA和蛋白表达水平分别为(0.29±0.07)和(83.6±14.5)pg/mL,与对照组[(0.07±0.02)、(22.1±7.1)pg/mL]比较差异均有非常显著性意义(P＜0.01).在抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸(NAC)干预后,TNF-α mRNA水平(0.13±0.03)和蛋白含量(39.1±10.2)pg/mL与LPS组比较差异均有非常显著意义(P＜0.01).(2)LPS组心肌细胞二氯荧光素(DCF)荧光强度为83±15,与对照组比较(34±9)差异有非常显著意义(P＜0.01).在NAC干预后,DCF荧光强度(19±4)与LPS组比较明显降低,差异有非常显著性意义(P＜0.01).(3)LPS组心肌细胞p38 MAPK相对活性为(0.34±0.07),与对照组(0.18±0.05)比较差异有非常显著意义(P＜0.01).NAC干预组p38 MAPK活性明显降低(0.24±0.03),与LPS组比较差异有非常显著意义(P＜0.01);p38MAPK抑制剂预处理组TNF-α蛋白含量为(46.8±11.6)pg/mL,与LPS组(85.5±22.4)pg/mL比较差异有非常显著意义(P＜0.01).结论 LPS可上调心肌细胞内ROS生成,ROS介导的信号通路至少部分参与了LPS诱导TNF-α表达的调控过程,p38 MAPK可能是该信号通路的重要下游分子之一.     

辛伐他汀对大鼠心肌细胞肥大及PTEN表达的影响

目的观察抑癌基因-第十号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)在辛伐他汀调控心肌细胞肥大中的信号转导作用。方法以培养的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果⑴15%血清组干预24h后心肌细胞表面积[(1611.16±160.75)μm2]显著高于无血清对照组[(538.04±118.60)μm2](P<0.01);给予辛伐他汀和血清共同干预后,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞表面积呈递减趋势,其中10-5和10-6mol/L组分别为(799.84±167.70)μm2和(1076.88±199.28)μm2,均显著低于血清组(P<0.01)。⑵在15%血清刺激后,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率为(2360±106)cpm/well,明显高于无血清对照组[(1305±92)cpm/well](P<0.01);10-5和10-6mol/L辛伐他汀组[3H]-亮氨酸掺入率分别为(1707±101)cpm/well和(1962±125)cpm/well,均较血清组明显降低(P<0.01)。⑶随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞ANP的mRNA表达水平逐渐降低,其中10-5和10-6mol/L辛伐他汀组分别为0.29±0.03和0.40±0.03,与单纯血清干预组0.60±0.03比较明显降低(P<0.01)。⑷心肌细胞PTEN的mRNA和蛋白表达水平均随辛伐他汀浓度的增加而呈递增趋势,其中10-7、10-6、10-5mol/L辛伐他汀组PTEN mRNA表达水平为0.38±0.03、0.83±0.04和0.85±0.05,明显高于血清干预组(0.29±0.04)(P<0.05,P<0.01)。上述3组PTEN蛋白表达水平分别为39.25±3.41、46.35±1.78和47.22±2.39,也较血清组(32.21±4.06)显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论辛伐他汀能够抑制血清诱导的心肌细胞肥大,升高PTEN表达水平可能是其分子生物学机制之一。     

不同性别大鼠压力感受性反射的差异及其机制的实验研究

目的 探讨不同性别Sprague-Dawley(SD)大鼠压力感受性反射（BR）的差异及其机制。方法 以SD大鼠为实验模型,用生理记录仪同时记录血压和心率,测定BR功能,并采用免疫组化的方法测定颈动脉窦（CS）外诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的表达。结果 （1）雄性SD大鼠的BR能较雌鼠强,压力感受性反射敏感度（BRS）升高（P＜0．01）,但两者的平均动脉压无差异;（2）雌鼠CS的iNOS表达较雄鼠升高,CS处微量注射iNOS反义寡核苷酸（iNOS－ASODNA）后,雄、雌鼠CS的iNOS表达均有明显下降（P均＜0．01）,而且两性之间iNOS表达差异消失;（3）颈动脉窦处微量注射iNOS-ASODN后,雌鼠的BRS值明显升高（P＜0．01）,升高幅度较雄鼠明显（P＜0．01）,升高后的BRS值两性之间无差异（P＞0．05）：雄、雌鼠的加压反应明显降低（P＜0．01）,下降幅度两性相比较无差异（P＞0．05）;（4）CS处微量注射iNOS-ASODN对于基础平均动脉压无影响（P＞0．05）。结论 不同性别SD大鼠的BR功能存在差异,其机制与CS的iNOS一氧化氮（NO）系统有一定的关系。     

老年人低舒张压的收缩期高血压研究现状

《高血压综合防治研究》是国家卫生部和科技部重点支持的国家"十一五"科技支撑项目,赵连友教授是本课题的主要负责人之一,其在高血压的发病机制和防治研究方面的重要建树、研究成果本刊多次报道。本文就老年高血压患者中占较大比例的单纯性收缩期高血压患者的发病机制、临床特点、危害以及治疗对策等作一重点介绍。     

Ⅱ型糖尿病并发冠心病的临床和冠状动脉病变特点分析

目的 :探讨 型糖尿病 （DM）并发冠心病患者临床及冠状动脉病变的特点。方法 :分析经冠状动脉造影诊断的伴有 DM（35 4例 ）和不伴有 DM（12 2 2例 ）的冠心病患者临床表现和造影结果。结果 :与非 DM的冠心病患者相比 ,DM并发冠心病存在有更多的心血管危险因素 :高血压、血清甘油三酯异常、女性吸烟 ,且无症状心肌缺血者比例高。在冠状动脉病变特点方面 ,DM并发冠脉血管三支、C型病变发生率高 （35 .9% vs 2 7.6 % ;6 0 .6 % vs 4 8.7% ,均 P<0 .0 1） ,小血管病变及弥漫性血管病变较多见 （2 6 .3% vs 18.0 % ;32 .0 % vs 2 5 .1% ,均 P<0 .0 1） ,而单支、A型病变少 （34.5 % vs 4 1.8% ;7.3% vs 19.0 % ,均 P<0 .0 1）。结论 :并发 DM与不并发 DM的冠心病患者临床及冠脉病变有显著差异 ,前者多支冠状动脉病变、C型病变发生率高 ,冠脉病变分布于小血管多且病变复杂。